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Document 1899639
발 간 사
축산물 관리 업무가 1998년 당시 복지부에서 농림부로 환원된 지 벌써
10년이 넘었습니다. 그 동안 다사다난한 일들이 많았으나 이를 슬기롭게
처리해 나가면서 새로운 축산물 유형 신설, 최신 검사기법 도입 등 축산물의
성분규격 검사 업무에 많은 발전이 있었습니다.
최근 중국산 분유의 멜라민 오염 사건, 중국 발표 오남용 가능 식품
첨가물, 지속적인 이물 검출로 인해 축산물가공품의 안전성 관리가 사회적
문제로 부각되고 있습니다. 이에 정부에서는 신속하게 검사방법을 확립하여
해당 제품의 안전성을 확인한 바 있습니다.
동 편람은 축산물가공기준및성분규격 중 축산물 시험방법의 이화학
시험법과 최근 문제가 되어 확립한 시험법 중심으로 정리한 것입니다.
고시에서 규정하고 있는 유가공품, 식육가공품, 알가공품의 성분규격 시험법,
멜라민 시험법, 최근 이슈가 되었던 식품첨가물 시험법, 영양성분 표시성분
시험법으로 구성되어 있습니다.
축산물위생검사 현장에서 시험업무 담당자들이 동 편람을 참고하시어
시험업무를 수행하는데 활용하시기 바라며, 축산물가공품 이화학 시험결과
품질향상에 도움이 되기를 바랍니다.
2010년 10월
국립수의과학검역원장 이 주 호
목 차
축산물 성분규격 시험법 편람 - 화학분석편
Ⅰ. 축산물의 시험방법 총칙 ·
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II. 유가공품 시험법 ·
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2. 질소화합물 ·
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4. 당분 ·
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6. 비중 ·
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7. 산도 ·
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8. 조제유류 중 비타민 시험법 ·
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8.1 비타민 A ·
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8.3 비타민 B12 ·
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8.4 비타민 Bx ·
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8.5 판토텐산 ·
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8.6 비타민 C ·
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8.7 비타민 D ·
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8.8 비타민 K ·
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9. 조제유류 중 무기물 시험법 ·
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9.1 무기물 9종 ·
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9.2 요오드(I) ·
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·120
- i -
10. 인공감미료 ·
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·123
11. 조제유류 중 이물 및 탄화물 시험법 ·
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·129
12. 아플라톡신 M1 ·
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·135
13. 치즈 중 나타마이신 시험법 ·
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·141
III. 육가공품 시험법 ·
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·147
1. 아질산 이온 ·
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·149
2. 굴절률 ·
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·155
3. 비누화가 ·
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·157
4. 요오드가 ·
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·161
5. 부패육 시험법 ·
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·165
5.1 휘발성 염기질소 ·
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·166
5.2 Trimethylamine ·
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·171
5.3 유화수소 시험법 ·
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·175
5.4 암모니아 시험법 ·
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·178
6. 우지의 불용성불순물 ·
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·181
IX. 알가공품 시험법 ·
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·185
1. 원료알의 관능검사법 ·
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·187
V. 공통 시험법 ·
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·191
1. 수분 ·
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·193
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·199
2. 보존료 ·
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2.1 HPLC를 이용한 sorbic acid 및 benzoic acid 시험법 ·
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·200
2.2 GC를 이용한 sorbic acid, dehydroacetic acid 및 그 염류 시험법 ·
·205
2.3 GC를 이용한 Propionic acid 및 그 염류시험법 ·
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·211
2.4 HPLC를 이용한 보존료 동시분석법 ·
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·217
2.5 HPLC를 이용한 보존료 동시분석법(스크리닝법) ·
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·223
3. 산화방지제 ·
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·229
4. 착색료(타르색소) ·
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·236
4.1 여지․박층크로마토그래피법 ·
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·237
4.2 HPLC를 이용한 타르색소 시험법 ·
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·246
- ii -
5. 유해성 금속(납, 주석) ·
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·252
6. 이물 ·
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·258
7. 성상 ·
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·264
8. 진공도 ·
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·268
9. 산가 ·
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VI. 영양성분 표시사항 시험법 ·
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1. 열량 ·
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2. 탄수화물(당류) ·
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3. 단백질 ·
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4. 지방 ·
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·277
5. 포화지방 ·
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6. 트랜스지방 ·
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·281
7. 콜레스테롤 ·
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8. 나트륨 ·
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·290
VII. 식품첨가물 시험법 ·
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·291
1. 수단색소 ·
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2. 엑시드 오렌지(Acid orange, Orange Ⅱ) 색소 ·
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3. 붕산(Boric acid) ·
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4. 티오시안산나트륨 ·
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6. 과산화벤조일 ·
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VIII. 기타 시험법 ·
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·327
1. 멜라민(HPLC법) ·
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·329
2. 멜라민(LC/MS/MS법) ·
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3. 방사능 ·
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XI. 부록 ·
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1. 시약․시액 및 용량 분석용 규정시액 ·
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2. 용액과 농도 ·
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·352
- iii -
I. 축산물의 시험방법 총칙
Ⅰ. 축산물의 시험방법 총칙
축산물의 가공기준 및 성분규격 제3. 축산물 시험방법 Ⅰ. 총칙, Ⅱ. 검사시료의
채취 및 취급방법 중 일부를 발췌한 것임
Ⅰ. 총
칙
1. 축산물의 검사는 별도의 규정이 없는 한 원칙적으로 이 방법에 따라 실시한다.
다만 여기서 일반시험법이라 함은 축산물의 전 검사방법중 대표적인 방법을
뜻한다.
2. 이 시험법에 규정되어 있지 않은 성분 또는 물질을 검사할 때는 그 검사방법에
관한 참고문헌 등을 기재하여야 하며, 이 시험법을 변용했을 때도 그 사유와
변경내용을 성적서에 기재하여야 한다.
3. 계량 등의 단위는 국제 단위계(SI)에 따르며 다음의 약호를 쓴다.
가. 길이 : m, ㎝, ㎜, ㎛, ㎚
나. 용량 : ℓ, ㎖, ㎕
다. 중량 : ㎏, g, ㎎, ㎍, ng
라. 넓이 : ㎠
마. 열량 : kcal, kj
4. 중량백분율을 표시할 때에는 %의 기호를 쓴다. 다만, 용액 100㎖중의 물질
함량(g)을 표시할 때에는 w/v%로, 용액 100㎖중의 물질함량(㎖)을 표시할 때
에는 v/v%의 기호를 쓴다. 중량백만분율을 표시할 때에는 ㎎/㎏의 약호를 사
용하며 ppm의 약호를 쓸 수 있으며, ㎎/ℓ 및 ㎖/㎥도 사용할 수 있다.
5. 온도의 표시는 셀시우스법(℃)을 쓴다.
6. 표준온도는 20℃, 상온은 15～25℃, 실온은 1～35℃, 미온은 30～40℃로 한다.
7. 따로 규정이 없는 한 찬물은 15℃이하, 온탕은 60～70℃, 열탕은 약 100℃의
물로 하며 “수욕상 또는 수욕중에서 가열한다”라 함은 따로 규정이 없는
한 그 가열온도를 약 100℃로 하되, 수욕대신 약 100℃의 증기욕을 쓸 수 있다.
8. 찬 곳(냉소)이라 함은 따로 규정이 없는 한 0～15℃의 장소를 말한다.
정밀검사발전연구회
3
Ⅰ. 축산물의 시험방법 총칙
9. 냉동이라 함은 별도의 규정이 없는 한 -20℃의 온도를 뜻한다.
10. 시험에 쓰는 물은 따로 규정이 없는 한 증류수 또는 정제수로 한다.
11. 용액이라 기재하고 그 용매를 표시하지 아니하는 것은 수용액을 말한다.
12. 감압은 따로 규정이 없는 한 15㎜Hg이하로 한다.
13. 액성을 산성, 알카리성 또는 중성으로 표시한 것은 따로 규정이 없는 한
리트머스지 또는 pH 미터기(유리전극)를 써서 시험한다. 액성을 상세히 나
타낼 때에는 pH값을 쓴다. 또한, 강산성은 pH3.0이하, 약산성은 pH3.0～5.0,
미산성은 pH5.0～6.5, 중성은 pH6.5～7.5m 미알카리성은 pH7.5～9.0,
약알
카리성은 pH9.0～11.0, 강알카리성은 pH 11.0이상을 말한다.
14. 용액의 농도를 (1→5), (1→10), (1→100)등으로 나타낸 것은 고체시약 1g 또는
액체시약 1㎖를 용매에 녹여 전량을 각각 5㎖, 10㎖, 100㎖등으로 하는 것
을 뜻한다. 또한 (1+1), (1+5)등으로 기재한 것은 고체시약 1g 또는 액체시
약
1㎖에 용매 1㎖ 또는 5㎖를 혼합하는 비율을 나타낸다. 용매는 따로 표시
되어 있지 않으면 물을 써서 희석한다.
15. 혼액을 (1 : 1), (4 : 2 : 1)등으로 나타낸 것은 액체시약의 혼합용량비 또는
고체시약의 혼합중량비를 말한다.
16. 방울수(적수)를 측정할 때에는 20℃에서 증류수 20방울을 적하할 때 그 무게가
0.90～1.10g이 되는 기구를 쓴다.
17. 네슬러관은 안지름 20㎜, 바깥지름 24㎜, 밑에서부터 마개의 밑까지의 길이
20㎝의 무색유리로 만든 공전평저 시험관으로서 50㎖의 것을 쓴다. 또한 각 관의
눈금의 높이의 차는 2㎜이하로 한다.
18. 밀봉용기라 함은 취급 또는 저장중에 외기와 접촉하지 않도록 내용물을 보호
하는 용기를 뜻한다.
19. 차광이라 함은 광선을 침투시키지 않는 것을 뜻한다.
20. 묽은 산 또는 알카리용액이라 함은 별도의 규정이 없는 한 약 2N농도의 산
또는 알카리용액을 뜻한다.
21. 시험에 있어 규정된 값(규격치라 한다)과 시험에서 얻은 값(실험치라 한다)과의 비
4
정밀검사발전연구회
Ⅰ. 축산물의 시험방법 총칙
교에 의하여 적부판정을 할 때에, 실험치는 규격치보다 한자리수까지 더 구
하여 더 구한 한자리수를 사사오입해서 규격치와 비교판정한다. 또 규격치
a～b라고 기재된 것은 a이상 b이하임을 뜻한다.
22. 무게를 “정밀히 단다”라 함은 달아야 할 최소단위를 고려하여 0.1㎎, 0.01
㎎ 또는 0.001㎎까지 다는 것을 말한다. 또 무게를 “정확히 단다”라 함은 규
정된 수치의 무게를 그 자리수까지 다는 것을 말한다.
23. 검사시료를 취하는 양에 “약”이라고 한 것은 따로 규정이 없는 한 기재
량의 90 ～ 110%의 범위내에서 취하는 것을 말한다.
24. 건조 혹은 강열할 때 “항량”이라고 기재한 것은 다시 계속하여 1시간 더 건
조 혹은 강열할 때에 전후의 칭량치가 전회 측정한 무게의 0.1%이하임을 말한
다. 다만, 칭량차가 화학천칭을 썼을 때 0.5㎎이하, 마이크로 화학천칭을 썼
을 때 0.01㎎이하인 경우에 항량으로 본다.
25. 데시케이타의 건조제는 따로 규정이 없는 한 실리카겔로 한다.
26. 시험은 따로 규정이 없는 한 상온에서 실시하고 조작후 30초 이내에 관찰한다.
다만, 온도의 영향이 있는 것에 대하여는 표준온도에서 행한다.
27. “타르색소”라 함은 타르색소의 알루미늄레이크를 포함한 것을 말한다.
28. 이 축산물의 가공기준 및 성분규격에 정하여진 가공기준 및 성분규격에 대한
적‧부판정은 이 축산물시험방법에서 규정한 시험방법으로 실시하여 판정하는
것을 원칙으로 한다. 다만, 이 축산물시험방법에서 규정한 시험방법보다 더
정밀하다고 인정된 때에는 그 방법을 사용할 수 있고, 특히 미생물 및 독소 등에
대한 시험에는 상품화된 Kit를 사용할 수 있으나, 그 결과에 대하여 의문이
있다고 인정될 때에는 규정한 방법에 의하여 시험하고 판정하여야 한다.
29. 이 축산물시험방법에서 정하여진 시험방법이 없는 경우에는 타법령에서
정했거나 공인시험방법(CODEX규정, AOAC의 시험방법 등)에 따라 시험할
수 있다.
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Ⅰ. 축산물의 시험방법 총칙
Ⅱ. 검사시료의 채취 및 취급방법
1. 검사시료채취의 의의
검사시료의 채취는 축산물가공처리법에 따라서 검사관이 검사대상으로부터
일부의 검사시료를 채취하여 기준‧규격 적합여부, 오염물질 등에 대한 안전
성검사를 실시하여 그 검사결과에 따라 행정조치 등이 이루어지게 되므로 검사대
상 선정, 검사시료채취‧취급‧운반‧시험검사 등은 효율성을 확보하면서 과학적
인 방법으로 수행하여야 한다. 따라서 검사시료를 취하여 축산물위생검사기
관에 검사의뢰하는 것은 중요한 의의를 가지므로 검사관은 검사시료채취 및
취급방법 등에 대하여 충분한 지식을 가지고 그 직무를 수행하여야 한다.
2. 용어의 정의
가. 검
체 : 검사대상으로부터 채취된 시료를 말한다.
나. 검사시료단위 : 검사목적으로 채취되는 한 포장단위, 한 포장단위의 일
부 또는 여러 포장단위를 합친 것으로서 검사시료발췌
대상이 되는 단위를 말한다.
다. 검사대상 : 동일조건에서 생산‧처리‧가공되어 그 유형이 같은 축산물을 말한다.
라. 벌크(Bulk) : 최종소비자에게 그대로 유통 판매하도록 포장되지 아니한
검사대상을 말한다.
3. 검사시료채취의 일반원칙
가. 검사시료의 채취는 축산물가공처리법 제13조, 같은법 시행령 제14조 및
같은법 시행규칙 제19조에서 규정하는 자가 수행하여야 한다.
나. 검사시료는 검사목적, 검사항목 등을 참작하여 검사대상 전체를 대표할
수 있는 최소한도의 양을 수거하여야 한다.
다. 검사시료는 제조번호, 제조년월일, 유통기간이 동일한 것을 검사대상으로 하고
이와 같은 표시가 없는 것은 품종, 제조회사, 기호, 수출국, 수출년월일,
도착년월일, 적재선, 화차, 포장형태 및 외관 등의 상태를 잘 파악하여
그 축산물의 특성 및 검사목적을 고려하여 가능한한 동일한 검사시료를
채취하도록 한다.
라. 축산물을 포장하기전 또는 포장된 것을 개봉하여 검사시료로 채취하는 경
우에는 이물질의 혼입, 미생물의 오염 등이 없도록 주의하여야 한다.
마. 채취한 검사시료는 봉인하여야 하며 파손하지 않고는 봉인을 열 수 없도록
하여야 한다.
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정밀검사발전연구회
Ⅰ. 축산물의 시험방법 총칙
4. 검사시료의 채취 및 취급방법
검사시료 채취시에는 검사목적, 대상축산물의 종류와 물량, 오염가능성, 균
질여부 등 검사시료의 물리‧화학‧생물학적 상태를 고려하여야 한다.
가. 검사시료의 채취방법
(1) 검사대상축산물이 불균질할 때
검사시료가 불균질한 때에는 일반적으로 다량의 검사시료가 필요하나 검사
의 복잡성, 효율성, 경제성 등으로 부득이 소량의 검사시료를 채취할 수 밖
에 없다. 따라서 이 경우에는 외관, 보관상태 등을 종합적으로 판단하여
의심스러운 것을 대상으로 검사시료를 채취할 수 있다.
(2) 검사항목에 따른 균질여부 판단
검사시료의 균질, 불균질은 검사항목에 따라 달라질 수 있다. 어떤 검사대
상축산물의 선도판정에 있어서는 그 축산물이 불균질하더라도 이에 함유된 중
금속, 식품첨가물 등의 성분은 균질한 것으로 보아 검사시료를 채취할 수 있다.
(3) 포장된 검사시료의 채취
(가) 깡통, 병, 상자 등 용기‧포장에 넣어 유통되는 축산물은 그대로 채취한다.
(나) 대형 용기‧포장에 넣은 축산물은 전체를 대표할 수 있는 일부를 채취한다.
(4) 냉장, 냉동 검사시료의 채취
냉장 또는 냉동 축산물을 검사시료로 채취하는 경우에는 그 상태를 유
지하면서 채취하여야 한다.
(5) 미생물검사를 요하는 검사시료의 채취
(가) 검사시료를 채취‧운송‧보관하는 때에는 채취당시의 상태를 유지할
수 있도록 밀폐되는 용기‧포장 등을 사용하여야 한다.
(나) 검사시료를 소분 채취할 경우에는 멸균된 기구‧용기 등을 사용하
여 무균적으로 행하여야 한다.
(다) 검사시료는 부득이한 경우를 제외하고는 정상적인 방법으로 보관‧
유통중에 있는 것을 채취하여야 한다.
(6) 검사항목에 따른 검사시료 채취 주의점
(가) 수분
증발 또는 흡습 등에 의한 수분 함량 변화를 방지하기 위하여 검사
시료를 밀폐 용기에 넣고 가능한 한 온도 변화를 최소화하여야한다.
(나) 산가 및 과산화물가
빛 또는 온도 등에 의한 지방 산화의 촉진을 방지하기 위하여 검
사시료를 빛이 차단되는 밀폐 용기에 넣고 채취 용기내의 공간 체
적과 가능한 한 온도 변화를 최소화하여야 한다.
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Ⅰ. 축산물의 시험방법 총칙
나. 검사시료의 취급방법
(1) 채취된 검사시료는 오염, 파손, 손상, 해동, 변형등이 되지 않도록 주
의하여 검사실로 운반하여야 한다.
(2) 검사시료가 장거리로 운송되거나 대중 교통으로 운송되는 경우에는
손상되지 않도록 특히 주의하여 포장한다.
(3) 냉동검사시료의 취급
(가) 냉동검사시료는 냉동상태에서 운반하여야 한다.
(나) 냉동장비를 이용할 수 없는 경우에는 드라이아이스 등으로 냉동
상태를 유지하여 운반할 수 있다.
(4) 냉장검사시료의 취급
냉장온도를 유지하면서 얼지 않도록 하여야 한다.
(5) 미생물검사용 검사시료의 취급
(가) 부패‧변질 우려가 있는 검사시료
미생물학적인 검사를 요하는 검사시료는 멸균용기에 무균적으로 채취
하여 당해 축산물의 냉장보관 온도(5±3℃)를 유지하면서 조속히 축
산물위생검사기관에 운반하여 시료채취 후 36시간 이내에 검사를 실
시하여야 한다. 부득이한 사정으로 저온을 유지할 수 없거나 조속히 운반
하지 못하였을 때에는 재수거하거나 채취일시 및 그 상태를 기록하여
축산물위생검사기관에 검사 의뢰한다.
(나) 부패‧변질의 우려가 없는 검사시료
미생물검사용 검사시료일지라도 운반과정중 부패‧변질우려가 없는 검
사시료는 반드시 저온에서 운반할 필요는 없으나 2차 오염, 검사시
료의 파손 등에 주의하여야 한다.
(다) 얼음 등을 사용할 때의 주의사항
얼음 등을 사용하여 저온을 유지하는 때에는 얼음 녹은 물이 검사시
료에 오염되지 않도록 주의하여야 한다.
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II. 유가공품 시험법
II. 유가공품 시험법
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조회분
회분이란 식품을 태우고 남은 재를 말하는 것으로서, 재의 성분은 식품중에
함유되어 있는 무기질의 양이라고 말 할 수도 있으나, 이 외에도 탄소 일부가 남
아 있는 경우가 있으므로 무기질이라 하지 않고 회분이라 한다.
식품을 550~600 ℃로 가열하면 유기물은 산화, 분해되어 많은 가스를 발생
하고 타르(tar) 모양으로 되며 점차로 탄화한다. 탄소는 더욱 산화되어 탄산 가스
로 되어 방출되지만, 인산이 많은 시료에서는 가열하면 양이온과 결합하지 않고
용융상태로 되며, 또한 산소의 공급이 불충분하게 되어 오히려 회화의
진행이
어렵게 된다. 다수의 식품에서는 무기질의 염소이온 등 휘발성 무기물은 휘산 되
기도 하고, 양이온의 일부는 공존하는 음이온과 반응하여 인산염, 황산염 등으로
되기도 하며, 유기물 기원의 탄산염으로 되기 때문에 조회분이라고 한다.
1. 분석원리
시료를 회화용기에 넣고 직접 500~600 ℃에서 회화시킨 후 그 감량의 함량 값을
계산하는 방법이다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
가공치즈 : 가공치즈의 유고형분(유회분+유지방+유단백)을 계산할 때 필요한
검사이다.
3. 장치
3.1. 회화용기(crucible)
3.2. 회화용기 집게
3.3. 면장갑
3.4. 회화로(Electric muffle furnace)
3.5. Hot plate
3.6. 데시케이터
3.7. Balance : 분석저울 0.1 mg까지, 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
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II. 유가공품 시험법
4. 시험방법
4.1 준비
4.1.1. 회화용기 준비
깨끗한 회화용기를 회화로에서 500~550 ℃로 2시간 이상 가열한 다음
데시케이터로 옮겨 실온으로 식힌다.
4.2 시험법
4.2.1. 항량된 회화용기의 무게를 정밀하게 단다.
4.2.2. 검사시료를 항량된 회화용기에 3 g 씩 정밀하게 달아 넣는다.
4.2.3. Hot plate에서 검은 색으로 탄화될 때까지 가열한다.
4.2.4. 회화로에 옮겨 넣고 500~550 ℃에서 3~4시간 가열하여 백색~회백색의
회분이 얻어질 때까지 계속 가열한다.
4.2.5. 회화가 끝나면 가열을 그치고 200 ℃가 될 때까지 회화로에서 그대로
식힌 다음 데시케이터로 옮겨 실온으로 식힌다.
주의) 회분이 갈색을 띠면 철분, 청록색을 띠면 망간, 미청색을 띠면 구리가
함유되어 있음을 알 수 있다.
4.2.6. 회화된 용기의 무게를 정밀하게 잰다.
4.2.7. 회분의 값을 계산한다.
5. 결과
5.1. 계산
회분( %) =
  
× 100

w0 : 항량이 된 회화용기의 무게(g)
w1 : 회화된 회화용기의 무게(g)
s : 검사시료의 무게(g)
6. 참고문헌
6.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 2010-2호).
6.2. 표준식품분석학(2010), 지구문화사.
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II. 유가공품 시험법
붙임 1. 데이터 및 결과 예
1. 시료 : 연성가공치즈
2. 건조온도 : 550 ℃
3. 회화용기 항량 측정(w0)
: 4시간 이상 회화, 30분 방냉 후 칭량 : 37.8132 g
4. 시료량 측정(s) : 3.2500 g
5. 시료 회화 후 회화용기 측정(w1) : 38.0281 g
6. 회분 계산
회분( %) =
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  
× 100 = 6.6123 %

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II. 유가공품 시험법
붙임 2. 검사흐름도
시료 채취
◦ W0 : 항량된 회화용기
↓
탄화
(hot plate)
↓
회화
(회화로)
◦ 550~600 ℃, 3~4시간
↓
방냉
(데시케이터)
◦ 실온에서 방냉(약 30분 소요)
↓
칭량
◦ 항량(시료간 오차 0.001 g 이내)이
될 때까지 회화·방냉·칭량 반복
↓
계산 및 결과판정
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II. 유가공품 시험법
2 질소화합물
조단백질
식품을 구성하는 각 성분 중에서 질소를 함유하고 있는 것은 대부분이 단백질
이다. 단백질은 다른 성분과 달리 평균 16 %의 질소를 함유하고 있는 것이
특징이나, 질소를 함유하고 있다하여 반드시 단백질이라고는 할 수 없다. 식품
중에는 아미노산, amide화합물, 암모니아화합물, purine염기, creatine 등의 여러
가지 비단백태의 질소화합물이 함유되어 있으며, 이들은 종류에 따라서 그 조
성이 다르므로 이것을 조단백질(crude protein)이라고 한다.
아미노산 질소
아미노산 질소란 단백질이 아미노산으로 분해되는 과정에서 생기는 중간
물질로 된장의 구수한 맛을 내며, 정량법으로는 아미노산의 카르복실기를 측
정하여 아미노산 질소의 함량을 구하는 방법인 홀몰(Formol) 법을 사용한다.
2.1 조단백
1. 분석원리
유기물 중에 존재하는 질소를 진한 황산으로 처리하여 시료중에 존재하는
유기물을 분해시키고 암모늄염을 만든 후 강한 알칼리 용액(32 % NaOH)을 투
입, 암모늄염을 NH3로 유리하여 정량적으로 회수한 다음 이 후 농도와 부피를
알고 있는 산용액에 흡수된 NH3를 0.1 N HCl로 적정에 의하여 정량하고, 시료
에 따른 질소계수를 곱한 후 조단백질 함량을 결정하는 방법이다.
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II. 유가공품 시험법
< 킬달질소정량법의 모식도>
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
가공치즈, 조제유류, 유단백가수분해식품
2.2. 기준
유
형
조제유류
(기타조제분유,
기타조제우유 제외)
조제분유
조제우유
성장기용조제분유
성장기용조제우유
유단백가수분해식품
유청단백분말
가공치즈
기
준
9.0~20.0 %
12.0~27.5 %
표시함량 이상이어야 한다.
유고형분의 35 % 이상
유고형분(유회분+유지방+유단백)
값을 구하기 위해 필요
주의) 조제우유는 수분함량을 감안하여 계산한다.
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정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
3. 장치
3.1. Buchi Digestion tube
3.2. Buchi Digestion tube rack
3.3. 유산지
3.4. Buchi 분해장치 K-435
3.5. Buchi 유해가스 중화장치 B-414
3.6. Buchi 분해조절장치 B-436
3.7. Buchi auto Kjeldahl 증류장치 K-370
3.8. Buchi 자동시료주입장치
3.9. pH electrode : Buchi 043370
3.10. Balance : 분석저울 0.1 mg까지, 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. 98 % H2SO4
4.1.2. Kjeldahl tablet (K2SO4 : CuSO4·5H2O = 9 : 1) : 분해촉매제
(Merck 1.15348.1000)
4.1.3. 0.1 N HCl
4.1.4. 32 % NaOH
4.1.5. pH callibration용 pH7, pH4 용액
4.1.6. Boric acid
4.1.7. Bromothymol blue
4.1.8. Sodium carbonate
4.1.9. Ammonium dihydrophosphate
4.1.10. 3차 증류수
4.2. 시액
4.2.1. 중화액 : Na2CO3 600 g을 3 L 플라스크에 넣은 후 증류수 2 L를 넣고 hot
plate에서
충분히
용해시킨
후
증류수로
용량을
채우고
bromothymol blue 100 ㎎을 넣어 발색 시킨다.
주의) 중화액은 사용중 색이 변하면 다시 제조하여 사용한다.
4.2.2. 2 % H3BO3 : Boric acid 80 g을 4 L플라스크에 넣은 후 증류수 2 L를 넣어
hot plate에서 충분히 녹인 후 증류수로 4 L까지 채운다.
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II. 유가공품 시험법
5. 시험방법
5.1. 준비
5.1.1. 시료(가공치즈 0.6 g, 조제분유 0.09 g등)를 유산지에 정밀히 달아 싼 다음
digestion tube에 넣는다.
주의) 채취 시료 중의 질소의 함량이 10~100 mg이 되도록 한다.
5.1.2. 시료를 넣은 digestion tube에 분해촉매제 Kjeldahl tablet 2개를 각각
넣는다.
주의) Blank tube에는 Kjeldahl tablet 1개를 넣는다.
5.1.3. 98 % H2SO4 20 mL를 각 tube에 주입한다.
주의) H2SO4이 튀지 않도록 tube 벽면 쪽으로 흘려 넣는다.
Table 1. 단백질 함량에 따른 시료채취량
단백질 함량( %)
시료채취량(g)
5 % 이하
5.0~1.0 g
5~30 %
0.7~1.0 g
30 % 이상
0.7 g이하
분말류
30 % 이상
0.07~0.1 g
우유류
4 % 이하
10 mL
구분
고체시료
주의) 분말류라 함은 유청단백분말이나 유단백가수분해식품 등 조단백 함량이
높은 시료를 의미하며, 조제분유는 고체시료에 준하여 시료를 채취한다.
5.2. 공시험
5.2.1. Blank는 시료 없이 유산지만 접어 넣고, 시료와 동일하게 전처리한다.
5.3. 시료전처리
5.3.1. 분해
- 유해가스 중화장치(Scrubber ; 분해시 발생하는 gas를 흡수하기 위함)와
연결되어 있는 분해 장치에 시료가 든 tube를 장착한다.
- 분해조절장치에 세팅되어 있는 프로그램을 작동시킨다.(저온에서부터
단계별로 20분 이상 시간을 두며 온도를 서서히 상승시킴.)
- 분해가 완료되면 상온까지 방냉한 후 증류장치로 옮긴다.
주의) 분해액의 색깔이 투명한 옥색으로 변해야 한다.
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II. 유가공품 시험법
Table 2. 분해조절장치 온도조건
시간(분)
10
10
15
60
30
구분
50 %
70 %
80 %
100 %
cool
6. 기기분석조건
6.1. 증류, 흡수 및 적정
6.1.1. 냉각수를 충분히 공급한다.
주의) Kjeldahl 증류장치가 연결되어 있는 개수대의 수도꼭지를 최대로 열어
놓는다.
6.1.2. Digestion tube를 자동시료주입장치에 장착한다.
6.1.3. Control panel display상의 status가 Ready가 되면 Preheating, pH
calibration, Priming을 차례로 실시한다.
Preheating
․ 시료 분석 전 glass part, tube의 예열 목적으로 증류만 3~4회 실시
․ Key pad의 Mode 키를 눌러서
Operator→System preparation→Preheating 선택하여 실시
pH calibration
․ Buffer 1(pH 7), Buffer 2(pH 4)를 이용한다.
․ Slope : 100 % ± 0.5 이면 정상
․ Zero point pH : 6.5~7.2 이면 정상
․ Key pad의 Mode 키를 눌러서
Operator →System preparation→pH calibration 선택하여 실시
Priming
․ 시료 없이 검사과정(증류, 적정)을 동일하게 시험
․ Key pad의 Mode 키를 눌러서
Operator →System preparation→Priming 선택하여 실시
6.1.4 시료 분석 전 시료와 함께 전처리한 blank를 분석한 후 시료를 분석한다.
Rack 설정
․ Key pad의 Mode 키를 눌러서 Configurator →Rack →New
→Default Group, User 입력 →Page를 두 번 누름 →Data tab
→Name 입력, Type 20 선택
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II. 유가공품 시험법
시료정보입력
․ Rack Sampler의 각 tube에 blank test와 sample test 항목을 입력
하여야 한다.
․ Key pad의 Mode 키를 눌러서 Configurator →Rack →설정한 Rack
이름 찾기 →Tab키를 눌러 1번 tube 선택, enter키 눌러 시료정보
(시료이름, 시료무게, 시료유형[Blank, Sample, Reference 등], Factor,
Method)입력 →Save →Next(tube) →다른 시료가 있는 경우 같은
방법으로 입력
Table 3. 시료정보 입력예시
[Tube 1]
◇ Name: Blank
◇ Type: Blank
◇ Method: Crude Protein
◇
◇
◇
◇
◇
[Tube 2]
Name: IFSR07010001-01
Weight: 0.6000 g
Type: Sample
Protein factor: 6.38
Method: Crude protein
6.1.5. 시료를 분석한다.
Determination
․ Key pad의 Mode 키를 눌러서 Operator →Determination
→Rack with sampler →설정한 Rack 이름 선택
→Display 하단의 Run 버튼을 눌러서 실험을 시작한다.
결과 확인 및 출력
․ Key pad의 Mode 키를 눌러서 Configurator →Data manager
→Result →설정한 Rack 이름 선택 →결과 확인
→하단의 Print 선택 →2. complete form 으로 출력
6.2. Reference 물질(Ammonium dihydro. phosphate등)을 이용한 기기의 점검
6.2.1. Reference물질을 0.10 g을 정밀히 달아 digestion tube에 넣고 증류수를
10 mL 넣는다.
6.2.2. 6.1.4의 방법으로 Rack 설정 및 시료정보를 입력한다.
표준물질 정보입력
․ Key pad의 Mode 키를 눌러서 Configurator → Rack
→Reference Substances →표준물질 정보 입력 →Save
20
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II. 유가공품 시험법
표준물질 정보입력 예시
․ Name : Ammonium dihydro. phosphate
․ Target value : 12.18 % N
․ Lower Recovery limit : 99.0 %
․ Upper Recovery limit : 102.0 %
6.2.3 6.1.5의 방법으로 표준물질을 분석하고 결과를 확인하여 기기의 정상여
부를 확인한다.
6.3. 분석조건
6.2.1. 증류수 양 : 60 mL
6.2.2. 32 % NaOH 양 : 100 mL
6.2.3. 반응시간 : 15초
6.2.4. 2 % Boric acid 양 : 60mL
6.2.5. 증류시간 : 5분
7. 결과
7.1. 계산
분석 장치에서 자동으로 계산되어 출력된다.
조단백질( %) =
( B - A) ×질소계수×0.0014 × 1000
시료무게 ( g)
100
A : Blank 검사에 소모된 NaOH 량(mL)
B : 시료적정에 소모된 NaOH 량(mL)
0.0014 : 1 N NaOH 용액 1㎖에 해당하는 N량(g)
질소계수 : 6.38
8. 참고문헌
8.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 제2010-2호).
8.2. Nutrition 분야 세미나 자료(2006), 화신기계상사.
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21
II. 유가공품 시험법
붙임 1. 결과출력물
22
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II. 유가공품 시험법
붙임 2. 검사흐름도
시료 채취
◦ Digestion tube
↓
Kjeldahl tablet
98 % H2SO4 20 mL
◦ 시료 : Kjeldahl tablet 2개
◦ 공시료 : Kjeldahl tablet 1개
↓
전처리(분해)
◦ Buchi 분해장치 K-435,436
↓
기기 분석
◦ Buchi auto Kjeldahl 증류장치
K-370
↓
계산 및 결과판정
정밀검사발전연구회
23
II. 유가공품 시험법
2.2 아미노산성 질소
1. 분석원리
아미노산은 양성전해질이므로, 수용액 중에서 산이나 알카리로 직접 적정할
수 없다. 그러나 중성수용액에서 아미노산에 formaldehyde를 작용시키면
amino기와 formaldehyde가 반응하여 amino기의 염기성이 없어지고 아미 노
산은 carboxyl기만 남아 산성을 나타내므로 알카리 표준용액으로 적정하여
아미노산질소를 구할 수 있다. 이 방법은 SӦrensen에 의하여 고안된 것으로
SӦrensen의 홀몰(Formol)적정법이라고 한다.
R-CH-COOH
NH2
amino acid
R-CH-COOH
N=CH2
+
HCHO
+
formaldehyde
NaOH
↔
→
R-CH-COOH
+ H2O
N=CH2
methylene 화합물
R-CH-COONa
+ H2O
N=CH2
2. 검사 대상 및 기준
2.1. 검사대상
유단백가수분해식품(유단백가수분해물, 유단백가수분해물가공식품)
2.2. 기준 : 표시함량 이상
3. 장치
3.1. pH meter
3.2. Balance : 분석저울 0.1 mg까지, 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. Formaldehyde, 35 %
4.1.2. 1 % Phenolphthalein solution
4.1.3. Sodium hydroxide 0.1 N
4.1.4. 3차 증류수
4.2. 시액
4.2.1. 중화 Formaldehyde : Formaldehyde, 35 %을 0.1 N sodium hydroxide로
적정하여 pH 8.5로 맞춘다.
24
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
5. 시험방법
5.1. 시료 5 g을 칭량 후 증류수(온도 : 80 ℃)를 100 mL vol. flask에 80 mL정도
넣어 magnetic bar를 이용해 30분정도 용해하여 실온에서 식힌 후 100
mL까지
증류수로 용량을 맞춘다.
5.2. 20 mL씩 100 mL 비이커에 옮긴다.(20 mL씩 두개)
5.3. Sodium hydroxide 0.1 N로 pH 8.5까지 적정한다.
5.4. 중화 Formaldehyde 15 mL를 넣고 60초간 정체시킨다.
5.5. Sodium hydroxide 0.1 N로 pH 8.5까지 다시 적정한다.
6. 결과
6.1. 계산
증류수(blank)를 이용하여 6.5의 소모량에서 감하나 일반적으로 blank가
zero이기에 생략) 동일 시료를 2개 검사하여 평균값을 결과 값으로 한다.
아미노산질소( %) =
S×F×0.0014×D×100
시료량 ( g)
정량 시 S는 절차 중 5.5에 소모되는 량
S : Sodium hydroxide 0.1 N의 소모 mL량
F : Sodium hydroxide 0.1 N의 factor
D : 희석배수(100/20)
0.0014 : Sodium hydroxide 0.1 N 용액1 mL에 해당하는 질소량(g)
7. 참고문헌
7.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
7.2. 식품분석학(2010), 지구문화사.
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25
II. 유가공품 시험법
붙임 1. 검사흐름도
시료 채취
↓
용해
↓
20 mL씩 분주
↓
적정
↓
중화포르말린 첨가
↓
재적정
↓
계산 및 결과판정
26
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
3
지질
조지방
지방질은 물에 녹지 않고 ether, petroleum ether, chlorform, acetone 등의
유기 용매에 녹는 화합물이다. 식품의 지방질은 일반적으로 ether로 추출하여
정량 하나 ether에 녹는 것은 순수한 지방만이 아니고 시료중의 색소, wax,
alkaloid, 유기산, 지용성 vitamin등도 용출된다. 이러한 방법으로 정량 되는 것
을 조지방(crude fat) 이라고 한다.
뢰제 ․ 곳트리브(RӦse-Gottlieb)법
비교적 지방질 함량이 높고 액상 또는 유상의 식품에 응용된다. 시료에
암모니아를 가해서 단백질과 지질의 결합을 이완시키고 ether와 petroleum ether의
혼합액으로 액체 추출하여 무게를 잰 후 지방의 양을 계산하는 방법이다.
리놀레산
리놀레산(linoleic acid, C18:2)은 2개의 이중결합을 가지는 불포화 지방산으로
동물체내에서는 인지질을 구성하는 지방산으로 소량 발견되며, 동물 중에는 합
성할 수 없어 필수 지방산으로 요구되기도 한다.
낙산가
우유의 지방은 저급지방산의 함량이 많고 낙산(butyric acid)을 함유하는 등의
특징이 있다. 보통 우유의 지방은 낙산가가 18~22인데, 이것보다 낮은 경우에는
지방산 이외의 지방이 혼입되었다고 할 수 있다.
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27
II. 유가공품 시험법
3.1 조지방 (뢰제 ․ 곳트리브법)
1. 분석원리
1.1. 뢰제․곳트리브법
비교적 지방질 함량이 높고 액상 또는 유상의 시료에 응용된다. 시료에
암모니아를 가해서 단백질과 지질의 결합을 이완시키고 ether와 petroleum
ether의 혼합액으로 액체 추출하여 무게를 잰 후 지방의 양을 계산하는 방법이다.
1.2. 산분해법
고상의 시료에 응용되며, 물에는 녹지 않지만 산에 의해 가수 분해되어 액상이
되는 시료를 진한 염산(HCl)으로 분해시킨 다음에 뢰제․곳트리브법과 동일하게
ether, petroleum ether로 추출하여 지방을 정량하는 방법이다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
우유류, 저지방우유류, 유당분해우유, 가공유, 산양유, 발효유, 농축유, 유크림
류, 버터류, 자연치즈, 가공치즈, 분유류, 조제유류, 아이스크림류, 아이스크림분
말류, 아이스크림믹스류
2.2. 기준
2.2.1. 우유류, 유당분해우유 : 3.0 %이상
2.2.2. 저지방우유류, 저지방가공유, 저지방유당분해우유 : 2.0 % 이하
2.2.3. 가공유 : 2.7 % 이상
2.2.4. 산양유 : 3.2 % 이상
2.2.5. 발효유류
발효버터유 : 1.5 % 이하
크림발효유, 농후크림발효유 : 8.0 % 이상
2.2.6. 농축유류
농축우유, 가공연유 : 6.0 % 이상
가당연유 : 8.0 % 이상
2.2.7. 유크림류
유크림 : 30.0 % 이상
가공유크림 : 18.0 % 이상
분말유크림 : 50.0 % 이상
28
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II. 유가공품 시험법
2.2.8. 버터류
버터 : 80.0 % 이상
가공버터 : 30.0 % 이상
버터오일 : 99.6 % 이상
2.2.9. 자연치즈
경성치즈 : 24.0 % 이상
반경성치즈 : 9.8 % 이상
연성치즈 : 7.0 % 이상
생치즈 : 3.6 % 이상
2.2.10. 가공치즈
경성가공치즈 : 25.0 % 이상
반경성가공치즈 : 18.4 % 이상
혼합가공치즈 : 7.6 % 이상
연성가공치즈 : 6.8 % 이상
2.2.11. 분유류
전지분유 : 25.0 % 이상
탈지분유 : 1.3 % 이하
가당분유 : 18.0 % 이상
혼합분유 : 12.5 % 이상 (탈지분유 원료로 한 제품 제외)
2.2.12. 조제유류
조제분유, 조제우유, 성장기용 조제분유, 성장기용 조제우유
: 15.0~30.0 %
2.2.13. 아이스크림류
아이스크림 : 6.0 % 이상
저지방아이스크림 : 2.0 % 이하
아이스밀크 : 2.0 % 이상
2.2.14. 아이스크림분말류
아이스크림분말 : 18.0 % 이상
아이스밀크분말 : 6.0 % 이상
2.2.15. 아이스크림믹스류
아이스크림믹스 : 6.0 % 이상
저지방아이스크림믹스 : 조지방 2.0 % 이하
아이스밀크믹스 : 2.0 % 이상
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29
II. 유가공품 시험법
3. 장치
3.1. 뢰리히 관
3.2. 둥근 바닥 플라스크 : 250 mL용
3.3. 지방전처리병, 마개(산분해법)
3.4. Water bath
3.5. 회전증발농축기
3.6. 데시케이터
3.7. Buchi 지방추출장치 B-815 (산분해법)
3.8. 건조기 : 100±5 ℃설정이 가능한 것
3.9. Balance : 분석저울 0.1 mg 까지, 일반저울 10 mg 까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. Ethyl alcohol
4.1.2. Petroleum ether
4.1.3. Diethyl ether
4.1.4. Ammonium hydroxide 용액
4.1.5. 35 % HCl : 산분해법시 필요
4.1.6. 3차 증류수
5. 시험방법
5.1. 시료전처리
5.1.1. 250 mL 둥근 바닥 플라스크를 105 ℃ oven에 4시간 이상 건조,
방냉
시켜 무게를 재어 항량병을 준비한다.
5.1.2. 시료를 뢰리히관에 정밀히 달아 저지방가공유 2 g, 아이스크림 1~2 g,
분유 1 g을 채취한다.
5.1.3. 뢰리히관의 눈금이 11 mL이 되도록 증류수를 넣어 시료와 잘 혼합한다.
주의) 분유는 40 ℃ 수욕상에서 완전히 녹인다.
5.1.4. Ammonium hydroxide solution 2 mL를 넣고 잘 혼합시킨다.
5.1.5. Ethanol 10 mL를 넣고 잘 혼합하고, ether 25 mL를 넣고 마개를 닫는다.
5.1.6. 2분간 세게 흔들어 지방을 추출하고, 뢰리히관의 마개를 열어 탈기시킨다.
5.1.7. Petroleum ether 25 mL를 넣어 마개를 닫고 2분간 세게 흔들고 마개를 열어
1시간 동안 정체시킨다.
주의) 상부의 ether 혼합층이 투명하게 된다.
30
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II. 유가공품 시험법
5.1.8. 뢰리히관의 valve를 열어 상층액(유기용매층)을 미리 항량하여 천칭한
250 mL 둥근 바닥 플라스크에 모은다.
5.1.9. 뢰리히관에 다시 ether 15 mL, petroleum ether 15 mL를 차례로
넣고
위의 추출과정을 2회 반복한다.
5.1.10. 추출액을 모은 둥근 바닥 플라스크를 evaporator와 연결하고 감압 농
축 하여 유기용매를 휘발시킨다.
5.1.11. 105 ℃ oven에 넣어 남은 유기용매를 휘발시킨 후, 방냉시켜 항량되면
무게를 재어 계산한다.
5.2. 산분해법 시료전처리
5.2.1. 지방전처리병에 시료를 정밀히 단다.(치즈 1 g)
5.2.2. 시료가 든 전처리병에 증류수 5 mL, 진한 암모니아수 1 mL, magnetic
bar를 넣고 Buchi 지방추출장치 B-815에 올려 약 1분간 stirring 하여
뿌연 용액의 상태로 만든다.
5.2.3. 염산 10 mL를 넣고 4분간 heating하여 시료를 분해한다.
주의) 덩어리가 없이 지방이 위에 떠있는 연한 갈색~검은색(당분이 많은 경우)의
액체가 되어야 한다.
5.2.4. 실온으로 식힌다.
5.2.5. 전처리병안의 내용물을 뢰리히관에 옮긴다.
5.2.6. 전처리병과 magnetic bar를 ethanol 10 mL와 ether 25 mL로 차례로 세척
하여 그 액을 뢰리히관에 옮겨서 5.1.6 이 후의 과정을 진행한다.
6. 결과
6.1. 계산
지방함량( %) =
  
× 

W1 : 시료 건조 후 항량병 무게
W0 : 시료 모으기 전 항량병 무게
S : 시료무게
7. 참고문헌
7.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원고시 제2010-2호).
7.2. 표준식품분석학(2010), 지구문화사.
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31
II. 유가공품 시험법
붙임 1. 데이터 및 결과 예(산분해법 )
1. 시료 : 연성가공치즈
2. 건조온도 : 105 ℃
3. 평면바닥플라스크 항량 측정 (W0)
4시간 이상 건조, 30분 방냉 후 칭량 : 94.7444 g
4. 시료량 측정(S) : 1.0367 g
5. 시료 건조 후 항량병의 측정(W1) : 95.0099 g
6. 지방함량 계산
지방함량( %)=
32
  
× 100 = 25.6101 %

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II. 유가공품 시험법
붙임 2. 검사흐름도
항온(105 ℃)건조기
◦ 둥근 바닥 플라스크 4시간 이상
건조
↓
플라스크 칭량
◦ 충분히 방냉(최소 30분)하여 칭량
↓
뢰리히관에 시료채취
↓
증류수로 시료용해(11 mL까지 맞춤)
암모니아수 2 mL 첨가후 혼합
↓
Ethanol 10 mL 첨가 후 혼합
↓
D-Ether 25 mL 첨가 후 혼합
P-Ether 25 mL 첨가 후 혼합
◦항량플라스크에 상층액(추출액) 모음
↓
D-Ether 15 mL 첨가 후 혼합
P-Ether 15mL 첨가 후 혼합
◦2회 반복
◦항량플라스크에 상층액(추출액) 모음
↓
감압하에서 유기용매 휘발
↓
항온(105 ℃)건조기
◦ 1~2시간 건조(남은 유기용매 증발)
↓
플라스크 칭량
◦ 30분 방냉한 후 칭량
↓
계산 및 결과판정
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33
II. 유가공품 시험법
3.2 지방산(리놀레산)
1. 분석원리
지방산은 분자 중에 탄소원자가 많으므로 GC의 검출감도가 높다. 지방산은
그 자체로도 휘발성이 있기 때문에 그대로도 GC의 시료로 사용할 수 있지만,
일반적으로는 휘발성이 보다 강한 유도체, 즉 methyl ester화하여 사용한다. 이
법은 지방질을 BF3로 직접 ester화하고, GC를 이용하여 지방산 조성을 분석하는
방법이다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상 : 조제유류
2.2. 기준 : 조지방 함량의 9.0 % 이상이어야 한다.
3. 장치
3.1. 지방전처리병, 마개
3.2. Magnetic bar
3.3. Gas chromatograph : Aglient 6890N(FID)
3.4. Buchi 지방추출장치 B-815
3.5. Balance : 분석저울 0.1 mg 까지, 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1 시약
4.1.1. 0.5 N methanolic KOH(Merck 1.09351)
4.1.2. BF3(Boron trifluoride/Methanol, 14 % 100 mL), (Alltech 2168100)
4.1.3. Iso-octane(2,2,4-trimethyl-pentane, J.T Baker)
4.2. 표준물질
Fatty acid multi-standard(Matreya 4210)
: KEL-FIM-FAME-5 MIXTURE 15.5 mg/10 mL in heptane
또는 linoleic acid methyl ester도 사용할 수 있다.
34
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
4.3. 표준용액 제조
표준물질을 iso-octane으로 100배 희석한다.
5. 시험방법
5.1. 시료전처리
5.1.1. 시료 0.1 g을 정밀히 달아 지방 전처리병에 넣고 0.5 N methanolic
KOH sol. 10 mL와 magnetic bar를 넣어 지방 추출장치에 올려놓고 13
분을 정하여 stir하면서 start 시킨다.
5.1.2. 냉각관에 얼음을 채우고, 녹으면 다시 얼음을 채워서 전처리가 끝날 때
까지 전처리 용매가 휘발되지 않도록 한다.
5.1.3. 3분이 남았을 때 BF3용액 5 mL를 주입하여 2분간 가열하고, iso-octane
5 mL를 넣고 1분간 가열 후 바로 끈다.
5.1.4. 식혀서 50 mL centrifuge tube에 옮겨서 상층액을 vial에 담아 GC로 분
석한다.
6. 기기분석조건
6.1. GC 분석조건
Parameter
Injector
Detector
Column
Carrier gas
Flow rate
Split ratio
Injection volume
Oven
Run time
GC condition
250 ℃
FID 250 ℃
FFAP column (25 m×0.2 mm×0.33 μm)
N2
Flow rate : 1.0 mL/min
Total flow rate : 13.2 mL/min
10:1
2 μL
80 ℃(initial, 2min)→12 ℃/min→(150 ℃, 2min)
→8 ℃/min→(180 ℃)→3 ℃/min→(230 ℃,10min)
Post run : 50 ℃
40min
7. 결과
7.1. 정량분석
7.1.1. 시험용액 및 지방산표준용액을 분석하여 얻은 크로마토그램에서 머무름
시간을 비교하여 정성을 실시한다.
9.1.2. 시험용액의 크로마토그램상의 모든 피크 면적을 integration하고 모든
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35
II. 유가공품 시험법
피크면적(지방 %)에 대하여 리놀레산이 차지하는 면적을 리놀레산 함
량(%)으로 계산한다.
8. 참고문헌
8.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
8.2. Determination of lipids in infant formula powder by direct extraction
methylation of lipids and fatty acid methyl ester analysis by gas
chromatography, Journal of AOAC, vol182, No5, 1999.
8.3. 표준식품분석학(2010), 지구문화사.
36
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
붙임 1. Standard 및 sample chromatogram
24.553 - C18:2 linoleic acid
1-1. Standard chromatogram
pA
700
600
500
400
300
6.665
11.706
12.417
100
23.286
200
0
0
10
20
30
min
1-2. Sample chromatogram
FID1 A, (071203LA\SIG10005.D)
23.334
200
34.062
23.444
19.186
16.753
13.619
8.995
6.665
4.415
50
25.861
22.811
100
15.059
12.050
18.649
150
24.381 - C18:2 linoleic acid
pA
0
0
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10
20
30
min
37
II. 유가공품 시험법
붙임 2. 검사흐름도
시료 채취
↓
지방추출
0.5 N methanolic KOH solution
10 mL 첨가
BF-3 5 mL, iso-octane 5 mL 첨가
◦ 추출시간은 총 13분이며, BF-3는
3분이 남았을 때 iso-octan은 1분이
남았을 때 첨가한다.
↓
실온에서 식힌 후 상층액 채취
↓
표준품 희석(iso-octane)
↓
GC 분석
↓
계산 및 결과판정
38
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II. 유가공품 시험법
3.3 낙산가 (적정법)
1. 분석원리
유가공품(버터류)의 원료인 우유 중에 존재하는 낙산(butyric acid, C4)의 함량
을 분석함으로써 버터류를 분류하기 위한 검사이며 추출한 지방을 비누화 시켜
얻은 수용성 저급 지방산을 증류한 후 적정하고 시료량에 대한 환산계수를 이용하여
낙산가를 계산한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상 : 버터, 버터오일
2.2. 기준 : 20 ± 2
3. 장치
3.1. 둥근 바닥 플라스크나 지방 전처리병
3.2. 눈금이 있는 test tube : glass재질, 15 mL
3.3. 환류냉각장치
3.4. 증류장치
3.5. Filter paper : Advantec 5A
3.6. Rotary evaporator
3.7. Heating mentle
3.8. 건조기
3.9. Balance : 분석저울 0.1 mg까지, 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. 0.5 N Ethanolic KOH solution(Merck 1.09114)
4.1.2. Glycerin(분석급)
4.1.3. 정제규조토
4.1.4. 0.01 N NaOH solution(분석급)
4.1.5. Phenolphthalein solution(분석급)
4.1.6. Potassium sulfate(분석급)
4.1.7. 카카오지, 야자유
4.1.8. 3차 증류수
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39
II. 유가공품 시험법
4.2. 시액
4.2.1. 포화황산칼륨용액 : 황산칼륨(K2SO4) 110 g을 증류수에 용해하여 전체량이
1,000 mL가 되도록 한다.
4.2.2. 희황산 용액 : 황산 1 mL을 증류수로 희석하여 3 mL로 제조한다.
4.2.3. 야자유비누액
․ 정제 야자유 50 g, ethanol 50 mL, 75 %의 KOH 20 mL를 삼각플라스
크에 취하고 환류냉각기를 붙여 조용히 가열하여 투명한 비누액으로
만든 후 다시 10분간 끓인다.
․ 잔류하는 비누액을 100 ℃의 건조기에서 ethanol의 냄새가 없어질 때까지
건조한다.
․ 증류수를 가해 용해하여 전체량이 500 mL이 되도록 한다.
5. 시험방법
5.1. 시료전처리
5.1.1. 검사시료 중 지방 추출 : 뢰제․곳트리브법에 따라 지방을 추출하거나
건조기(100 ℃)에서 버터를 녹여 상층을 사용한다.
5.1.2. 준비된 시료 0.500~0.550 g을 평편 바닥플라스크나 지방 전처리병에 취한다.
5.1.3. Ethanolic KOH sol. 5 mL를 가하고 비등석 혹은 마그네틱 바를 넣어 환
류냉각기에 연결하고, 약하게 가열하여 녹인 후 계속하여 10분간 가열한다.
5.1.4. 냉각기를 떼고 glycerin(비중 1.23) 1 mL를 넣고 가열하여 ethanol을 증
발시킨다.
주의) 증발의 종말점의 액의 거품이 일어나기 시작할 때로 한다.
5.1.5. 건조기(100 ℃)에 약 1~2시간 정체하여 남아있는 ethanol을 모두 증발시
킨다.
5.1.6. 꺼내어 바로 포화황산칼륨시액 15 mL를 넣고 20 ℃로 식혀 계속 흔들어 희
황산 0.5 mL, 야자유비누액 0.5 mL 및 정제규조토 0.1 g을 넣고 흔들어준다.
5.1.7. 소형의 신속여과지(5A)를 대고 눈금이 있는 시험관에 여과하여 정확히
12.5 mL을 받는다.
5.1.8. 100 mL 둥근 바닥 플라스크에 옮기고 증류수 5 mL로 시험관을 세척
하여 합친다.
5.1.9. 비등석이나 magnetic bar를 넣고 냉각장치에 연결․증류하여 눈금이
있는 시험관에 정확히 11 mL를 받는다.
5.1.10. Phenolpthalein sol.을 지시약으로 하여 0.01 N NaOH sol.으로 적정한다.
주의)가능한 신속하게 적정한다.
5.1.11. 검사시료의 채취량에 대한 환산 계수를 적용하여 낙산가를 구한다.
40
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
5.2. 공시험
공시험은 정제카카오지 0.500 g에 대하여 같은 방법으로 전처리한다.
Table 1. 반미량법 낙산가 측정에 쓰이는 계수
검
체 (g)
계 수
0.500 ~ 0.501
1.40
0.502 ~ 0.505
1.39
0.506 ~ 0.509
1.38
0.510 ~ 0.513
1.37
0.514 ~ 0.517
1.36
0.518 ~ 0.521
1.35
0.522 ~ 0.525
1.34
0.526 ~ 0.529
1.33
0.530 ~ 0.533
1.32
0.534 ~ 0.537
1.31
0.538 ~ 0.541
1.30
0.542 ~ 0.545
1.29
0.546 ~ 0.550
1.28
6. 결과
6.1. 계산
낙산가 = (시료 적정량 - 공시험 적정량) × 계수
7. 참고문헌
7.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
7.2. 우유 유제품 시험법(1998), 한국유가공기술과학회편.
정밀검사발전연구회
41
II. 유가공품 시험법
붙임 1. 검사흐름도
시료 채취
↓
가열(10min)
◦ 환류냉각기에 연결하여 약하게
가열
↓
◦ 포화황산칼륨 15 mL,
여과
(정확히 12.5 mL을 받는다)
희황산 0.5 mL,
야자유비누액 0.5 mL,
규조토 0.1 g 첨가 후 여과
↓
증류
↓
적정(0.01 N NaOH)
↓
계산 및 결과판정
42
◦ 환산 계수 적용, 공시험(3 mL)
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
4
당분
당질(당분)은 탄수화물의 다른 말로 탄소, 수소, 산소의 세 원소로 이루어진
화합물이다. 당질은 식품에 있어서 주요 에너지원이며 식품의 특징(부피, 밀도,
점성, 풍미, 경도 등)을 결정하는데 중요한 요소이다. 당분은 그것을 구성하는
단위의 당의 수에 따라 단당류, 이당류, 다당류로 구분하며 단당류에는 glucose,
fructose등, 이당류에는 sucrose, lactose등, 다당류에는 starch, cellulose 등이 있다.
1. 분석원리
액체크로마토그래프(HPLC)의 굴절률검출기(RID)를 사용하여 시료 내에 존재
하는 당분(fructose, glucose, sucrose)과 유당(lactose)을 검사하는 방법이다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
유당분해우유, 가공유류, 발효유류, 조제유류, 분유류, 유당, 농축유류
2.2. 기준
2.2.1. 유당분해우유 : 1.0 % 이하 (Lactose)
2.2.2. 유당 : 95.0 % 이상 (Lactose)
2.2.3. 농축유류(농축우유, 탈지농축우유 제외) : 58.0 % 이하
(Fructose, Glucose, Sucrose 및 Lactose 의 합)
2.2.4. 가공유류, 발효유류, 조제유류, 분유류
무지유고형분(건조물질-유지방-당분)계산시
필요한
검사로
Fructose,
Glucose, Sucrose의 합으로 당분의 양을 결정한다.
3. 장치
3.1. HPLC : Agilent 1100(RID)
3.2. 원심분리기 : 3,500 r/min 이상
3.3. Vortex mixer
3.4. Water bath
3.6. Balance : 분석저울 0.1 mg까지, 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
정밀검사발전연구회
43
II. 유가공품 시험법
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. Acetonitrile(HPLC급)
4.1.2. 3차 증류수
4.2. 시액
4.2.1. Mobile phase : 75 % acetonitrile solution
3차 증류수 250 mL 와 acetonitrile 750 mL를 혼합한 후 여과․탈기한다.
4.3. 표준물질
6.1.1. D-(-) Fructose (Sigma F-0127)
6.1.2. D-(+) Glucose (Sigma G-7528)
6.1.3. D-(+) Sucrose (Sigma S-7903)
6.1.4. Lactose Monohydrate (Sigma L-3625)
4.4 표준용액 제조
4.4.1. Stock standard solution (0.60 %)
Fructose 0.06 g, Glucose 0.06 g, Sucrose 0.06 g, Lactose 0.06 g을 정밀
히 달아 10 mL vol. flask에 넣고 3차 증류수로 10 mL까지 맞추어 잘
혼합한다.
4.4.2. Working standard solution(0.075 %, 0.15 %, 0.30 %)
Stock sol.을 50 % acetonitrile 용액으로 각각 1/8, 1/4, 1/2로 희석하여
사용한다.
5. 시험방법
5.1. 시료채취
5.1.1. 가공유류, 발효유류
1 g을 취하여 10 mL vol. flask 에 넣는다.
5.1.2. 조제유류, 분유류, 유당
0.1~0.5 g을 취하여 10 mL vol. flask 에 넣는다.
5.2. 시료전처리
5.2.1. 채취한 시료를 10 mL vol. flask에 넣은 후 3차 증류수 5 mL를 넣고
vortex mixer로 완전히 용해시킨다.
44
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
주의) 분말시료는 40 ℃ water bath에 넣어서 완전히 용해한다.
5.2.2. Acetonitrile을 넣어 10 mL까지 맞춘 다음 vortex mixer로 혼합한다.
주의) 혼합 후 부피가 줄면 다시 한번 10 mL까지 맞추어 혼합한다.
5.2.3. 15 mL centirifuge tube 에 옮겨 실온, 3,500 r/min에서 10분간 원심 분리
한다.
5.2.4. 상층액을 주사기용 필터(0.45 μm, Nylon)로 여과하여 약 1 mL를 vial에
담아 이를 시험용액으로 한다.
6. 기기분석조건
6.1. Detector : RID
주의) RID purge를 30분~1시간(약 40분) 작동 후 기기를 안정화 시킨 다음 분
석을 실시한다.
주의) 실제 분석조건과 동일하게 한 후 purge를 실행한다.
6.2. Column
6.2.1. Carbohydrate column (Waters WAT044355, 4.6 × 250 mm)
Guard column(Waters WAT046895)
Guard holder(Waters WAT046905)
End-fittings(Waters WAT037525)
또는 Agilent (Zorbax carbohydrate 4.6×150 mm, USAR002793)
6.3. Flow rate : 1.4 mL/min
6.4. Injection volume : 20 μL
6.5. Run time : 15 min
7. 결과
7.1. 검량선작성
피크의 면적을 구하여 검량선을 작성하여 시험용액의 농도(g/100 mL)를 구하고,
다음 식에 대입하여 검사시료 중 당분의 량을 구한다.
7.2. 계산
당함량(g/100 g)=
×
시료량  
S : 시험용액중의 당질의 농도 (g/100 mL)
a : 희석배수
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45
II. 유가공품 시험법
8. 참고문헌
8.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
8.2. S.Suzanne Nielsen(1998), Food analysis.
46
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
붙임 1. Standard 및 sample chromatogram
1-1. Standard chromatogram
nRIU
70000
60000
10.519 - Lactose
30000
8.556 - Sucorse
40000
6.141 - Glucose
5.396 - Fructose
50000
20000
10000
0
-10000
0
2.5
5
7.5
10
12.5
min
1-2. Sample chromatogram
정밀검사발전연구회
47
II. 유가공품 시험법
붙임2. 검사흐름도
시료 채취
◦ 10 mL vol. flask
↓
◦ 진탕, 혼합
3차 증류수 5 mL 첨가
◦ 잘 녹지 않는 시료는 40 ℃
수욕조에서 완전히 용해
↓
Acetonitrile 5 mL 첨가
◦ 진탕, 혼합, 10 mL까지 맞춤
↓
원심분리
(실온, 3500r/min, 10분)
↓
Filter
(0.45 μm Nylon syringe filter)
HPLC(RID) 분석
◦ RID purge를 충분히 실행한다.
↓
계산 및 결과판정
48
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
5
카제인포스포펩타이드(CPP)
CPP는 우유중의 주요 단백질에 있는 카제인에 트립신 등 단백질분해효소를
작용시켜 얻어지는 부분 분해물질로 포스포세린 등의 인아미노산을 많이 함유한
마크로펩타이드이다. 칼슘과 CPP를 동시에 섭취할 경우 소장하부에서 칼슘을
가용화상태로 유지시켜 칼슘흡수를 촉진한다. CPP는 소화효소에 저항성이 있어
불용성염류를 생성하지 않으므로 용해성칼슘을 증가시켜 칼슘의 흡수가 촉진
된다.
CPP는 유단백질의 카제인으로부터 제조한 마크로펩타이드로 칼슘 흡수를
촉진하는 식품소재이다. 칼슘은 CPP의 phosphoserin(Ser-P)과 결합하여 가용성의 상
태로 된다. 이 결합체에서 칼슘의 흡수가 촉진된다. 그러나 Ser-P의 P가
및 탈인효소의 촉매에 의해 유리되면 그 효력을 상실한다. CPP제품을
가열
적정조
건에서 보관하면 장기간 안정하게 품질이 유지된다. 가공 식품에 첨가한 경우
약간의 사항에 유의하면 큰 문제가 없다. CPP의 제조법은 공업적으로 casein을
원료로 하여 trypsin으로 가수분해하고 CPP의 부분을 유리시킨다. 반응직후 열실
활하여 분무건조한 것이 CPP-I이다. 열실활후 탈고미한 것이 CPP-Ⅱ 이며
trypsin의 가수분해 후 산을 첨가한 후 상층부에 칼슘이온 및 에탄올을 첨가하
여 CPP를 침전분리하여 건조한 것이 CPP-Ⅲ이다.
1. 분석원리
적정방법을 사용하여 유단백가수분해물의 가수분해 정도를 측정한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상 : 유단백가수분해물
2.2. 기준 : 표시한 경우 표시기준 이상
3. 장치
3.1. Spatula
3.2. 건조기
3.3. pH meter
3.4. 원심분리기 : 4,000 r/min 이상
정밀검사발전연구회
49
II. 유가공품 시험법
4. 시약 및 시액
4.1 시약
4.1.1. 6 N, 2 N, 1 N HCl(분석급)
4.1.2. Absolute ethanol(분석급)
4.1.3. BaCl2･2H2O (분석급)
4.1.4. 3차 증류수
4.2 시액
4.2.1. 50 % ethanol : Absolute ethanol을 증류수로 1:1(v:v)로 희석하여 만든다.
5. 시험방법
5.1. 시료전처리
5.1.1. 시료 2.5 g을 취한 후 증류수 17.5 mL를 첨가 하고 잘 흔들어 녹인다.
주의)잘 녹지 않을 경우에는 3~4M NaOH를 사용하여 pH를 7.0로 맞춘 후 녹인다.
5.1.2. 3가지 농도의 HCl을 사용하여 pH를 4.5로 맞춘다.
- pH 5.1까지는 6 N HCl로 : 3~4 방울정도
- pH 4.8까지는 2 N HCl로 : 5~8 방울정도
- pH 4.5 ± 0.05까지는 1 N HCl로 : 15방울정도
5.1.3. 22.5 mL까지 증류수로 채운다.
주의) 사용한 spatula에 묻은 침전물을 다 회수한다.
5.1.4. 30분간 상온에 방치한다.
5.1.5. 4,000 r/min에서 15분간 원심을 돌린다.(실온)
5.1.6. 상층액을 미리 항량 시킨 50 mL centrifuge tube에 옮긴다.
주의) 상층액을 최대한 회수하도록 한다.
5.1.7. 50 mM이 되도록 barium chloride을 첨가한다(최종량 47.5 mL)
- BaCl2 : 0.495 g
- BaCl2･2H2O : 0.580 g
5.1.8. Absolute ethanol을 첨가 한다.
처음에는 2.5 mL 첨가 후 20초간 흔든 후 다시 한번 2.5 mL 첨가 후
20초간 흔들고 마지막으로 20 mL를 첨가 하여 2분간 흔든다.
5.1.9. 5 ℃에서 16시간 이상 방치 한다.
5.1.10. 4,000 r/min에서 15분간 원심분리 한다.(실온)
5.1.11. 침전물을 25 mL 50 % absolute ethanol로 1회, 25 mL absolute ethanol로
2회 세척한다.
50
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
주의) 처음 세척할 때 spatula로 침전물을 잘 분산시켜 세척한다.
5.1.12. 실온에서 감압 하에(25 mmHg 또는 그 이하) 1시간, 60 ℃에서 4시간
건조한다. (감압이 어려운 경우 60 ℃에서 22시간 건조한다.)
5.1.13. Desiccator에서 방냉 후 칭량한다.
6. 결과
6.1. 계산
CPP( %) =      × 

W1 : 건조후의 무게(g)
W2 : 칭량병의 무게(g)
Ws : 검사시료채취량(g)
7. 참고문헌
7.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
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51
II. 유가공품 시험법
붙임 1. 검사흐름도
시료 채취
↓
pH 맞추기
↓
상온에서 정치
◦ 5 ℃에서 16시간 이상
↓
원심분리
◦ 4,000 r/min, 15분간, 실온
↓
50 % ethanol로 침전물 회수
↓
감압건조, 방냉 및 칭량
↓
계산 및 결과판정
52
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
6
비중
비중이란 동일한 부피의 증류수와 어떤 미지의 액체를 비교하는 데 사용된
순수한 비율로, 순수한 물질과 혼합물의 비중이 다르므로 물질의 순수성의
척도로써 사용된다.
1. 분석원리
온도계와 비중계를 사용하여 측정한 후 우유비중 보정표와 탈지우유 비중
보정표에 따라 보정한다.
2 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상 : 우유류 및 저지방 우유류
2.2. 기준 우유류 : (15 ℃) 1.028~1.034
저지방 우유류 : (15 ℃) 1.030~1.045
3. 장치
3.1. 부평비중계
3.2. 온도계
3.3. 메스실린더
4. 시험방법
4.1. 검사시료를 잘 섞어 메스실린더에 4/5정도 부은 다음 잠시 정치하여 기포가
없어지면 비중계를 넣어 측정한다.
4.2. 온도계를 넣어 시료의 온도를 측정한다.
4.3. 15 ℃ 이외의 온도의 경우 비중보정표를 이용하여 보정한다.
5. 결과
시료의 비중이 적절한가를 확인한다.
6. 참고문헌
6.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
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53
II. 유가공품 시험법
붙임 1. 검사흐름도
시료를 메스실린더에 채우기
↓
정치
↓
온도 및 비중측정
↓
결과보정
↓
결과판정
54
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II. 유가공품 시험법
7
산도
산도란 염기의 화학식 속에 들어 있는 -OH 기의 몰수로 중화 반응 시 산의
필요량을 말한다. 유제품에서 나타나는 산성은 산성 인산염등 유제품이 가지고
있는 산성물질과 발효되어 생기는 젖산에 의하여 주로 나타난다. 따라서 산도를
측정하면 신선도를 알 수 있다.
1. 분석원리
시료내 산과 중화반응하는 NaOH의 소비량을 측정하여 이 NaOH와 결합한
산성물질 전량을 젖산(lactic acid)으로 가정하고 중량비율로 표시, 산도를
계산하는 방법이다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
우유류, 저지방우유류, 유당분해우유, 산양유, 농축유류, 유크림류
2.2. 기준
2.2.1. 우유류, 저지방우유류, 유당분해우유: 0.18 %이하 (젖산으로서)
2.2.2. 산양유, 유크림류(유크림): 0.20 %이하 (젖산으로서)
2.2.3. 농축유류(농축우유): 0.40 %이하 (젖산으로서)
3. 장치
3.1. Titrator : Metrohm 736 GP titrino
3.2. Balance: 분석저울 0.1 mg까지, 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. 0.1 N NaOH 용액(분석급)
4.1.2. Phenolphthalein 용액(분석급)
5. 시험방법
5.1. 유크림 외 품목
5.1.1. 시료를 잘 혼합하여 50 mL 비이커에 10 mL를 넣고, 증류수 10 mL를 넣는다.
정밀검사발전연구회
55
II. 유가공품 시험법
5.1.2. Phenolphthalein 0.5 mL와 magnetic bar를 넣고 적정기에 연결한다.
5.1.3. 적정기를 켜고 적정한다.
주의) 우유의 색깔이 엷은 홍색을 띄고 30초간 색깔이 유지되는 때의 NaOH
양이 소비량이다.
5.1.4. 계산한다.
5.2. 유크림
5.2.1. 시료를 잘 혼합하여 50 mL 비이커에 9 g을 정밀히 달아 넣고, 증류수
18 mL를 넣고 잘 흔들어 혼합한다.
5.2.2. Phenolphthalein 0.5 mL와 magnetic bar를 넣고 적정기에 연결한다.
5.2.3. 적정기를 켜고 적정한다.
주의) 유크림의 색깔이 엷은 홍색을 띄고 30초간 색깔이 유지되는 때의
NaOH양이 소비량이다.
5.2.4. 계산한다.
6. 결과
6.1. 계산
산도(젖산 %) =
   소비량 ×  
시료량
× 100
※ 0.1 N NaOH 1 mL= 0.009 g 젖산
7. 참고문헌
7.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
7.2. 표준식품분석학(2010), 지구문화사.
56
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
붙임1. 검사흐름도
50 mL 비이커에 시료 채취
◦ 유크림외 품목 10 mL
유크림 9 g
↓
증류수 첨가
↓
적정기 연결
↓
지시약(페놀프탈레인)첨가
↓
0.1 N NaOH로 적정
◦ 무색→분홍색
↓
계산 및 결과판정
정밀검사발전연구회
57
II. 유가공품 시험법
8
조제유류 중 비타민 시험법
비타민은 소량으로 신체기능을 조절하며 외부로부터 섭취되어야 한다. 비타민은
탄수화물, 지방, 단백질과는 달리 에너지를 생성하지 못하지만 몸의 여러 기능을
조절한다. 일반적으로 비타민은 지용성과 수용성으로 분류된다. 지용성 비타민은
지방이나 지방을 녹이는 유기용매에 녹는 A, D, E, F, K, U가 이에 속한다.
이
들은 수용성 비타민보다 열에 강하여 식품의 조리가공 중에 비교적 덜 손실된
다. 수용성 비타민은 물에 녹는 비타민으로서 비타민 B복합체, 비타민C, 비오틴,
폴산, 콜린, 이노시톨, 비타민L, 비타민P 등이 알려져 있다.
축산물의 가공기준 및 성분규격의 조제유류의 비타민 기준
유형
조제분유
조제우유
성장기용조제분유
성장기용조제우유
기타조제분유
기타조제우유
비타민A(IU/100 g)
1,250~2,500
1,250~3,750
-
비타민D(IU/100 g)
200~400
200~600
-
비타민C(mg/100 g)
40이상
40이상
-
비타민B1(mg/100 g)
0.20이상
0.20이상
-
비타민B2(mg/100 g)
0.30이상
0.30이상
-
니코틴산(μg/100 g)
1,250이상
1,250이상
-
비타민B6(μg/100 g)
175이상
225이상
-
엽산(μg/100 g)
20이상
20이상
-
판토텐산(μg/100 g)
1500이상
1500이상
-
비타민B12(μg/100 g)
0.5이상
0.75이상
-
비타민K1(μg/100 g)
20이상
20이상
-
비타민E(IU/100 g)
3.5이상
3.5이상
-
항목
58
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
8.1 비타민 A
1. 분석원리
조제분유시료를 전처리 (비누화, 추출, 정제)한 다음 HPLC로 분석하여
표
준용액의 검량선을 이용하여 분석농도를 산출한다. 조제분유 중의 비타민 A를
분석하기 위해 시료 1~2 g을 채취하여 전처리 (추출)한 다음 전량을 10 mL로 하
여 HPLC/FLD로 분석한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
조제분유․조제우유, 성장기용조제분유․성장기용조제우유
2.2. 기준
2.2.1. 조제분유․조제우유 : 1,250~2,500 IU/100 g
2.2.2. 성장기용 조제분유․성장기용조제우유 : 1,250~3,750 IU/100 g
주의) 조제우유 및 성장기용조제우유의 검사기준 적용은 조제분유 및 성장기용
조제분유 수분규격(5.0 %)을 기준으로 하여 환산 적용한다.
3. 장치
3.1. 둥근 바닥 플라스크: 125 mL 또는 250 mL용
3.2. Separating funnel
3.3. Buchner funnel
3.4. Syringe filter : 0.2 μm 또는 0.45 μm, nylon
3.5. 환류냉각장치
3.6. HPLC : Waters 2690(FLD)
3.7. Balance : 분석저울 0.1 mg까지 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1.1. 시약
4.1.1. Ethanol(HPLC급)
4.1.2. Sodium sulfate anhydrous : 무수황산나트륨을 2시간 이상 120 ℃에서 가열
한 후 데시케이터에서 방냉 한 후 사용한다.
4.1.3. Methanol(HPLC급)
정밀검사발전연구회
59
II. 유가공품 시험법
4.1.4. Petroleum ether(분석급)
4.1.5. Pyrogallol(분석급)
4.1.6. Potassium hydroxide (KOH)(분석급)
4.1.7. Phenolphthalein solution(분석급)
4.1.8. 3차 증류수
4.2. 시액
4.2.1. 10 % Pyrogallol ethanol solution
Pyrogallol 10 g을 ethanol 90 mL와 섞어 잘 용해하여 사용한다.
4.2.2. Potassium hydroxide(9→10) solution
KOH 9 g을 3차 증류수로 잘 용해하여 10 mL가 되게 한다.
4.2.3. Mobile phase : [Methanol : 3차 증류수 (95:5, v/v)]
Methanol 950 mL와 3차 증류수 50 mL를 혼합하고 여과․탈기 한다.
4.3. 표준물질
Retinol acetate (USP reference standard 1716002)
4.4. 표준용액 제조
4.4.1. Retinol acetate 약 0.02 g을 취하여 시료와 동일하게 전처리한다.
4.4.2. 최종용액을 methanol로 희석하여 각각 1.0 mL중 5, 25, 50 IU가 함유되
도록 한다.(참고: Vit A 1 IU= 0.33 μg)
주의) 사용시 제조한다.
5. 시험방법
5.1. 시료전처리
5.1.1. 비타민 A가 20~30 IU(6~9 μg, 조제분유 약 1 g) 정도가 되게 시료를 정밀
히 달아 갈색둥근 바닥 플라스크에 넣는다.
5.1.2. Ethanol 30 mL, pyrogallol ethanol 용액 1 mL를 가하여 잘 섞는다.
5.1.3. Potassium hydroxide용액 3 mL를 가해 환류냉각기를 부착하여
90 ℃ 비등수욕 중에서 30분간 비누화시킨다.
5.1.4. 신속히 냉각하여 실온으로 한 후, 증류수 30 mL를 가해 갈색
separating funnel에 옮긴다.
5.1.5. 둥근 바닥 플라스크를 증류수 10 mL로 씻고, 이어서 petroleum ether 30
mL로 씻은 후, 위의 separating funnel에 합친다.
5.1.6. Separating funnel을 90초간 세게 흔들고, 10분간 방치한 후 물층 (하층)을
60
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
다른 separating funnel에 받는다.
5.1.7. 물층을 petroleum ether 30 mL로 2회 추출하고, 5.1.6의 petroleum
ether와 합치고, phenolphthalein sol. 1~2 방울을 넣는다.
5.1.8. 증류수 10 mL 1회, 이어 50 mL씩으로 분홍색이 없어질 때까지 ether
층을 씻는다.
5.1.9. Petroleum ether층을 sodium sulfate를 통과시켜 탈수하고, 받은 액을 농
축용 플라스크에 넣어 40~50 ℃에서 감압건조한다.
5.1.10. 잔류물을 methanol 10 mL를 가하여 용해시켜 0.2 μm filter로 여과하여
시험용액으로 사용한다.
6. 기기분석조건
6.1. Detector : FLD,
Exitation 340 nm, Emission 460 nm
6.2. Column : Capcellpak C18, UG 80 (5 μm), 4.6×250 mm
LiChrosorb RP-18 (5 μm), 4.6×250 mm
6.3. Column temp : 30 ℃
6.4. Injection volume : 10 μL
6.5. Flow rate : 0.8 mL/min
6.6. Run time : 20 min.
6.7. Column maintenance
6.7.1. 분석 완료 후 전 시스템을 100 % methanol로 세척한다
6.7.2. 분석 컬럼은 100 % methanol을 채워서 보관한다.
7. 결과
7.1. 검량선작성
표준용액과 시험용액을 동일조건에서 분석하여 머무름 시간을 비교하여
동일물질인지 정성 확인 후 표준용액의 피크면적 또는 높이에 의해 구한
검량선을 사용하여 시험용액의 비타민 A의 농도(IU/mL)를 구하고, 다음 식에
의해 검사시료 중 비타민 A의 함량(IU/100 g)을 산출한다.
7.2. 계산
비타민 A 함량 (IU/100 g)= S ×
 ×
× 100

T= 검사시료채취량(g)
정밀검사발전연구회
61
II. 유가공품 시험법
S=시험용액중의 비타민 A의 농도(IU/mL)
a=시험용액의 전량 (mL)
b=시험용액의 희석배수
8. 참고문헌
8.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
62
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
붙임 1. Standard 및 sample chromatogram
1-1. Standard chromatogram
F L D 1 A , E x = 3 4 0 , E m = 4 6 0 ( 1 0 0 5 2 8 V A \ 1 0 0 5 2 8 A 2 0 1 0 - 0 5 - 2 8 1 4 -5 0 - 1 9 \ S I G 1 0 0 1 0 . D )
LU
2 .5
9.220 - vitamin A
2
1 .5
1
0 .5
0
2
4
6
8
10
12
14
m in
14
m in
1-2. Sample chromatogram
F L D 1 A , E x = 3 4 0 , E m = 4 6 0 ( 1 0 0 5 2 8 V A \ 1 0 0 5 2 8 A 2 0 1 0 - 0 5 - 2 8 1 4 -5 0 - 1 9 \ S I G 1 0 0 0 3 . D )
LU
2 .5
2
1 .5
9.140 - vitamin A
1
0 .5
0
2
4
정밀검사발전연구회
6
8
10
12
63
II. 유가공품 시험법
붙임 2. 검사흐름도
시료채취(1~2 g)
↓
ethanol 30 mL,
10 % pyrogallol 1 mL,
KOH(9→10) 3 mL 첨가
↓
Saponification(검화) 30분간
◦ 90 ℃ 비등수욕
↓
Extraction
(Petroleum ether 30 mL×3)
↓
증류수로 수세
(phenolphthalein 용액 첨가)
◦ 분홍색→무색
↓
Evaporation (45 ℃)
↓
Methanol로 10 mL로 희석한 후
filter(0.2 μm, nylon)
↓
◦ Detector : FLD
HPLC 분석
Exitation 340 nm,
Emission 460 nm
↓
계산 및 결과판정
64
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
8.2 비타민 E
1. 분석원리
조제분유시료를 전처리 (비누화, 추출, 정제)한 다음 HPLC로 분석하여 표준
용액의 검량선을 이용하여 분석농도를 산출한다. 조제분유 중의 비타민 E를 분
석하기 위해 시료 1~2 g을 채취하여 전처리 (추출)한 다음 전량을 10 mL로 하
여 HPLC/자외부(UV)검출기로 분석한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
조제분유․조제우유, 성장기용조제분유․성장기용조제우유
2.2. 검사기준
2.2.1. 조제분유․조제우유 : 3.5 IU/100 g 이상
2.2.2. 성장기용조제분유․성장기용조제우유 : 3.5 IU/100 g 이상
주의) 조제우유 및 성장기용조제우유의 검사기준 적용은 조제분유 및 성장기용
조제분유 수분규격(5.0 %)을 기준으로 하여 환산 적용한다.
3. 장치
3.1. 둥근 바닥 플라스크: 125 mL 또는 250 mL용
3.2. Separating funnel
3.3. Buchner funnel
3.4. Syringe filter : 0.2 μm 또는 0.45 μm, nylon
3.5. 환류냉각장치
3.6. HPLC : Agilent 1100(UVD)
3.7. Balance : 분석저울 0.1 mg까지 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. Ethanol(HPLC급)
4.1.2. Methanol(HPLC급)
4.1.3. Petroleum ether(HPLC급)
4.1.4. Pyrogallol(분석급)
정밀검사발전연구회
65
II. 유가공품 시험법
4.1.5. Potassium hydroxide(KOH)(분석급)
4.1.6. Phenolphatalein solution(분석급)
4.1.7. Sodium sulfate anhydrous(분석급)
4.1.8. 3차 증류수
4.2. 시액
4.2.1. 10 % Pyrogallol ethanol
Pyrogallol 10 g을 ethanol 90 mL와 섞어 잘 용해하여 사용한다.
4.2.2. Potassium hydroxide(9→10) solution
KOH 9 g을 증류수에 녹여 10 mL이 되게 한다.
4.3. 표준물질
Tocopherol (α,β,γ,δ) (Calbiochem 613424)
4.4. 표준용액 제조: 당일제조
4.4.1. Stock standard solution (12.5 mg/mL)
Tocopherol (α,β,γ,δ)를 각각 50㎎을 채취하여 methanol 4mL에 녹인
다.
4.4.2. Intermediate standard solution (1.25 mg/mL )
위의 stock sol.을 1 mL를 취하여 methanol로 10 mL까지 채운다.
4.4.3. Working standard solution 1,2,3 (0.025, 0.05, 0.1 mg/mL)
6.2.2.의 Intermediate sol.을 100㎕, 200㎕, 400㎕를 각각 채취하여 5㎖ vol.
flask에 각각 넣고, methanol로 채운다.
참고) 표준품의 농도 및 역가 예시
Working std. sol. 2
alpha
beta
gamma
delta
농도(mg/mL)
0.05
0.05
0.05
0.05
역가(IU/mg)
1.1
0.5
0.1
0.05
농도(IU/mL)
0.055
0.025
0.005
0.0025
5. 시험방법
5.1. 시료전처리
참고) 비타민 A 전처리 방법과 동일하다.
5.1.1. 조제분유 약 1 g을 정밀히 달아 갈색 둥근 바닥 플라스크에 넣는다.
5.1.2. Ethanol 30 mL, pyrogallol 용액 1 mL를 가하여 잘 섞는다.
66
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
5.1.3. Potassium hydroxide 용액 3 mL를 가해 환류냉각기를 부착하여
90 ℃ 비등 수욕중에서 30분간 비누화시킨다.
5.1.4. 신속히 냉각하여 실온으로 한 후, 증류수 30 mL를 가해 갈색 separating
funnel에 옮긴다.
5.1.5. Flask를 증류수 10 mL로 씻고, 이어서 petroleum ether 30 mL로 씻은 후,
separating funnel에 합친다.
5.1.6. Separating funnel을 90초간 세게 흔들고, 10분간 방치한 후 물층 (하층)을
다른 separating funnel에 받는다.
5.1.7. 물층을 petroleum ether 30 mL로 2회 추출하고, 5.1.6의 petroleum ether와
합하여, phenolphthalein 용액을 1~2 방울 넣는다.
5.1.8. 증류수 10 mL 1회, 이어 50 mL씩으로 분홍색이 없어질 때까지 ether
층을 씻는다.
5.1.9. Petroleum ether층을 sodium sulfate를 통과시켜 탈수하고, 받은 액을 농
축용 플라스크에 넣어 40~50 ℃에서 감압건조한다.
5.1.10. 잔류물을 methanol 10 mL를 가하여 용해시켜 0.2 μm filter로 여과하여
시험용액으로 사용한다.
6. 기기분석조건
6.1. Detector : UV 292 nm
6.2. Column : Zorbax Eclipse XDB-C8(5 μm), 4.6×150 mm
6.3. Flow rate : 0.9 mL/min
6.4. Column Temp : 30 ℃
6.5. Injection vol. : 10 μL
6.6. Run time : 20 min.
6.7. Mobile phase : 100 % Acetonitrile
6.8. Column maintenance
6.8.1. 분석완료 후 전 시스템을 100 % methanol로 세척한다.
6.8.2. 분석 컬럼은 100 % methanol 에 보관한다.
7. 결과
7.1. 검량선작성
표준용액과 시험용액을 동일조건에서 분석하여 머무름 시간을 비교하여 동일
물질인지 정성 확인 후 표준용액의 피크면적 또는 높이에 의해 구한 검량선을
사용하여 시험용액의 비타민 E의 농도(IU/mL)를 구하고, 다음 식에 의해
검사시료 중 비타민 E의 함량(IU/100 g)을 산출한다.
정밀검사발전연구회
67
II. 유가공품 시험법
7.2. 계산
비타민 E 함량 (IU/100 g)= S ×
 ×
× 100

T = 검사시료채취량(g)
S = 시험용액중의 비타민 E의 농도(IU/mL)
a = 시험용액의 전량 (mL)
b = 시험용액의 희석배수
8. 참고문헌
8.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
68
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
붙임 1. Standard 및 sample chromatogram
1-1. Standard chromatogram
0.050
0.020
0.010
alpha - 7.749
delta - 6.162
0.030
beta+gamma - 6.945
0.040
0.000
0.00
1.00
2.00
3.00
4.00
5.00
6.00
7.00
8.00
9.00
10.00
9.00
10.00
Mi nutes
1-2. Sample chromatogram
0.050
delta - 6.153
0.020
0.010
alpha - 7.735
0.030
beta+gamma - 6.959
0.040
0.000
0.00
1.00
2.00
3.00
4.00
5.00
6.00
7.00
8.00
Minutes
정밀검사발전연구회
69
II. 유가공품 시험법
붙임 2. 검사흐름도
시료채취(1~2 g)
↓
ethanol 30 mL,
10 % pyrogallol 1 mL,
KOH (9→10) 3 mL 첨가
↓
Saponification(검화) 30분간
↓
Extraction
(petroleum ether 30 mL×3)
↓
Phenolphthalein sol. 첨가
증류수로 세척
◦ 분홍색→무색
↓
Evaporation (45 ℃)
↓
Methanol로 10 mL까지 채운 후
filter(0.2 μm nylon)
↓
HPLC 분석
◦ Detector : UV 292 nm
↓
계산 및 결과판정
70
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
8.3 비타민 B12
1. 분석원리
조제분유 중의 비타민 B12(cyanocobalamin)를 분석하기 위하여 시료 1~2 g을 채
취하여 전처리한 다음 육방전환밸브시스템을 이용하여 시료를 농축한 후
HPLC/자외부(UV)검출기로 검출한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
조제분유․조제우유, 성장기용조제분유․성장기용조제우유
2.2. 기준
2.2.1. 조제분유․조제우유 : 0.5 μg/100 g 이상
2.2.2. 성장기용 조제분유․성장기용조제우유 : 0.75 μg/100 g 이상
주의) 조제우유 및 성장기용조제우유의 검사기준 적용은 조제분유 및 성장기용
조제분유 수분규격(5.0 %)을 기준으로 하여 환산적용한다.
3. 장치
3.1. Vial : Shiseido 3207(250 μL), Vial cap : Shiseido 3210
3.2. Sonicator 또는 shaker
3.3. 원심분리기 : 10,000 r/min 가능한 것
3.4. HPLC : Shiseido Nanospace(육방전환밸브시스템)
3.5. Balance : 분석저울 0.1 mg까지, 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. KH2PO4(분석급)
4.1.2. Methanol(HPLC 급)
4.1.3. Chlorform(HPLC 급)
4.2. 시액
4.2.1. Mobile phase A : 5 mM KH2PO4
KH2PO4 0.68 g을 증류수에 녹이고 전량을 1 L가 되게 한다.
정밀검사발전연구회
71
II. 유가공품 시험법
4.2.2. Mobile phase B
: 5 mM KH2PO4 / Methanol (80 / 20, v/v)
4.3. 표준물질
Vitamin B12 (Cyanocobalamin) (Sigma C3607)
4.4 표준용액
4.4.1. Stock standard solution(100 μg/mL)
Cyanocobalamin 0.01 g을 100 mL vol. flask에 넣고 5 mM KH2PO4 수
용액으로 용해하면서 용량을 맞춘다.
4.4.2. Intermediate standard solution 1(1 μg/mL)
Stock sol. 0.1 mL를 취하여 10 mL의 vol. flask에 넣고 5 mM KH2PO4 수
용액으로 용량을 맞춘다.
4.4.3. Intermediate standard solution 2(0.1 μg/mL = 100 ng/mL)
4.4.2.의 inter. sol. 1 mL를 취하여 10 mL의 vol. flask에 넣고 5 mM
KH2PO4 수용액으로 용량을 맞춘다.
4.4.4. Working standard solution(5, 10, 20 ng/mL)
4.4.3.항의 표준용액을 0.5, 1.0, 2.0 mL를 취하여 각각 10 mL의 vol.
flask에 넣고 5 mM KH2PO4 수용액으로 용량을 맞춘다. 이것을 각각 std 1,
std 2, std 3으로 하여 검량선 작성에 사용한다.
5. 시험방법
5.1. 시료전처리
5.1.1. 검사시료 약 2 g을 채취하여, centrifuge tube에 넣고 5 mM KH2PO4수용
액 10 mL를 가한 후, 10분간 초음파진탕기(또는 shaker)로 추출한다.
5.1.2. Chloroform(CHCl3) 10 mL를 가하고, 10,000 r/min에서 10분간(4 ℃)원심분
리한다.
5.1.3. 상층의 맑은 용액을 1 mL를 취하여 0.2 μm nylon syringe filter로 여
과하여 시험용액으로 사용한다.
6. 기기분석조건
6.1. Detector : UV 550 nm 또는 361nm
6.2. Column
72
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
․ 전처리컬럼 Capcellpak MF C8 4.6 × 150 mm, 5 μm
․ 농축컬럼 Capcellpak MG C18 2.0 × 35 mm, 5 μm
․ 분석컬럼 Capcellpak UG C18, 1.5 × 250 mm, 5 μm
6.3. Column Temp : 40 ℃
6.4. Injection volume : 표준용액 및 시험용액 (210~400 μL)
6.5. Flow rate : 전처리컬럼 이동상(이동상 A) 0.5 mL/min
분석컬럼 이동상(이동상 B) 0.12 mL/min
6.6. Run time : 45 min
6.7. Column maintenance
6.7.1. 분석완료후 전시스템을 3차 증류수로 세척한다(최소 1시간 이상)
주의) Buffer가 사용되었으므로 증류수로 충분히 세척한다.
6.7.2. 분석컬럼은 100 % methnol을 채워서 보관한다.
7. 결과
7.1. 검량선 작성
표준용액과 시험용액을 동일조건에서 분석하여 머무름 시간을 비교하여
동일물질인지 정성 확인 후 표준용액의 피크면적 또는 높이에 의해 구한
검량선을 사용하여 시험용액의 비타민 B12의 농도(ng/mL)를 구하고, 다음 식에
의해 검사시료 중 비타민 B12의 함량(μg/100 g)을 산출한다.
7.2. 계산
비타민 B12 함량 (μg/100 g)= S× a × 100
T 1000
T = 검사시료채취량(g)
S = 시험용액중의 비타민 B12의 농도(ng/mL)
a = 시험용액의 희석배수
8. 참고문헌
8.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
정밀검사발전연구회
73
II. 유가공품 시험법
붙임 1. Standard 및 sample chromatogram
1-1. Standard chromatogram
20
20
Detector 1-361nm
B12 24.147
Name
Retention Time
10
10
0
0
-10
-10
-20
-20
0
5
10
15
20
25
30
Minutes
1-2. Sample chromatogram
20
20
Detector 1-361nm
B12 24.187
Name
Retention Time
10
10
0
0
-10
-10
-20
-20
0
5
10
15
20
25
30
Minutes
74
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
붙임 2. 검사흐름도
시료 채취(2 g)
↓
5 mM KH2PO4 10 mL 첨가
Sonication 10분
↓
Chloroform 10 mL 첨가
↓
원심분리(10,000 r/min, 10분, 4 ℃)
↓
상층액 여과
Filter(0.2 μm nylon)
↓
HPLC 분석
◦ Detector : UV 550 nm
(UV 361 nm도 가능)
↓
계산 및 결과판정
정밀검사발전연구회
75
II. 유가공품 시험법
8.4 비타민 BX
1. 분석원리
시료를 이동상으로 녹인 후 역상 컬럼으로 분리한 후 HPLC 자외부(UV) 검출
기로 분석한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
조제분유․조제우유, 성장기용조제분유․성장기용조제우유
2.2. 검사기준
2.2.1. 조제분유․조제우유
비타민 B1 : 0.20 mg/100 g 이상
비타민 B2 : 0.30 mg/100 g 이상
니코틴산 : 1,250 μg/100 g 이상
비타민 B6 : 175 μg/100 g 이상
엽
산 : 20 μg/100 g 이상
2.2.2. 성장기용 조제분유․성장기용조제우유
비타민 B1 : 0.20 mg/100 g 이상
비타민 B2 : 0.30 mg/100 g 이상
니코틴산 : 1,250 μg/100 g 이상
비타민 B6 : 225 μg/100 g 이상
엽
산 : 20 μg/100 g 이상
주의) 조제우유 및 성장기용조제우유의 검사기준 적용은 조제분유 및 성장기
용조제분유 수분규격(5.0 %)을 기준으로 하여 환산 적용한다.
3. 장치
3.1. Shaker
3.2. 원심분리기 : 12,000 r/min 가능한 것
3.3. HPLC : Waters 2690(UVD)
3.4. Balance : 분석저울 0.1 mg까지, 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
76
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. Acetic acid(HPLC급, J.T. Baker 9515-03)
4.1.2. 0.1 N NaOH solution(분석급)
4.1.3. PIC-B6 (Waters, WAT085140)
4.1.4. Methanol(HPLC grade, J.T. Baker 9093-68)
4.1.5. 3차 증류수
4.2. 시액
4.2.1. Mobile phase A : 0.1 % acetic acid with 5 mM PIC-B6
․ Acetic acid 1 mL을 1 L vol. flask에 넣은 후 증류수로 눈금선까지 채우고
혼합한다.
․ 위의 1 L vol. flask내 용액을 1L 비이커로 옮긴후 PIC-B6를 넣고 5분정도
혼합한다.
주의) 혼합은 비이커를 가볍게 흔들거나 또는 그대로 방치하여 확산되도록 하고
호일로 덮어 놓는다.
4.2.2. Mobile phase B : 100% Methanol
주의) 실제 이동상 B는 사용량이 A에 비해서 적으므로 비율만 맞춰서 적은
양으로 제조해도 무방하다.
4.3. 표준물질
4.3.1. Niacinamide (Sigma N-5535)
4.3.2. Vitamin B6 (Pyridoxine) (Sigma T-4722)
4.3.3. Vitamin B2 (Riboflavin)) (Sigma P-4500)
4.3.4. Vitamin B1 (Thiamine) (Sigma T-4625)
4.3.5. Folic acid (Sigma F-7876)
4.4. 표준용액 : 당일제조
4.4.1. Stock standard solution
Nicotinamide(nicotinic acid) 0.0050 g, B6 0.0020 g, B2 0.0020 g, B1 0.0020 g,
Folic acid 0.0020 g을 칭량한 후 20 mL vol. flask에 넣도록 한다. 이동상
A로 20 mL 까지 채운 후 vortex를 이용하여 잘 혼합한다.
주의) 이때 weighing dish에 달라붙어 있는 각각의 시약들은 이동상 A로
씻어가면서 vol. flask에 채우도록 한다. 가능하면 위의 지시량을
맞추도록 하며 정밀한 측량이 되도록 한다.
정밀검사발전연구회
77
II. 유가공품 시험법
주의) Vit B2, Folic acid는 0.1 N NaOH 용액 1 mL를 첨가하여 녹인다.
4.4.2. Intermediate standard solution 1
Stock sol. 1 mL를 취하여 10 mL vol. flask에 넣고 이동상 A로 채운다.
4.4.3. Intermediate standard solution 2
4.4.2의 intermediate sol. 1 mL를 취하여 10 mL vol. flask에 넣은 후, 이
동상 A로 채운다.
4.4.4. Working standard solution
4.4.3의 sol.을 500 μL, 1 mL, 2 mL를 취하여 각각 10 mL vol. flask에
넣은 후 이동상으로 희석한 후 20 μL씩 주입하여 검량선을
작성한다.
5. 시험방법
5.1. 시료전처리
5.1.1. 시료 1 g을 centrifuge tube에 넣은 후, 이동상 A로 녹이면서 10 mL까지
채운다.
5.1.2. 시료를 10분간 shaker로 잘 섞은 후, 이어서 10분간 sonication한다.
5.1.3. 시료를 12,000 r/min에서 10분간(4 ℃) 원심 분리한다.
5.1.4. 원심분리가 끝난 시료를 조심스럽게 꺼낸다. 상층액의 일부를 syringe
filter( 0.2 μm, nylon)로 여과하여 시험용액으로 한다.
주의) 분리된 층이 흔들리지 않도록 주의한다.
6. 기기분석조건
6.1. Detector : UV 270 nm
6.2. Column : Capcellpak C18, UG120, 5 μm, 4.6 mm×250 mm
6.3. Column temp : 30 ℃
6.4. Flow rate : 0.6 mL/min
6.5. Injection vol. : 20 μL
6.6. Run time : 50 min.
6.7. Mobile phase : 이동상A : 이동상B (80:20)
6.8. Column maintenance
6.8.1. 분석완료후 전시스템을 증류수로 세척한다(최소 1시간 이상).
6.8.2. 분석컬럼은 100 % methanol 또는 acetonitrile을 채워서 보관한다.
78
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
7. 결과
7.1. 검량선 작성
표준용액과 시험용액을 동일조건에서 분석하여 머무름 시간을 비교하여 동일
물질인지 정성 확인 후 표준용액의 피크면적 또는 높이에 의해 구한 검량선을
사용하여 시험용액의 비타민 Bx의 농도(μg/mL)를 구하고, 다음 식에 의해 검
사시료 중 비타민 Bx의 함량(IU/100 g)을 산출한다.
7.2. 계산
비타민 Bx 함량 (mg/100 g) = S ×
 ×
× 100

T = 검사시료채취량(g)
S = 시험용액중의 비타민 Bx의 농도(μg/mL)
a = 시험용액의 전량(mL)
b = 시험용액의 희석배수
8. 참고문헌
8.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
정밀검사발전연구회
79
II. 유가공품 시험법
붙임 1. Standard 및 sample chromatogram
1-1. Standard chromatogram
1-2. Sample chromatogram
80
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
붙임 2. 검사흐름도
시료 채취(1~2 g)
↓
원심전용 tube에 넣고
이동상 A 10 mL로 녹임
↓
Vortex & shaking(10 min)
Sonication(10 min)
↓
Centrifuge
(12,000 r/min,10 min, 4 ℃)
↓
Filter(0.2μm nylon)
↓
HPLC 분석
◦ Detector : UV 270 nm
↓
계산 및 결과판정
정밀검사발전연구회
81
II. 유가공품 시험법
8.5 판토텐산
1. 분석원리
조제분유 중의 판토텐산을 분석하기 위해 시료 1~2 g을 채취하여 전처리한
후 전량을 20 mL로 하여 HPLC 자외부(UV) 검출기로 검출한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
조제분유․조제우유, 성장기용조제분유․성장기용조제우유
2.2. 기준
2.2.1. 조제분유․조제우유 : 1,500 μg/100 g 이상
2.2.2. 성장기용조제분유․성장기용조제우유 : 1,500 μg/100 g 이상
주의) 조제우유 및 성장기용조제우유의 검사기준 적용은 조제분유 및 성장기용
조제분유 수분규격(5.0 %)을 기준으로 하여 환산 적용한다.
3. 장치
3.1. Sonicator
3.2. pH meter
3.3. 원심분리기 : 10,000 r/min 가능 한 것
3.4. HPLC : Waters 2690(UVD)
3.5. Balance : 분석저울 0.1 mg까지, 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. Potassium phosphate monobasic(KH2PO4)
4.1.2. Phosphoric acid(H3PO4)
4.1.3. Acetonitrile(HPLC급)
4.1.4. Chlorform(HPLC급)
4.2. 시액
4.2.1. Mobile phase A : 20 mM KH2PO4(pH 2.1)
KH2PO4 2.7 g을 증류수에 녹이고 phosphoric acid(H3PO4)로 pH 2.1로
조정한 후 전량을 1 L가 되게 한다.
82
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
4.2.2. Mobile phase B : 20 mM KH2PO4/Acetonitrile(80/20, v/v)
4.3. 표준물질
Pantothenic acid, calcium salt (Sigma P2250)
4.4. 표준용액 제조
4.4.1. Stock standard solution(100 μg/mL)
표준물질 0.01 g(=10 mg)을 100 mL vol. flask에 넣고 20 mM KH2PO4
수용액으로 용해하면서 용량을 맞춘다.
4.4.2. Working standard solution(1, 5, 10 μg/mL)
위의 stock sol.을 각각 0.1 mL, 0.5 mL, 1 mL를 취하여 각각 10 mL vol.
flask에 넣고 20mM KH2PO4 수용액으로 용량을 맞춘다.
5. 시험방법
5.1. 시료전처리
5.1.1. 검사시료 2 g을 칭량하여, 원심튜브에 넣고 20 mM KH2PO4 수용액 10 mL
를 가한 후, 10분간 초음파진탕기로 추출한다.
5.1.2. Chloroform(CHCl3) 10 mL를 가하고, 10,000 r/min에서 10분간
한 후, 상층의 맑은 용액 1 mL를 취하여 syringe filter로
원심분리
여과하여 시
험용액으로 사용한다.
6. 기기분석조건
6.1. Detector(UV) : 200 nm
6.2. Column : Capcellpak UG 120 C18, 5 μm, 4.6×250 mm
6.3. Column temp. : 30 ℃
6.4. Flow rate : 0.7 mL/min
6.5. Injection volume : 10 μL
6.6. Run time : 20 min.
6.7. Mobile phase 이동상A : 이동상B (90:10)
이동상 A : 20mM KH2PO4 (pH 2.1)
이동상 B : Acetonitrile 100 %
정밀검사발전연구회
83
II. 유가공품 시험법
6.8. Column maintenance
6.8.1. 분석완료 후 전 시스템을 증류수로 최소 1시간 이상 세척한다.
6.8.2. 분석컬럼은 100 % methanol 또는 acetonitrile로 채워서 보관한다.
7. 결과
7.1. 검량선 작성
표준용액과 시험용액을 동일조건에서 분석하여 머무름 시간을 비교하여 동일
물질인지 정성 확인 후 표준용액의 피크면적 또는 높이에 의해 구한 검량선을
사용하여 시험용액의 판토텐산 농도(μg/mL)를 구하고 다음 식에 의해 검사
시료 중 판토텐산 함량(μg/100 g)을 산출한다.
7.2. 계산
판토텐산 함량(μg/100 g)= T ×
× 

× 100
T = 시험용액중의 판토텐산의 농도 (μg/mL)
S = 검사시료채취량(g)
a = 시험용액의 전량 (mL)
b = 시험용액의 희석배수
8. 참고문헌
8.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
84
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
붙임 1. Standard 및 sample chromatogram
1-1. Standard chromatogram
1-2. Sample chromatogram
정밀검사발전연구회
85
II. 유가공품 시험법
붙임 2. 검사흐름도
시료채취(2 g)
↓
20mM KH2PO4 10 mL,
↓
Sonication (10 min)
↓
Chloroform 10 mL 첨가
↓
Centrifuge(10,000 r/min, 10 min)
↓
Filter(0.2 μm, nylon)
↓
HPLC 분석
◦ Detector : UV 200 nm
↓
계산 및 결과판정
86
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
8.6 비타민 C
1. 분석원리
조제분유 중의 비타민C를 분석하기 위해 시료 1~2g을 채취하여 전처리한
후 전량을 50 mL로 하여 HPLC 자외부(UV) 검출기로 분석한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
조제분유․조제우유, 성장기용조제분유․성장기용조제우유
2.2. 기준
2.2.1. 조제분유․조제우유 : 40 mg/100 g 이상
2.2.2. 성장기용 조제분유․성장기용조제우유 : 40 mg/100 g 이상
주의) 조제우유 및 성장기용조제우유의 검사기준 적용은 조제분유 및 성장기용
조제분유 수분규격(5.0 %)을 기준으로 하여 환산 적용한다.
3. 장치
3.1. Shaker
3.2. 원심분리기
3.3. HPLC : Agilent 1100(UVD)
3.4. Balance : 분석저울 0.1 mg까지 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. Acetonitrile(HPLC급)
4.1.2. Potassium phosphate, monobasic anhydrous(KH2PO4) (Sigma P0662)
4.1.3. Metaphosphoric acid(HPO3)(Sigma M5043)
4.1.4. 3차 증류수
4.2. 시액
4.2.1. 10 % metaphosphoric acid
Metaphosphoric acid 50 g을 증류수 450 mL에 잘 녹인다.
정밀검사발전연구회
87
II. 유가공품 시험법
4.2.2. 5 % metaphosphoric acid
10 % metaphosphoric acid을 증류수와 1:1로 희석하여 만든다.
4.2.3. 0.05 M KH2PO4 : KH2PO4 3.4 g을 500 mL vol. flask에 넣고 증류수로 채운
다.
4.2.4. Mobile phase [0.05 M KH2PO4 : Acetonitrile, (50:50), v/v]
4.3. 표준물질
Ascorbic acid (Sigma A1417)
4.4. 표준용액 제조
4.4.1. Stock standard solution(100 μg/mL)
Ascorbic acid 0.01 g을 100 mL vol. flask에 넣고 5 % metaphosphoric
acid sol.으로 용해하면서 용량을 맞춘다.
4.4.2. Working standard solution(5, 10, 20 μg/mL)
4.4.3. Stock sol.을 각각 0.5 mL, 1 mL, 2 mL를 취하여 각각 10 mL의 vol.
flask에 넣고 5 % metaphosphoric acid sol.으로 용량을 맞춘다.
주의) 표준용액은 당일 제조하여 사용한다.
5. 시험방법
5.1. 시료전처리
5.1.1. 검사시료 1 g을 저울로 측정한 후, centrifuge tube에 넣고 동량(=1mL)
의 10 % metaphosphoric acid sol.을 가하여 10분간 현탁시킨다.
주의) 10분간 현탁은 shaker를 이용한다.
5.1.2. 적당량의 5 % metaphosphoric acid sol. 5.1.1.의 50 mL centrifuge tube에 넣
고 균질화 한다.
주의) 대략 25㎖ 정도의 5 % metaphosphoric acid sol.을 넣고 5분간 shaking한다.
5.1.3. Shaking 후 5 % metaphosphoric acid sol.으로 50 mL까지 채운다.
5.1.4. 3,000 r/min에서 15분 동안 원심 분리한다. 원심분리 후 기기에서 centrifuge
tube를 조심히 빼낸 다음 상층액을 0.2 μm, nylon filter로 여과한 후 그
액을 vial 에 담아서 시험용액으로 사용한다.
6. 기기분석조건
6.1. Detector : UV 254 nm
6.2. Column : Zorbax, NH2 5 μm, 4.6×250 mm
6.3. Column Temp : 30 ℃
88
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
6.4. Injection volume : 10 μL
6.5. Flow rate : 1 mL/min
6.6. Run time : 10 min.
6.7. Column maintenance
6.7.1. 분석 완료 후 전 시스템을 증류수로 세척한다(최소 30 min.이상)
6.7.2. 분석 컬럼은 100 % methanol 또는 acetonitrile에 채워서 보관한다.
7. 결과
7.1. 검량선 작성
표준용액과 시험용액을 동일조건에서 분석하여 머무름 시간을 비교하여
동일물질인지 정성 확인 후 표준용액의 피크면적 또는 높이에 의해 구한
검량선을 사용하여 시험용액의 비타민 C의 농도(μg/mL)를 구하고, 다음
식에 의해 검사시료 중 비타민 C의 함량(mg/100 g)을 산출한다.
7.2. 계산
비타민 C 함량 (mg/100 g)= S ×
 ×
×

100
1000
T= 검사시료채취량(g)
S=시험용액중의 비타민 C의 농도(μg/mL)
a=시험용액의 전량 (mL)
b=시험용액의 희석배수
8. 참고문헌
8.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
정밀검사발전연구회
89
II. 유가공품 시험법
붙임 1. Standard 및 sample chromatogram
1-1. Standard chromatogram
DAD1 B, Sig=254,4 Ref=360,100 (080304VC\VIT_C009.D)
mAU
6.906 - Vitamin C
80
60
40
20
0
0
2
4
6
8
mi
8
mi
1-2. Sample chromatogram
DAD1 B, Sig=254,4 Ref=360,100 (080304VC\VIT_C006.D)
mAU
80
6.834 - Vitamin C
60
40
5.234
20
0
0
90
2
4
6
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
붙임 2. 검사흐름도
시료 채취(1 g)
↓
10 % HPO3 1 mL, 10 min 현탁
↓
5 % HPO3 25 mL, shaking 5min
↓
50 mL tube를 5 % HPO3로
50 mL까지 채운다
↓
원심분리기(3,000 r/min,15 min)
↓
상층액 1~3 mL filter
(nylon syringe fiter)
↓
HPLC 분석
↓
계산 및 결과판정
정밀검사발전연구회
91
II. 유가공품 시험법
8.7 비타민 D
1. 분석원리
조제분유시료를 전처리 (비누화, 추출, 정제)한 다음 HPLC로 분석하여 표준
용액의 검량선을 이용하여 분석농도를 산출한다. 조제분유 중의 비타민 D를
분석하기 위해 시료의 농도가 0.5 IU/mL가 되도록 채취하여 전처리 한 후 전량을 1
mL로 하여 HPLC/자외부(UV) 검출기로 분석한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
조제분유․조제우유, 성장기용조제분유․성장기용조제우유
2.2. 기준
2.2.1. 조제분유․조제우유: 200~400 IU/100 g
2.2.2. 성장기용 조제분유․성장기용조제우유: 200~600 IU/100 g
주의) 조제우유 및 성장기용조제우유의 검사기준 적용은 조제분유 및 성장기용
조제분유 수분규격(5.0 %)을 기준으로 하여 환산적용한다.
3. 장치
3.1. 둥근 바닥 플라스크 : 125 mL 또는 250 mL용
3.2. Separating funnel : 250 mL
3.3. SPE column : Silica, 6 cc, 500 mg(Waters,WAT043400)
3.4. Vacuum manifold
3.5. 진공펌프
3.6. 환류냉각장치
3.7. 회전증발농축기
3.8. HPLC : Waters2695(UVD), quaternary pump
3.9. Balance : 분석저울 0.1 mg까지, 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. Acetic acid(HPLC급)
4.1.2. Acetonitrile(HPLC급)
92
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
4.1.3. Ethyl acetate(HPLC급)
4.1.4. Dichloromethane(HPLC급)
4.1.5. Ethanol, absolute(HPLC급)
4.1.6. Isopropanol(HPLC급)
4.1.7. n-hexane(HPLC급)
4.1.8. Methanol(HPLC급)
4.1.9. Phenolphtalein(분석급)
4.1.10. Potassium hydroxide, KOH(분석급)
4.1.11. Sodium sulfate anhydrous, Na2SO4(분석급)
4.2. 시액
4.2.1. 10 % Acetic acid
Acetic acid 10 mL를 100 mL vol. flask에 넣은 후, 증류수로 용량을 맞
춘다.
4.2.2. IPA solution A
Isopropanol 2 mL를 1 L vol. flask에 넣은 후, dichloromethane으로 용
량을 맞추고 잘 혼합한다.
4.2.3. IPA solution B
Isopropanol 200 mL를 1 L vol. flask에 넣은 후, dichloromethane으로
용량을 맞추고 잘 혼합한다.
4.2.4. Ethanolic potassium hydroxide (KOH) solution (사용시 제조)
Ethanol 310 mL에 KOH 140 g을 녹인 후 증류수 50 mL를 넣고
혼합한다.
4.2.5. 1 % phenolphtalein solution
Phenolphtalein 1 g을 100 mL vol. flask에 넣고, ethanol로 용량을 맞춘다.
4.3. 표준물질
Ergocalciferol(Vitamin D2) (USP 1239005) : Internal standard
Cholecalciferol(Vitamin D3) (USP 1131009)
4.4. 표준용액 제조
4.4.1. Vitamin D2 standard solution(Internal standard)
․ Stock standard solution(150 μg/mL)
- Vitamin D2 30 mg을 200 mL vol. flask에 넣고 ethanol에 녹인다.
․ Intermediate standard solution 1(3 μg/mL)
정밀검사발전연구회
93
II. 유가공품 시험법
- Stock sol.을 4 mL 채취하여 200 mL vol. flask에 넣고 ethanol에 녹
인다.
․ Working standard solution 2(0.06 μg/mL)
- Intermediate sol.을 4 mL 채취하여 200 mL vol. flask에 넣고 ethanol에
녹인다.
4.4.2. Vitamin D3 standard solution
․ Stock standard solution(150 μg/mL)
- Vitamin D3 30 mg을 200 mL vol. flask에 넣고 ethanol에 녹인다.
․ Intermediate standard solution 1(3 μg/mL)
- Stock sol.을 4 mL 채취하여 200 mL vol. flask에 넣고 ethanol에 녹
인다.
․ Working standard solution 2(0.06 μg/mL)
- Intermediate sol.을 4 mL 채취하여 200 mL vol. flask에 넣고 ethanol에
녹인다.
4.5. Vitamin D2, D3의 농도 계산
D2 or D3 IU/mL =
×××
× 1.05
××
W : 표준품 채취량 (mg)
4 : dilution factor
40,000 : IU vitamin D/mg
200 : 표준용액 제조량
1.05 : pre-vitamin D를 위한 환산계수(농도인자)
Vit D 1 mg=40,000 IU
5. 시험방법
5.1. 검화(saponification) 및 추출
5.1.1. 시료 중 비타민 D 농도가 0.5 IU/mL가 되도록 조제분유를 증류수로
희석한다.
주의) 0.5 IU/mL가 되도록 25 mL를 만들기 위해서 조제분유 몇 g을 취할 것인
가를 계산한다.
예) 검사대상 조제분유의 표시가 350 IU/100 g 이라면,
94
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
※ 조제분유 시료 채취량(g) =
    

즉, 조제분유 3.57 g을 취한 후, 증류수에 녹여 25 mL이 되게 한 후
이를 시험용액으로 한다.
참고) 1 μg vitamin D = 40 IU
5.1.2. 표준용액 D2, D3를 4 mL씩 채취하여 농축 플라스크에 넣고, 증류수 15mL를
첨가한 후, 시료와 동일하게 전처리한다.
5.1.3. 5.1.1.에서 준비된 시료용액 중 15 mL를 채취하여 농축 플라스크에 넣고
D2(Internal std.) 표준용액 4 mL를 첨가한다.
5.1.4. Ethanolic potassium hydroxide(KOH)용액 15 mL를 가해 환류
냉각기를
부착하여 60 ℃ 비등 수욕중에서 30분간 검화시킨다.
5.1.5. 신속히 냉각하여 실온으로 한 후, separating funnel(amber)에 옮긴다.
5.1.6. 둥근 바닥 플라스크에 증류수 15 mL를 넣고 잘 헹군 후, separating funnel에
옮긴다.
5.1.7. 다시 n-hexane 60 mL를 플라스크에 넣고 헹군 후, separating funnel에 합친다.
5.1.8. Separating funnel을 90초간 격렬하게 진탕한 후 10분 정도 정치하여 층을
분리시킨다.
5.1.9. 물층인 아래층을 버리고, 증류수 15 mL를 다시 넣고 90초간 진탕한 후
10분 정체시킨 뒤 분리된 하층을 버린다.
5.1.10. 1 % phenolphthalein 용액 1방울, 증류수 15 mL를 넣는다.
5.1.11. Separating funnel을 흔들면서 중성(무색)이 될 때 까지 10 % acetic
acid를 넣은 후, 층이 분리 되면 물층(하층)을 버린다.
주의) 10 % acetic acid 용액 약 100~150 μL 소요
5.1.12. n-hexane층(상층)을 sodium sulfate를 통과시켜 탈수하고, 받은 액을
농축플라스크에 넣어 40~50 ℃에서 감압건조한 후 잔류물을 IPA sol. A
2 mL에 녹인다.
5.2. 고체상 추출(SPE extraction)
5.2.1. SPE용 silica(500 mg) 컬럼에 IPA sol. B 4 mL를 흘려주고, 바로 IPA sol.
A 5 mL를 흘려준다.
5.2.2. 5.1.12.의 용액을 loading한다.
5.2.3. 농축플라스크를 IPA sol. A 1 mL로 세척하고 컬럼에 함께 로딩한다.
5.2.4. IPA sol. A 2 mL로 컬럼을 세척한다.
5.2.5. 시험관에 IPA sol A 7 mL로 용출한 후, 질소를 이용하여 완전히 건조
시킨다.
정밀검사발전연구회
95
II. 유가공품 시험법
5.2.6. 시험관에 acetonitrile 1 mL를 넣고 vortexing한다.
5.2.7. 0.2 μm nylon syringe filter로 여과한 후 vial에 담아 HPLC에 주입한다.
6. 기기분석조건
6.1. Detector : UV 265 nm
6.2. Column: C18, 250×6 mm, 5 μm(Alltech 201TP54)
6.3. Guard column(VYDAC 300 C18 Guard kit 5μm, 4.6×10 mm, Alltech
201GK54T)
6.3. Column temp.: 30 ℃
6.4. Injection volume : 250 μL
6.5. Mobile phase : Acetonitrile, Methanol, Ethyl acetate
Table 1. Mobile phase(gradient mode)
Time(min)
0
33
33.5
36
36.5
38
45
Flow rate
(mL/min)
0.7
0.7
2.5
2.5
2.5
2.5
0.7
Acetonitrile % Methanol % Ethyl acetate %
91
91
0
0
91
91
91
9
9
0
0
9
9
9
0
0
100
100
0
0
0
6.6. Column maintenance
6.6.1 분석 완료후 전 시스템을 100 % methanol로 세척한다
6.6.2 분석 컬럼은 100 % methanol을 채워서 보관한다.
7. 결과
7.1. 검량선 작성
표준용액과 시험용액을 동일조건에서 분석하여 머무름 시간을 비교하여 동일
물질인지 정성 확인 후 표준용액의 피크면적 또는 높이에 의해 구한 검량선
을 사용하여 시험용액의 비타민 D의 농도(IU/mL)를 구하고, 다음 식에 의해
검사시료 중 비타민 D의 함량(IU/100 g)을 산출한다.
96
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
7.2. 계산
비타민 D 함량 (IU/100 g)= S ×
 ×
× 100

T= 검사시료채취량(g)
S=시험용액중의 비타민 D의 농도(IU/mL)
a=시험용액의 전량 (mL)
b=시험용액의 희석배수=25/15 = 1.67
8. 참고문헌
8.1. AOAC official method
정밀검사발전연구회
97
II. 유가공품 시험법
붙임 1. Standard 및 sample chromatogram
1-1. Standard chromatogram
붙임 2. 검사흐름도
0.5 IU/ mL에 해당하는
시료 채취(15 mL)
↓
ethanolic KOH 15 mL 첨가
↓
Saponification (30 min)
↓
Extraction (n-hexane 60 mL)
↓
증류수로 세척
(phenolphthalein sol. 첨가)
↓
SPE extraction
↓
HPLC 분석
◦Detector : UV 265 nm
↓
계산 및 결과판정
98
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
8.8 비타민 K
1. 분석원리
조제분유 중의 비타민 K를 분석하기 위해 시료 1~2 g을 채취하여 전처리
한 후 전량을 1 mL로 하여 HPLC/FLD로 분석한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
조제분유․조제우유, 성장기용조제분유․성장기용조제우유
2.2. 기준
2.2.1. 조제분유․조제우유 : 20 μg/100 g 이상
2.2.2. 성장기용 조제분유․성장기용조제우유 : 20 μg/100 g 이상
주의) 조제우유 및 성장기용조제우유의 검사기준 적용은 조제분유 및 성장기용
조제분유 수분규격(5.0 %)을 기준으로 하여 환산 적용한다.
3. 장치
3.1. Post reaction column
3.2. Test tube, cap : glass재질
3.3. Water bath
3.4. pH meter
3.5. 원심분리기
3.6. HPLC : Agilent 1100(FLD)
3.7. Balance : 분석저울 0.1 mg까지, 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. Acetic acid(HPLC급)
정밀검사발전연구회
99
II. 유가공품 시험법
4.1.2. Ethanol(HPLC급)
4.1.3. Dichloromethane(HPLC급)
4.1.4. Lipase (Sigma L1754) : 냉장보관
4.1.5. Hexane(HPLC급)
4.1.6. Isopropanol(HPLC급)
4.1.7. Methanol(HPLC급)
4.1.8. Potassium carbonate, K2CO3(분석급) (Merck 1.04928)
4.1.9. Potassium hydroxide, KOH(분석급) (Merck 1.05029)
4.1.10. Potassium phosphate, monobasic, KH2PO4(분석급) (Sigma P-0662)
4.1.11. Sodium acetate, anhydrous(분석급)(Sigma S-2889)
4.1.12. Zinc chloride, ZnCl2(분석급) (Merck 1.08816)
4.1.13. Zinc powder, particle size 63㎛, Zn(분석급) (Merck 1.08816)
4.1.14. 3차 증류수
4.2. 시액
4.2.1. 40 % KOH solution
KOH 40 g을 100 mL vol. flask에 넣은 후 증류수 50 mL로 녹이고 증류
수로 용량을 맞춘다.
4.2.2. 0.8 M KH2PO4 buffer solution
KH2PO4 55.0 g을 500 mL 비이커에 넣은 후 증류수 350 mL를
넣고
녹인 후 40 % KOH sol.을 이용해 pH을 7.9~8.0으로 맞춘 후 500 mL
vol. flask에 넣고 증류수로 용량을 맞춘다.
4.2.3. Reagent alcohol : Ethanol 95 mL와 methanol 5 mL를 혼합한다. (V/V)
4.3. Mobile phase
4.3.1. Dichloromethane 100 mL, methanol 900 mL를 1,000 mL 메스
실린더에 넣는다.
4.3.2. ZnCl2 1.37 g을 50 mL centrifuge tube에 넣고 methanol 5 mL를 가하
여 녹인후 4.3.1.에 혼합한 후 혼합액으로 tube를 여러 번 세척하여
4.3.1.에 모은다.
4.3.3. Acetic acid 0.3 g을 50 mL tube에 넣고 4.3.1.에 혼합한 후 혼합액을
이용하여 tube를 세척하여 4.3.1.에 모은다.
4.3.4. Sodium acetate 0.41 g을 4.3.1.에 혼합한 후 magnetic bar를 넣고 5분
간 stirring한다.
4.3.5. 0.2 μm nylon filter로 여과하여 탈기한다.
100
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
4.4. 표준물질
Vitamin K (Sigma A-1417)
4.5. 표준용액 제조
4.5.1. Stock standard solution
Vitamin K 0.020~0.030 g을 50 mL vol. flask에 넣은 후 isopropanol로
용량을 맞추어 냉동실에 보관한다.
4.5.2. Intermediate standard solution
Stock sol.용액 1 mL를 10 mL vol.flask에 넣고 methanol로 채운다.
4.5.3. Working standard solution 1, 2, 3
4.5.2의 용액을 methanol로 각각 5배, 10배 20배 희석한다.
5. 시험방법
5.1. 분해
5.1.1. 시료(조제분유 1.0 g, 액상조제우유 10.0 g)를 test tube에 넣는다.
5.1.2. 40 ℃ 증류수 15 mL(또는 상온)를 넣은 후 잘 흔든다.
5.1.3. 0.8 M KH2PO4 buffer solution 5 mL를 넣는다.
5.1.4. 분해효소인 lipase 1.0 g을 넣고 vortexing하고 뚜껑을 단단히 막고
30~60초간 흔들어 lipase가 충분히 분산되도록 한다.
5.1.5. 37 ℃ 항온수조에서 20분 간격으로 15초간 흔들면서 120분간 효소처리
한다.
5.1.6. Reagent alcohol 10 mL를 넣어 잘 흔든 후 K2CO3 1 g을 넣고 흔든다.
5.2. 추출
5.2.1. Hexane 30 mL를 넣고 10분이상 세게 흔든다.
5.2.2. 냉장고(암실)에서 10분 이상 정체하면 두층으로 분리된다.
주의) 층분리가 10분 이상 소요되거나, 층분리가 완전하지 않으면 1,000r/min에
서 10 분간 원심분리한다.
5.2.3. 상층액(시료 조제분유류, 액상조제우유류는 5 mL, SRM은 1 mL)을 test
tube에 옮긴 후 질소를 이용하여 건조한 후 methanol 1 mL를 넣고
뚜껑을 막은 후 세게 진탕한다.
5.2.4. Syringe filter로 여과 후 시험용액으로 한다.
정밀검사발전연구회
101
II. 유가공품 시험법
6. 기기분석조건
6.1. Detector : FLD, Exitation 243 nm, Emission 430 nm
6.2. Column : LiChrospher RP-18(Merck 1.50833)
6.3. Post column : 사용하기 전 Zn을 충진시킨다.
6.4. Column Temp. : 27 ℃
6.5. Flow rate : 1.1 mL/min
6.6. Injection vol : 10 μL
6.7. Column maintainence
6.7.1 분석완료후 전 시스템을 100 % methanol로 채운다.
6.7.2 분석컬럼은 100 % methanol을 채워서 보관한다.
6.7.3. Post reaction column은 충진된 Zn을 제거한 후 empty column을 0.5 M
HCl에 담가 세척하고 이어서 증류수, methanol로 세척하여 건조시킨다.
7. 결과
7.1. 검량선 작성
표준용액과 시험용액을 동일조건에서 분석하여 머무름 시간을 비교하여
동일물질인지 정성 확인 후 표준용액의 피크면적 또는 높이에 의해 구한
검량선을 사용하여 시험용액의 비타민 K의 농도(μg/mL)를 구하고, 다음
식에 의해 검사시료 중 비타민 K의 함량(μg/100 g)을 산출한다.
7.2. 계산
비타민 K 함량 μg(/100 g)= S ×
 ×
× 

T= 검사시료채취량(g)
S=시험용액중의 비타민 K의 농도(μg/mL)
a=시험용액의 전량 (mL)
b=시험용액의 희석배수
8. 참고문헌
8.1. AOAC official method.
102
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
붙임 1. Standard 및 sample chromatogram
1-1. Standard chromatogram
1-2. Sample chromatogram
정밀검사발전연구회
103
II. 유가공품 시험법
붙임2. 검사흐름도
시료 1~2 g
↓
40 ℃ 증류수 15 mL 첨가,
0.8M KH2PO4 buffer solution
5 mL첨가
↓
Lipase 1.0 g 첨가
37 ℃항온수조에서
120분간 효소처리
↓
Reagent alcohol 10 mL,
K2CO3 1 g 첨가
↓
Hexane 30 mL넣고
10분이상 세게 흔든다
↓
냉장고(암실)에서 10분 이상 정체
↓
질소농축 후 methaol 1mL 넣고,
filter(0.2μm, nylon)
↓
HPLC 분석
↓
계산 및 결과판정
104
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
9
조제유류 중 무기물 시험법
무기물은 골조직, 연조직, 체액, 효소 등의 구성 성분이고, 체내의 모든 체액을
중성(산, 염기 평형조절)으로 유지하는데 중요한 역할을 한다. 비록 그 양은 소량
이지만 절대적으로 필요한 영양소이다. 광물질 또는 회분(ash)이라고도 하며
사료에는 보통 회분으로 표시되어 있다. 칼슘(Ca), 마그네슘(㎎), 칼륨(K), 나트륨
(Na), 인(P), 황(S), 염소(Cl) 등이 주요원소이며, 그밖에도 철(Fe), 코발트(Co), 구
리(Cu), 망간(Mn), 아연(Zn), 요오드(I) 등이 있다. 무기물은 단백질, 지방,
탄수
화물과는 달리 체내에서 생산되거나 또는 완전히 소비 되어 없어지지는
않는
다. 식품으로 섭취되고 배설된다.
축산물의 가공기준 및 성분규격의 조제유류중 무기물 기준
유형
조제분유
조제우유
성장기용조제분유
성장기용조제우유
기타조제분유
기타조제우유
나트륨(mg/100 g)
100~300
100~425
-
칼륨(mg/100 g)
400~1000
400이상
-
염소(mg/100 g)
275~750
275이상
-
칼슘(mg/100 g)
250이상
450이상
-
인(mg/100 g)
125이상
300이상
-
마그네슘(mg/100 g)
30.0이상
30.0이상
-
철(mg/100 g)
1.25이상
(철분강화제품의
경우 5.0이상)
5.0~10.0
-
요오드(μg/100 g)
25이상
25이상
-
구리(μg/100 g)
300이상
-
-
아연(mg/100 g)
2.5이상
2.5이상
-
망간(μg/100 g)
25이상
25이상
-
항목
정밀검사발전연구회
105
II. 유가공품 시험법
9.1 무기물 9종
1. 분석원리
조제분유 중의 무기물 9종(Ca, K, Zn, Fe, Mg, Na, Cu, Mn, P)을
분석
하기 위해 시료 1 g을 채취하여 전처리(microwave법)한 다음 각각 100, 1000,
2000배 희석하여 AAS 또는 ICP-OES(ICP-MS)로 분석한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상 :
조제유류(조제분유, 조제우유, 성장기용 조제분유, 성장기용 조제우유)
2.2. 기준
축산물의 가공기준 및 성분규격의 조제유류 중 무기물 기준 참고
3. 장치
3.1. Volumetric flask
3.2. Volumetric pipette
3.3. Vessel cap opener
3.4. Liner & cap(내부용기) : Teflon 재질
3.6. VHP vessel & cap(외부용기)
3.7. Sensor vessel & cap
3.8. Microwave Digestion System(MDS)
3.9. Atomic Absortion Spectrometer(AAS) 또는
Inductively Coupled Plasma(ICP-OES)
4.0. Balance : 분석저울 0.1 mg까지 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. Nitric acid(HNO3) conc.(Merck)
4.1.2. Matrix modifier Pd, Mg (AAS 분석시)
Pd : 10,000 mg/L in 15 % HNO3
Mg : 10,000 mg/L, Mg(NO3)2
4.1.3. 3차 증류수
106
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
4.2. 시액
4.2.1. 50 % HNO3 solution
HNO3 conc.(60~70 %) 500 mL을 1 L vol. flask에 넣고 증류수로 채운다.
4.2.2. 0.5 N HNO3 solution
HNO3 원액(60~70 %) 35 mL을 1 L Vol. flask에 넣고 증류수로 채운다.
4.3. 표준물질
Ca, K, Zn, Fe, Mg, Na, Cu, Mn, P 1,000 μg/mL in 2~3 % HNO3 sol.
주의) Perkin Elmer 등 전문적인 회사에서 생산된 AAS, ICP용 시약사용. P
는 예외적으로 증류수에 녹아있음. 가능하면 AAS용 사용할 것. 당일
제조를 원칙으로 하나, 제조 후 보관상태 등에 따라서 30일 정도 사
용할 수 있다.
4.4. 표준용액 제조 (AAS 분석시)
4.4.1. Cu, Mn, P standard solution (matrix modifier 이용)
․ Stock standard solution(Cu 50 μg/mL, Mn 10 μg/mL)
100 mL vol. flask에 표준물질 Cu 5mL, Mn 1 mL을 넣고 0.5 N
HNO3 로 채운다.
․ Working standard solution 1 (Cu 5 μg/mL, Mn 1 μg/mL)
50 mL vol. flask에 stock sol. 5 mL을 취한 후 지시선 까지 채운다.
․ Working standard solution 2 (Cu 0.5 μg/mL, Mn 0.1 μg/mL)
50 mL vol. flask에 Inter. sol.1을 5 mL을 취한 후 지시선 까지 채운다.
․ Working standard solution 3
(Cu 0.05 μg/mL, Mn 0.01 μg/mL, P 50 μg/mL)
100 mL vol. flask에 표준물질 P(1,000 μg/mL) 5 mL을 넣고, working
sol. 2를 10 mL을 넣은 후 지시선 까지 채운다.
4.4.2. Ca, K standard solution
․ Stock standard solution (Ca 10 μg/mL, K 10 μg/mL)
100 mL vol. flask에 표준물질 Ca 1 mL, K 1 mL을 넣고 0.5 N HNO3로
채운다.
․ Working standard solution 1 (Ca 5 μg/mL, K 5 μg/mL)
50 mL vol. flask에 stock sol. 25 mL을 취한 후 지시선 까지 채운다.
정밀검사발전연구회
107
II. 유가공품 시험법
․ Working standard solution 2 (Ca 2.5 μg/mL, K 2.5 μg/mL)
50 mL vol. flask에 working std 1 25 mL을 취한 후 지시선 까지
채운다.
․ Working standard solution 3 (Ca 1 μg/mL, K 1 μg/mL)
50 mL vol. flask에 working std 2 20㎖을 취한 후 지시선 까지
채운다.
4.4.3. Zn, Fe, Mg, Na standard solution
․ Stock standard solution (Zn, Mg, Fe 10 μg/mL, Na 20 μg/mL)
100 mL vol. flask에 표준물질 Zn, Fe, Mg 1 mL을 넣고 0.5 N HNO3로
채운다.
주의) Na는 유리에 흡착되어 결과에 영향을 미치게 되므로 std. sol. 제조시
플라스틱으로 된 vol. flask를 사용하거나 50 mL tube를 사용한다. 즉,
Zn, Fe, Mg와는 별도의 플라스틱 vol. flask나 tube에 제조한다.
․ Working standard solution 1 (Zn, Fe, Mg 1 μg/mL, Na 2 μg/mL)
100 mL vol. flask에 stock sol. 10 mL을 취한 후 지시선 까지 채운다.
․ Working standard solution 2 (Zn, Fe, Mg 0.5 μg/mL, Na 1 μg/mL)
50 mL vol. flask에 working std. 1 25 mL을 취한 후 지시선 까지 채운다.
․ Working standard solution 3 (Zn, Fe, Mg 0.25 μg/mL, Na 0.5 μg/mL)
50 mL vol. flask에 std2 25 mL을 넣은 후 지시선 까지 채운다.
5. 시험방법
5.1. 시료 전처리
5.1.1. Sensor vessel 과 microwave digestion 장비를 필요에 따라 calibraton 한다.
5.1.2. Liner(teflon 재질) 및 cap을 준비한다.(시료수+1개(sensor vessel용))
주의) 사용하기 전 liner cap의 rupture disk를 교체한다.
OP Guard를 사용하는 용기일 경우 rupture disk를 교체할 필요가 없다.
5.1.3. Liner에 시료 1 g, 50 %(v/v)HNO3 10 mL, 37 % H2O2(원액) 1 mL을 넣고
30분간 방치한다.
5.1.4. Vessel(외부용기)에 liner를 넣고 cap으로 막은 후 microwave로 분해한다.
5.1.5. 분해가 완료되면, 30분 정도 fan을 돌려서 장비 안에서 vessel을 식힌다.
5.1.6. Vessel을 꺼내어 다시 냉장실(30min) 또는 냉동실(15min)에서 충분히 식
힌다. 상온에서 냉각시켜도 무방하다.
주의) 단, senseor vessel 은 반드시 상온에서 식힌다.
108
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
5.1.7. Vessel 및 liner의 cap에 있는 bolt를 약간 돌려서 fume을 제거한 후
cap을 open 한다.
주의) 반드시 후드 안에서 작업할 것.
5.1.8. 부유물이 없는 것을 확인한 후 여과지(5C)로 여과하고 목적하는 농도로
증류수를 이용해서 희석한다.
5.1.9. 전처리 된 5.1.8의 내용물을 전부 100 mL vol. flask에 옮긴 후 증류수
로 희석한다.(×100배)
5.1.10. 50 mL vol. flask에 5.1.9.의 용액 5 mL을 넣고 증류수로 희석한다. (×1000배)
5.1.11. 50 mL centrifuge tube 에 5.1.10.의 용액 10 mL을 넣고 증류수 10㎖을
넣어 희석한다.(×2,000배)
6. 기기분석조건
6.1. AAS분석
6.1.1. Flame mode : Ca, K, Zn, Fe, Mg, Na 분석
주의) AAS를 켜기 전 compressor의 밸브를 열어 수분을 먼저 제거한다. 이어
gas(acetylene or argon) 밸브를 열고 나서 기기(AAS)및 컴퓨터의 전원을
켠다.
□ 컴퓨터에서 AAS 프로그램 아이콘 클릭
→ 장치모드가 furnace로 되어 있으면 >change technique에서 flame 선택
→ 장치모드가 flame 상태에서
>file>open>work space에서 원하는 work space 파일 선택
※ LYH flame은 직접 조제분유 분석에 필요한 분석화면을 구성한
것으로 필요시 만들어서 사용 가능.
□ Lamp warming up
Lamp를 클릭 하여 분석하고자 하는 lamp를 켠다. 최대 4개까지 가능
하므로, 분석이 끝날 때마다 lamp를 끈 후 분석해야 할 원소의 lamp를
켜도록 한다. EDL lamp의 경우, warming up 시간이 오래 걸리므로
미리 켜둔다.(대략 30~40min.정도)
□ Method & sample info. Open 및 result data save 경로 설정
분석대상 원소에 대한 method 와 sample info.를 open 한다.
이때 시료번호 등을 입력한다.
□ Flame On 아이콘을 클릭 하여 flame을 켠다. flame을 켜기 전 시료
주입 line을 먼저 증류수에 담근다.
주의) 시료가 주입되는 line은 항상 증류수에 담겨 있어야 한다. line 내부가
마르는 것은 기기에도 좋지 않을뿐더러 분석결과에도 영향을 준다.
정밀검사발전연구회
109
II. 유가공품 시험법
□ Blank를 분석한다.
blank는 0.5 N HNO3를 사용하도록 하며, 값이 0.000이 되거나 근접할
때 까지 반복한다.(보통 2회)
□ 표준용액을 분석한다.
저농도부터 고농도 순으로 분석을 시행한다.
Standard curve의 correlation 값은 가급적 0.99 이상이 좋다.
□ 시료용액을 분석한다.
Ca, Mg는 1,000배 희석한 시료용액을, Zn, Fe는 100배 희석한 시료용
액, K, Na는 2000배 희석한 시료용액을 사용하여 분석한다.
□ Flame 분석이 끝나면,
→ 증류수를 10분간 흘려준 후, flame off 아이콘을 클릭 하여 끈다.
→ Acetylene gas 밸브를 잠근 후, bleed gas 아이콘을 클릭 하여 잔류
가스를 제거한다.
6.1.2. Graphite Furnace mode : Cu, Mn, P 분석
□ Argon gas 밸브를 열고 >change technique에서 furnace를 선택
→ work space에서 LYH를 선택
□ Graphite tube의 교체시, tube cleaning 과 Align tip을 실시한다.
-tube 교체 및 align tip은 기기 manual을 참고한다.
□ Furnace On을 클릭한다.
□ Lamp를 선택 하고, 분석원소에 대한 해당 method를 선택한다. 그에
따른 sample info.를 선택한 후 use entire sample info를 선택하여
smaple 번호 등을 입력한다.
□ Blank, STD, sample, modifier를 autosampler tray에 놓고 자동분석을 시
작한다.
STD는 working std. sol 3의 용액을 사용한다.
(Cu 0.05 μg/mL, Mn 0.01 μg/mL, P 50 μg/mL)
□ Modifier 용액 제조
- Cu, Mn 분석용 modifier 희석
: Pd modifier 1 mL → 10 mL 증류수
Mg modifier 0.1 mL → 10 mL 증류수
- P 분석용 modifier 희석
: Pd modifier 4 mL → 10 mL 증류수
Mg modifier 0.17 mL →10 mL 증류수
110
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
6.2. ICP 분석
6.2.1. ICP로 분석시 다성분 표준용액 제조는 아래와 같다.
(기기분석조건에 따라 변형될 수 있음)
원소
P
Ca
Na
K
Zn
Fe
Mg
Mn
Cu
표준물질 농도
(μg/mL)
1000
1000
1000
1000
1000
1000
1000
1000
1000
회석1
희석2
100
100
100
100
100
100
100
10
10
취한량
mL
5
5
2
2
1
1
1
2
2
제조한농도
(μg/mL)
50
5
2
20
1
1
1
0.2
0.2
위 표에서 제시한 용량을 원소별로 100 mL vol. flask에 취한 후,
0.5 N HNO3 용액으로 정용하여 사용한다. 시료전처리는 5.1.에 따라서
실시한 후, 다음과 같이 희석하여 사용한다.
원소
시료용액 희석
P
100
Ca
1000
Na
2000
K
2000
Zn
100
Fe
100
Mg
1000
Mn
100
Cu
100
6.3. 기기분석시 주의사항
6.3.1. Perkin Elmer의 AAS 800 series의 경우,
기기 사용에 있어서 각종 분석 조건이나 시간 등은 기기 내에 존재
하는, 원소에 대한 각각의 조건들이 있으므로 그것을 보고 작성하면
정밀검사발전연구회
111
II. 유가공품 시험법
바로 분석 조건을 쉽게 만들 수 있다. 더불어 기기에 첨부되어 있는
user guide를 참고하고 필요시 업체에 문의 하면 된다.
6.3.2. 결과값이 이상하면 다시 실험을 해야한다.
6.3.3. Microwave법으로 전처리시 종종 범위안에 들어오지 않는 경우가 있다.
이런 경우 다시 전처리하여 실험을 수행하도록 한다.
6.4. 기구 세척
6.4.1. 1st 방법(1일 이상 소요)
□ 흰색 Liner(teflon 재질)와 cap, vol. pipette 및 무기물용 초자기구(vol.
flask) 등을 세제로 깨끗하게 세척한다.
□ 10 % HNO3 에 1일 이상 담궈 놓는다.
□ 증류수로 세척 후 건조한 다음, rupture disk를 끼운 후 보관함에
보
관한다.
6.4.2. 2nd 방법(세척하는데 1일 이하 소요)
□ Liner를 세제로 세척 후 60~70 % HNO3(원액) 5 mL 정도를 넣는다.
□ Microwave에 넣고 5~10min, 100 ℃정도에서 돌린다. 또는 이에 상응하
는 장치에 넣는다.
□ 질산을 버리고 증류수로 세척 후 30 % HNO3에 4시간 정도 담근다.
그 후 10 % HNO3에 4시간 정도 담근 후 증류수로 세척하고 건조한
다음 보관함에 보관한다.
6.4.3. OPGuard 세척 방법(OPGuard용 용기를 사용할 경우 해당)
□ 가스 누출이 없는 경우
- 전처리 후 시료를 제거하고 OPGuard를 분리한다.
- OPGuard의 외관에 이물질이 묻어 있으면 증류수로 닦고, 잘 건조시
켜 사용하면 된다.
□ 시료 누출이 발생한 경우
- 가스 누출시 올라오는 부분을 면봉을 이용하여 밀어서 OPGuard를
분리한다.(사진참고)
- 스프링을 제외한 나머지 부분을 증류수나 알코올을 이용하여 세척
하고 스프링은 알코올로만 세척하여 건조한 후 재조립한다.
□ 나머지 liner 등은 6.4.1 또는 6.4.2에 따라 세척한다.
주의) 무기물 분석 시에는 사용되는 초자기구를 반드시 무기물용으로 따로
구분하여 사용하도록 한다.
112
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
주의) 무기물 분석시에는 세척이 특히 중요하며, microwave system을 사용할
경우 더 그러하다. Liner에 이전 실험의 잔류물이 묻어 교차 오염이
되면 결과 값이 좋지 않으며, 특히 미량으로 존재하는 중금속(Pb, Cd 등)을
분석할 경우에는 각별히 신경을 써야한다.
7. 결과
7.1. 검량선 작성
피크의 넓이를 구하여 검량선을 작성하여 시험용액의 농도(μg/mL)를 구하고,
다음 식에 대입하여 검사시료 중의 중금속의 량을 구한다.
7.2. 계산
시료 중 검량선에서 얻은 무기물 농도(μg/mL)×희석배수
최종농도(μg/g) =
시료량(g)
(기기 상에서 희석 농도 등이 계산되어 출력되므로, 결과 값을 성분규격상의
단위로 환산하는 작업만 하면 된다.)
8. 참고문헌
8.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
정밀검사발전연구회
113
II. 유가공품 시험법
붙임 1. 검사흐름도
시료 채취
↓
산분해(microwave)
↓
Standard 및 시료 희석
↓
기기분석(AAS 또는 ICP)
↓
계산 및 결과판정
114
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
9.2 요오드(I)
1. 분석원리
전위차를 이용하여 적정법으로 분석한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상:
조제유류(조제분유, 조제우유, 성장기용 조제분유, 성장기용 조제우유)
2.2. 기준 : 25 μg/100 g
3. 장치
3.1. Magnetic bar
3.2. Filter paper : Advantec 5A
3.3. 전극 : 요오드 전극(Metrohm 6.0502.160)
기준 전극(Ag/AgCl전극, Metrohm 6.0726.100)
3.4. 적정기 : Metrohm 736 GP tritino
3.5. Balance : 분석저울 0.1 mg까지, 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. Acetic acid, glacial(HPLC급)
4.1.2. Nickel nitrate․hexahydrate(Aldrich 244074)
4.1.3. 3차 증류수
4.2. 시액
4.2.1. 3 %(v/v)초산용액 : Acetic acid(glacial) 3 mL를 증류수로 희석하여 100
mL로 맞춘다.
4.2.2. 전극 보관 용액 : 요오드 표준원액을 물로 희석하여 1.0 mL/L가 되게
한다. 요오드 전극을 이 용액에 담가서 보관하며 매
주 새 용액으로 교환한다. 차광 보관하며, 3개월간
보존가능하다.
정밀검사발전연구회
115
II. 유가공품 시험법
4.2.3. 이온강도 조절액(5 M 질산나트륨 용액)
질산나트륨 42.5 g을 증류수에 녹여 100 mL이 되게 한다.
참고 ) ISA : ionic strength adjuster를 구매하여 사용할 수 있다.
4.2.4. 2 M Nickel nitrate solution
질산니켈․6수화물 58.2 g을 증류수에 녹여 100 mL가 되게 한다.
4.3. 표준물질
Potassium iodide 또는 Sodium iodide
4.4. 표준용액 제조
4.4.1. Stock standard solution(0.1 M)
요오드로써 12.69 g을 증류수 1 L에 녹인다.
실온에서 차광 보관하며, 6개월간 보존 가능하다.
4.4.2. Intermediate standard solution(101.5 μg/mL)
Stock sol. 8.0 mL를 증류수로 희석하여 1 L가 되게 한다.
실온에서 차광 보관하며, 2주간 사용 가능하다.
4.4.3. Working standard solution Ⅰ(1 μg/mL)
4.4.2.의 std sol. 5.0 mL를 증류수로 희석하여 500 mL가 되게 한다.
실온에서 차광 보관하며, 2주간 사용 가능하다.
4.4.4. Working standard solution Ⅱ(0.1 μg/mL).
4.4.3.의 working sol.을 증류수로 10배 희석한다.
실온에서 차광 보관하며, 2주간 사용 가능하다.
4.4.5. 기지의 첨가 표준용액
4.4.2.의 intermediate sol. 10.0 mL를 증류수로 희석하여 1 L가 되게 한다. 이
액 100 mL에 이온강도조절액(ISA), 2 M 질산니켈 용액, 증류수를 각각 1.0
mL씩 첨가한 후 잘 혼합한다. 사용시 조제한다.
5. 시험방법
5.1 시료의 전처리
5.1.1. 시료 10 g을 250 mL vol. flask에 넣고 약 100 mL의 증류수로 녹인다.
(액상시료일 경우 100 mL를 250 mL vol. flask에 넣는다.)
5.1.2. 3 % 초산용액 10 mL를 가한 후 증류수로 채운다.
5.1.3. 이 액을 여과지로 여과하되, 최초의 여액 10 mL는 버리고 맑은 여액을
100 mL vol. flask에 받아서 시험용액으로 한다.
116
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
6. 기기분석조건
6.1. 전극 기울기 체크
6.1.1. 전극을 요오드 표준용액 Ⅱ(6.2.4.) 100 mL에 담그고 ISA, 2M 질산니켈
용액, 증류수를 각각 1.0 mL씩 가하고 약 2~5분 후 전위계가 안정되었
을 때 E1값을 측정한다.
주의) 전극을 오랫동안 사용하지 않았을 경우 30분 이상 컨디셔닝이 필요하다.
전극안의 3mol KCl은 필요시 교체한다.
6.1.2. 전극을 증류수로 씻고 건조시킨 후 요오드 표준용액 Ⅰ(6.2.3.) 100 mL에
담그고 ISA, 2M 질산니켈 용액, 증류수를 각각 1.0 mL씩을 가하고, 약
2~5분 후 전위계가 안정되었을 때 E2값을 측정한다.
6.1.3. 전극을 증류수로 씻고 건조시킨다. 전극의 기울기(S)는 E2-E1로 계산
된다.
매 4시간마다 기울기를 측정하며, 직전에 측정한 기울기를 사용하여 요
오드 함량을 계산하다.
6.2. 측정
6.2.1. 시험용액 100 mL를 비이커에 넣고 magnetic bar로 저어주면서 ISA, 2M
질산니켈 용액, 진한 질산을 각각 1.0 mL씩 가하고 전극을 담근 후
약 2분 후 전위계가 안정되었을 때 E3값을 측정한다.
6.2.2. 이 액에 즉시 기지의 첨가 표준용액 10 mL를 가하고 약 2~5분 후
전위계가 안정되었을 때, E4값을 측정한다.
주의) 측정시 전위계가 안정되는 시간을 일정하게 한다.
7. 결과
7.1. 계산
검사시료 중의 요오드 함량(C) 계산은 다음과 같다.
C(μg/100 g)= Q × 0.9854 × V × 100
Q = 0.0885/{antilog[(E4-E3)/S]-0.912}
0.9854 : 기지의 첨가 표준용액의 요오드 농도(μg/mL)
V : 희석 배수
0.0885 : 표준용액 첨가 mL수/(표준용액첨가전 총 mL수 + 표준용액 첨가수)
= 10/(103+10)
정밀검사발전연구회
117
II. 유가공품 시험법
0.912 : 표준용액 첨가전 총 mL수/(표준용액첨가전 총 mL수+표준용액첨가 mL수)
=103/(103+10)
S : E2-E1
8. 참고문헌
8.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
118
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
붙임 1. 검사흐름도
시료 채취
↓
3 % 초산첨가 후 여과
↓
전극 측정
↓
계산 및 결과판정
정밀검사발전연구회
119
II. 유가공품 시험법
9.3 염소(Cl)
1. 분석원리
조제분유 중의 염소를 분석하기 위해 시료 10 g을 채취하여 전처리(추출)한
다음 전량을 10 mL로 하여 적정법으로 분석한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
조제유류(조제분유, 조제우유, 성장기용 조제분유, 성장기용 조제우유)
2.2. 기준
조제분유․조제우유 : 275~750 mg/100 g
성장기용 조제분유․ 성장기용 조제우유 : 275 mg/100 g 이상
3. 장치
3.1. 전극 : Combined Ag ring electrode.
pH의 변화속에 halides, sulfides, hydrogen sulfide, mercaptans and
cyanides등의 침전적정에 이용(125 mm, 0~70 ℃)
3.2. 전위차 적정기 : Metrohm 736 GP tritino
3.3. Balance : 분석저울 0.1 mg까지, 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1. 0.1 N AgNO3
4.2. 3차 증류수
5. 시험방법
5.1. 시료 전처리
5.1.1 시료 10 g을 채취하여 소량의 증류수로 녹인 후 100 mL vol. flask에 넣
고, 증류수로 채운다.
5.1.2. 종이필터 여과(생략가능)
120
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
5.1.3. 이 액 10 mL을 비이커에 넣고 증류수로 100 mL까지 채운다.
5.1.4. Magnetic bar를 넣고 적정한다.
6. 기기분석조건
6.1. 적정
염소이온과 질산은이 정량적으로 반응한 다음 과잉의 질산은이 크롬산과
반응하여 크롬산은의 침전으로 나타나는 점을 적정점(EP)으로 하여 염소 이
온의 농도를 측정한다.
7. 결과
7.1. 계산
염소함량(mg/100 g) =
 ×  ×  ×  
× 100
검사시료채취량   × 
a = 0.1 N AgNO3표준용액 1 mL에 해당하는 Cl양(mg)
b = 0.1 N AgNO3 적정소비량(mL)
c = 0.1 N AgNO3 표준용액 역가(1.029)
d = 희석배수
8. 참고문헌
8.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
정밀검사발전연구회
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II. 유가공품 시험법
붙임 1. 검사흐름도
시료 채취
↓
시료전처리(희석)
↓
적정
↓
계산 및 결과판정
122
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
10 인공감미료
인공감미료란 식품에 단맛을 주기위해 사용되는 화학적 합성품으로 그 종류
에는 삭카린나트륨, 둘신, 시클라메이트, 아스파탐, 소르비톨이 있으며 그 중
축산물가공품 중 조제분유에 불검출로 되어 있는 삭카린은 분자식 C H NO S
합성감미료의 하나로 분자량 183.2이며, 무색 반투명한 결정으로 수용액의
단맛이 강하여 설탕의 500배에 이른다. 비중은 0.828이다. 1879년 미국의 I. 렘슨
과 K. 팔베르크가 처음으로 합성하였으며, 사카로오스(saccharose)와 비슷하게
명명되었다. 공업적으로는
-톨루엔술폰아미드를 과망간산칼륨 등의 산화제로
산화시켜 제조한다. 녹는점 229 ℃로 에탄올에는 녹지만 물에는 잘 녹지 않으므
로, 물에 녹기 쉬운 NH의 수소를 나트륨으로 치환한 나트륨염 C H NO SNa·2H
O인 가용성사카린이 감미료로 쓰인다. 최근에는 발암성 물질로
의심되어 그 원
인으로 여겨지는 불순물 -톨루엔술폰아미드에 대하여 엄격한 규제를 하고 있다.
1. 분석원리
조제분유 중 인공감미료(사카린)를 분석하기 위해 시료 5 g을 채취하여 전
처리한 후 전량을 50 mL로 하여 HPLC-UV 검출기로 검출한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
2.1.1. 조제유류 (조제분유 ․ 조제우유, 성장기용조제분유 ․ 성장기용조제우유,
기타조제분유 ․ 기타조제우유)
3. 장치
3.1. 장비
3.1.1. Shaker
3.1.2. Centrifuge(5,000 r/min 가능한 것)
3.1.3. Sonicator
3.1.4. Vortex
3.1.5. Balance
3.1.6. HPLC (DAD, PDA 또는 UV detector 중 하나 포함)
정밀검사발전연구회
123
II. 유가공품 시험법
3.2. 기구
3.2.1. Syringe filter 0.45 μm
3.2.2. Volumetric flask
3.2.3. Centrifuge tube(50 mL 용)
3.2.4. Conical tube
3.2.5. Filtration apparatus(Wheaton)
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. 사카린나트륨 표준품 (Saccharin sodium salt, sigma S6047-250g)
4.1.2. Methanol(HPLC 급)
4.1.3. Acetonitrile(HPLC 급)
4.1.4. tetrapropylammonium hydroxide solution(TPA-OH)
◦tetrapropylammonium hydroxide solution(1.0 M in H2O)
(Sigma, 254533-100 g)
◦tetrapropylammonium hydroxide(40 % solution in water)
(Merck, 8.14068.0050., 500 mL)
4.1.5. Potassium ferrocyanide[K4Fe(CN)6․3H2O] (Sigma, P3289, 100 g)
4.1.6. Zinc sulfate(Sigma, 221376-500 g)
4.1.7. o-Phosphoric acid (Fisher, A260-500, 500 mL, 85 % HPLC grade)
4.2. 시액
4.2.1. Carrez Clearing reagent I
: Potassium ferrocyanide 150 g 을 1 L vol.flask 에 넣고 D.W.로 녹임.
4.2.2. Carrez Clearing reagent II
: Zinc sulfate 300 g을 1L vol. flask 에 넣고 D.W.로 녹임.
4.3. 표준용액
4.3.1. Stock standard solution(1,000 μg/mL)
사카린나트륨 0.1 g을 100 mL vol. flask 에 넣고 D.W.로 용해한다.
4.3.2. Working standard solution(1, 5, 10, 20, 50 μg/mL)
124
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
4.3.1.항에서 제조한 용액 0.1, 0.5, 1, 2, 5 mL을 각각 100 mL vol.
flask에 넣고 D.W.로 채워서 검량선용 표준용액으로 한다.(각각의 농도
는 1, 5, 10, 20, 50 μg/mL 임)
5. 시험방법
5.1. 검체 약 5 g을 취하여 물 약 10～20 mL에 녹이고, 발효음료는 잘 섞은
후 검체 약 5 g을 취한다.
5.2. 이 액을 메스플라스크로 옮기고 물 10 mL를 첨가한 후 진탕시킨다.
(shaking 10 min.)
5.3. Carrez clearing reagent I 시약을 2 mL 넣어 섞고 Carrez clearing
reagent II 시약 2 mL를 넣어 2분간 흔들어 섞는다.
5.4. 거품이 발생하면 초음파 처리하여 제거한 후 D.W.로 50 mL 채운 다음 잘
섞는다.
5.5. 실온에서
5,000 r/min 10분간 원심분리하고 상등액을 취하여 0.45 μm
syringe filter로 여과한 액을 시험용액으로 한다.
6. 기기분석조건
6.1. Detector : 자외부검출기(UV), 210 nm
6.2. Column : Symmetry C18 (3.9mm i.d. × 150 mm, 5μm) 또는 이와 동등한 것
(e.g. Capcellpak, C18, 4.6 mm I.d. × 550 mm, 5 μm )
6.3. Column temp. : 30 ℃
6.4. Mobile phase :
0.005 M KH2PO4(0.01 M TPA-OH 포함):Acetonitrile = 85:15, pH 3.5~4
6.4.1. 이동상의 제조
6.4.1.1. KH2PO4 0.68 g을 1L Vol. flask 에 넣고 적당량의 D.W.로 녹인 후, 1
M TPA-OH(Sigma) 10 mL 또는 40 % TPA-OH (Merck) 5.1 mL 넣고
지시선 까지 D.W.로 채운 다음 혼합한다.
6.4.1.2 6.4.1.1.에서 제조한 용액과 Acetonitrile를 85:15 비율로 혼합하고 필
터한 후(0.45 또는 0.2 μm), o-phosphoric acid(85 %, fisher) 1 mL를
넣어 pH를 3.5~4로 맞춘다.
6.5. Flow rate : 1.0 mL/min
6.6. Injection volume : 20 μL
6.7. Run-time : 20 min.
정밀검사발전연구회
125
II. 유가공품 시험법
7. 결과
7.1. 검사기준
조제유류 : 불검출
7.1. 검량선의 작성
표준용액 20 μL를 상기의 조건에 따라 고속액체크로마토그래프에 주입하
여 얻어진 피크의 높이와 면적으로부터 검량선을 작성한다.
7.2. 정량
시험용액 20 μL를 상기의 조건에 따라 고속액체크로마토그래프에 주입한
다. 얻어진 피크의 머무름 시간(retention time)을 비교해서 정성을 하고
얻어진 검량선과 비교하여 검체 중의 사카린 나트륨의 함량을 산출한다.
8. 참고문헌
8.1. 식품 중 식품첨가물 분석법(식약청, 2009)
126
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
붙임1. Standard 및 sample chromatogram
1-1. Standard chromatogram
1-2. Sample chromatogram
정밀검사발전연구회
127
II. 유가공품 시험법
붙임2. 검사흐름도
시료 5 g
↓
D.W. 10 - 20 mL 첨가 후,
강하게 교반
↓
Carrez clearing reagent I, II 시약
첨가 후 교반
↓
50 mL 까지 D.W.로 채운다음 교반
↓
원심분리(5,000 r/min, 10 min)
↓
상등액을 채취하여 필터(0.45 μm),
시험용액으로 사용
↓
HPLC 분석
↓
계산 및 결과판정
128
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
11 조제유류 중 이물 및 탄화물 시험법
1. 분석원리
조제분유를 2 % EDTA용액에 녹인 후 milk sediment disk를 통과시켜서disk
상에 남아 있는 이물이나 탄화물의 존재 여부를 관찰한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상 : 조제유류
2.2. 기준
2.2.1. 이물 : 적합하여야 한다.
2.2.2. 탄화물 : 7.5 mg/100 g이하
3. 장치
3.1. 자석 : 봉 형태
3.2. Milk sediment disk : 33 mm
3.3. Filteration apparatus
3.4. Buchner깔대기 또는 힐슈 깔대기
3.5. 체 : 500 μm
3.6. 실체현미경 : SZX-16, Olympus
3.7. 진공펌프
3.8. 확대경
3.9. Balance : 분석저울 0.1 mg까지, 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1. 2 % EDTA(Ethylene-diamine-tetraacetic acid) solution
EDTA 20 g을 증류수 980 mL에 넣고 40 ℃ water bath에 넣어 잘
용해
시킨 후 사용한다.
5. 시험방법
5.1. 체분별법
5.1.1. 시료가 미세한 분말일 때 비교적 큰 이물을 검사할 수 있다
정밀검사발전연구회
129
II. 유가공품 시험법
5.1.2. 시료를 체로 포집, 육안검사하고 필요시 실체 현미경으로 약 40배의
저배율로 형태를 관찰한다.
5.2. 자석을 이용한 방법
5.2.1. 깨끗한 종이를 검사대 위에 놓고 분유를 약 10스푼정도 떠 놓은 후 다
른 종이를 이용하여 얇게 펴가며 이물의 존재 여부를 확인한다.
5.2.2. 비이커에 분량(분유 설명 참조)의 분유를 넣고 따뜻한 물을 부어 잘 섞
는다. 우유병 상층에 부유하는 이물이 있거나 아래에 가라앉는 이물이
있는지 확인한다.
5.2.3. 자석으로 자력을 띠는 이물이 있는지 확인한다.(Figure 2)
Figure 1. 침전된 이물
Figure 2. 자석을 이용한 이물검사
130
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
5.3. 여과법
5.3.1. 검사시료 100 g을 1 L의 비이커에 넣고 2 % EDTA용액 100 mL를 가
하여 잘 섞어서 덩어리가 없도록 한 후 저으면서 2 % EDTA 용액 400
mL를 천천히 가한다.
5.3.2. 저어서 섞는 동안에 차차 황색의 반투명한 액체가 되며 약 30분간 방치
하면 완전히 녹는다.
5.3.3. Buchner 깔대기 또는 힐슈 깔때기에 이물 여과지를 깔고 시료용액을
흡인 여과하고, 비이커에 남아있는 잔류물을 증류수로 씻어내어 흡인
여과하여 여과지상의 이물을 검사한다.
5.3.4. 여과지상에 남아있는 이물을 육안이나 확대경을 사용하여 확인한다.
5.3.5. 실체현미경 ×40 배율로 형태를 확인할 수 있다
6. 참고문헌
6.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
6.2. Food analysis. 2nd edition. S.Suzanne Nielsen.
정밀검사발전연구회
131
II. 유가공품 시험법
붙임 1. 검사흐름도
개봉시 이물이 혼입되지 않도록
조심스럽게 개봉한다.
↓
시료를 녹이기 위한 비이커를 티슈로
잘 닦고, 먼지제거제를 사용하여
청결하게 하여 사용한다.
↓
저울을 사용하여 시료 100 g을 칭량
한다.
↓
2 % EDTA 용액을 100 mL를 가하며
수저로 잘 섞이도록 저어준 후,
400 mL를 추가로 가하여 녹인다.
↓
30분간 정치하여, 분유가 수용액에
완전히 분산되도록 한다.
↓
이를 milk sediment disk를 장착한
흡인여과 장치를 사용하여 여과한다.
↓
132
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
비이커에 남아 있는 잔류물을 증류수로
완전히 씻어낸다
↓
오븐에서 건조한 후, 확대경을 이용하여
이물의 수를 센다.
정밀검사발전연구회
133
II. 유가공품 시험법
붙임 2.
이물 검사 결과 사진
2.1. Milk sediment disk상의 검사결과
2.2. 초분(scorched particle), 실체현미경(90배)
2.3. 금속성 이물, 실체현미경(90배)
134
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
12 아플라톡신 M1
Aflatoxin은 Aspergillus flavus와 Aspergillus parasiticus가 생성하는
진균독
소로서 지금까지 알려진 천연 물질중에 가장 강력한 발암물질이다. Aflatoxin은 청
색형광을 나타내는 B1, B2와 녹색형광을 나타내는 G1, G2 그리고 자색형광을 나
타내는 M1, M2등을 포함해서 여러 종이 알려져 있다. 특히 aflatoxin B1은 B2,
G1, G2 보다 독성이 강하고 옥수수, 땅콩, 면실을 포함한 각종 농산물(주로 곡류,
두류)에서 자주 검출되며 보통의 식품가공이나 살균처리로 파괴되지 않는다. 이러
한 aflatoxin을 함유한 사료를 섭취한 가축의 젖(우유등)에서 검출되는 aflatoxin
M1 또한 발암성이 아플라톡신 B1에 버금가는 진균독소로서 규제 대상이 된다.
Aflatoxin의 규제 현황
유럽연합 : 견과류, 건과일, 곡류, 가공식품 등에 대하여 AFB1으로서 2~8 μg/kg, 총
aflatoxin으로서 4~10㎍/kg으로 규제, 우유에서 0.05 μg/kg 으로 규제
미국 : 브라질넛, 식품, 땅콩, 땅콩가공품, 피스타치오넛에 대하여 총 aflatoxin
으로서 20 μg/kg으로 규제, 우유에서 AFM1은 0.5 μg/kg으로 규제
CODEX : 비가공 땅콩에 대하여 AFB1으로서 15 μg/kg으로 규제
우리나라 : 곡류, 두류, 견과류 및 그 단순가공품(분쇄, 절단 등)에 대하여 AFB1
으로서 10 μg/kg으로 규제, AFM1은 제조․가공직전의 원유 및 우유
류에 대하여 0.5 μg/kg으로 규제
1. 분석원리
축산물중의 아플라톡신 M1을 고체상(Sep-Pak C18)에서 정제한 후 TFA
(Trifluoracetic acid)을 이용하여 형광을 띄도록 유도체화 시킨 다음 액체
크로
마토그래프의 형광검출기를 이용하여 검출한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상 : 우유류
2.2 기준 : 0.5 ng/mL
정밀검사발전연구회
135
II. 유가공품 시험법
3. 장치
3.1. Sep-pack C18 cartridge
3.2. 시험관 : glass재질, 실란화된 것
3.3. Filter : 0.2 μm nylon(이동상 여과용)
3.4. Syringe filter : 0.45 μm PTFE
3.5. Vaccum manifolder
3.6. 진공펌프
3.7. Sonicator
3.8. 질소농축장치
3.9. 원심분리기
3.10. HPLC : Agilent 1100(FLD)
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. Acetonitrile(HPLC급)
4.1.2. Methanol(HPLC급)
4.1.3. Isopropyl alcohol(HPLC급)
4.1.4. Hexane(HPLC급)
4.1.5. Benzene
4.1.6. Chloroform
4.1.7. Trifluoroacetic acid(TFA) : Sigma T-6508
4.1.8. 3차 증류수
4.2. 시액
4.2.1. Acetonitrile/benzen solution (10/90, v/v)
4.2.2. 10 % acetonitrile solution
4.2.3. 25 % acetonitrile solution
4.2.4. Mobile phase
증류수 : Isopropyl alcohol : Acetonitrile(80:12:8, v/v)
4.3. 표준물질
Aflatoxin M1
4.4 표준용액 제조
4.4.1. Stock standard solution (100 μg/mL)
136
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
250 μg의 표준품을 chloroform에 녹여 100 μg/mL으로 제조하여 밀봉
한 후 -20 ℃에 보관하고 표준원액으로 사용한다.
4.4.2. Working standard solution 1(0.5 μg/mL)
4.4.1.의 표준원액을 acetonitrile/benzene(10/90,v/v)용액으로 녹여
0.5 μg/mL이 되도록 제조하여 냉동보관하면서 표준용액으로 사용한다.
4.4.3. Working standard solution 2 (5, 10, 20 ng/mL)
6.2.1.의 표준용액을 acetonitrile / benzene(10/90, v/v)용액 으로 희석하여
각각 5, 10, 20 ng/mL으로 제조한다.
주의) 표준원액 및 표준용액은 밀봉하여 증발되지 않도록 하고 주의깊게 다룬다.
또한 유도체반응에 사용하는 유리튜브는 실란화되어진 제품을 사용한다.
4.5. 아플라톡신 M1 표준용액 유도체화 방법
4.5.1. Test tube에 5 ng/mL, 10 ng/mL 및 20 ng/mL 표준용액을
100 μL씩 넣는다.
4.5.2. 질소를 이용하여 건조시킨다.
4.5.3. Hexane 200 μL를 tube에 넣어 잔여물을 녹여 준 후Trifluoroacetic acid
200 μL를 넣고 밀봉한다.(파라필름 이용가능)
4.5.4. 40 ℃ 10분간 반응시킨 후 다시 질소를 이용하여 건조시킨다.
4.5.5. Tube에 25 % acetonitrile 0.5 mL을 넣고 초음파하여 녹인 다음 0.45
μm syringe filter로 여과하여 HPLC에 주입한다.
5. 시험방법
5.1. 시료전처리
5.1.1. 우유 혹은 증류수에 녹인 분유를 원심분리기(2,500 g, 20분, 4 ℃)에서 분
리 하여 상층의 크림층을 제거한 다음 20 mL의 수용액 층을 취한다.
5.1.2. Sep-Pak C18 cartridge를 vaccum manifolder에 연결하여 acetonitrile과 증류
수 각각 5 mL를 중력을 이용하여 흘려보낸다.
5.1.3. 활성화된 cartridge가 마르지 않도록 유지하면서 5.1.1.의 시료용액을 주
분당 4~6㎖의 속도로 카트리지를 통과시킨다.
5.1.4. 증류수 5 mL, 10 % acetonitrile sol.의 순서로 cartridge를 세척한다.
5.1.5. Acetonitrile 2 mL을 세척한 cartridge에 흘려서 아플라톡신 M1을 중력
을 이용하여 용출시켜 유리튜브에 받는다.
5.1.6. 질소농축기를 이용하여 acetonitrile을 완전히 날려 보낸다.
주의) 농축시 온도는 40 ℃가 적당하다.
정밀검사발전연구회
137
II. 유가공품 시험법
5.1.7. Hexane 200 μL를 농축 건조된 tube에 넣어 잔여물을 녹여준 후
trifluoroacetic acid 200 μL 넣고 밀봉한다.
5.1.8. 40 ℃에서 10분간 반응시킨 후 다시 질소를 이용하여 hexane을 날려 보낸다.
5.1.9. Tube에 25 % acetonitrile 0.5 mL를 넣고, 초음파하여 녹인 다음
0.45
μm필터로 여과하여 시험용액을 얻는다.
5.2. 공시험
5.2.1. 우유를 50 mL centrifuge tube에 넣고 원심분리(2,500 r/min, 4 ℃, 20
min)하여 상층의 크림층을 제거한다.
5.2.2. 위에서 얻은 우유를 acetonitrile 5 mL, 증류수 5 mL로 활성화시킨
cartridge에 흘려 용출액을 받는다.
5.2.3. 용출액 20 mL에 benzene: acetonitrile(9:1, v/v)용액 100 μL를 첨가하여
5.1의 시료전처리 방법에 따라 처리하여 공시험용액을 얻는다.
5.3. 회수율 시험
5.3.1. 5, 10, 20 ng/mL의 Aflatoxin M1 표준용액을 각각 20 mL의 blank 시료에
100 μL씩 첨가하여, 5.1의 방법에 따라 전처리하여 HPLC에 주입한다.
(이 농도는 확립된 방법에 적용할 경우 0.025, 0.05, 0.1 ng/mL에 해당)
6. 기기분석조건
6.1. Detector(FLD) : Exitation 360 nm, Emission 420 nm
6.2. Column : Supercosil C18 (250 mm × 4.6, 5 μm)
6.3. Flow rate : 1 mL/min
6.4. Injection volume : 50 μL
7. 결과
7.1. 검량선 작성
5.2의 공시험 용액 및 5.3의 시험 용액을 HPLC에 주입하여 얻은 aflatoxin M1
의 농도와 피크의 면적비를 이용하여 검량선을 작성하고 회귀방정식을
구
한다. 이어 시험용액을 주입하여 얻은 면적값을 위의 회귀방정식에 대입 하
여 aflatoxin M1의 농도를 구한다.
138
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
7.2. 회수율 계산
7.2.1. 5.3의 회수율 시험에 따라 얻어진 피크의 높이 또는 면적값을 7.1에서
얻은 회귀 방정식에 대입하여 aflatoxin M1의 함량을 구한다.
7.2.2. 동일한 농도로 첨가하여 추출한 첨가시료와 표준용액의 피크면적을
비교하여 회수율을 구한다.
회수율 = 첨가시료의 동일시간대 피크면적/표준용액의 피크면적 × 100
7.3. 시료중의 aflatoxin M1 농도 계산
X (ng/mL) = (Y-b) / a × 희석배수 × 1/최종시료량 ×100/회수율
X : 아플라톡신 농도(ng/mL)
Y : 시료의 피크면적 또는 피크 높이
a : 표준용액 검량선의 기울기
b : 표준용액 검량선의 Y 절편값
8. 참고문헌
8.1. 식품공전 식품 중 곰팡이독소 시험법.
8.2. 유제품에서 아플라톡신 M1 안정성. 한국식품과학회(1998).
8.3. 식품중 총 아플라톡신 분석법 개선. J. Fd Hyg.Safety 21(2), 76-81(2006).
정밀검사발전연구회
139
II. 유가공품 시험법
붙임 1. 검사흐름도
Blank 시료 제조 및 표준용액 제조
↓
Blank시료에 표준용액 첨가
(회수율측정시료)
↓
Blank시료, 회수율측정시료 및
시료 전처리
↓
표준용액 유도체화
↓
HPLC 분석
↓
계산 및 결과판정
140
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
13 치즈 중 나타마이신
1. 분석원리
치즈 외층 및 치즈 내부에 존재하는 나타마이신(natamycin) 함량 측정을 위한
고속액체크로마토그래프 분석법으로 검출한계는 0.5 mg/kg이다. 일정량의 시료
를 메탄올로 추출하고 지방을 침전시키기 위해 -20 ℃로 냉각시키고 원심분리
한 후 고속액체크로마토그래프로 분석한다. 표준용액의 검량선을 이용하여 분
석농도를 산출하며, 최종정량결과는 시료량과 희석배수를 고려하여 계산한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
자연치즈, 가공치즈
2.2. 기준
1 mg/dm2 이하이며, 표면으로부터 깊이 5 mm 이상에서는 검출되어서는
2
3
아니된다. 참고) 1 mg/dm ≈ 15 mg/kg (단, 밀도가 1.3 g/cm , 두께는 5 mm인
경우에 해당함),
1 mg/dm2 × 1/0.05 dm × 1 dm3 / 1.3 kg = 15.38 mg/kg
3. 장치
3.1 Syringe filter, nylon 0.2 μm
3.2 용량플라스크 10 mL, 100 mL
3.3 Centrifuge tube 50 mL
3.4 Balance, 소수점 4자리 칭량 가능할 것
3.5 Centrifuge
3.6 Vortex
3.7 Shaker
3.8 균질기
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141
II. 유가공품 시험법
4. 시약 및 시액
4.1 시약
4.1.1 Natamycin(Pimaricin), Sigma P-9703
4.1.2 Methanol, B&J AH-230-4
4.1.3 Distilled water
4.2 시액
4.2.1 Mobile phase
메탄올 : 물 : 아세트산 (60 : 40 : 5, V/V/V)
4.3 표준용액 제조
4.3.1 Stock standard solution (1 000 μg/mL)
Natamycin 표준품 10 mg을 정확하게 채취하고 methanol로 잘 용해
하여 10 mL로 채운다.
4.3.2 working standard solution 1 (100 μg/mL)
stock sol. 1 mL를 10 mL vol. flask에 넣고 methanol로 정용한다.
4.3.3 working standard solution 2 (10 μg/mL)
working sol. 1 mL를 10 mL vol. flask에 넣고 methanol로 정용한다.
4.3.4 working standard solution 3 (1 μg/mL)
working sol. 1 mL를 10 mL vol. flask에 넣고 methanol로 정용한다.
4.3.5 4.3.3, 4.3.4 표준용액을 이용하여 0.1, 0.5, 1.0, 2.0, 4.0 μg/mL 농도로
methanol로 희석하여 표준용액으로 한다.
농 도
0.1 μg/mL
0.5 μg/mL
1.0 μg/mL
2.0 μg/mL
4.0 μg/mL
표준용액 부피
(라) 표준용액 100
(라) 표준용액 500
(다) 표준용액 100
(다) 표준용액 200
(다) 표준용액 400
μL
μL
μL
μL
μL
Methanol 부피
900 μL
500 μL
900 μL
800 μL
600 μL
5. 시험방법
5.1 절편기나 칼을 이용하여 치즈 외피를 5 mm 두께로 잘라내어 5 g으로 정
밀하게 무게를 잰다.
142
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
5.2 치즈 내부는 외피 5 mm로 제거한 나머지 부위를 채취하여 5 g으로 정밀
하게 무게를 잰다.
5.3 채취한 시료를 50 mL 원심관에 넣고 추출용액인 메탄올을 30 mL 첨가한다.
5.4 균질기로 완전히 마쇄한 후, 증류수 10 mL를 첨가한다.
5.5 Shaker에서 10분간 격렬하게 진탕한다.
5.6 -20 ℃ 냉동고에서 30분간 정치시킨다.
5.7 원심분리기에서 3,000 r/min, 10 min간 원심분리 한다.
5.8 상층액을 0.2 μm Nylon filter로 여과한 후, 이 여과액을 시험용액으로 한다.
6. 기기분석조건
6.1 Liquid chromatography system
6.1.1 유 속 : 1.0 mL/min
6.1.2 검출기(UV) : 303 nm
6.1.3 컬럼 : C8 (5 μm, 4.6 × 150 mm)
6.1.4 Column Temp : 40 ℃
6.1.5 Injection vol : 20 μL
6.2 Column maintenance
6.2.1 분석완료후 전시스템을 50 % Methanol로 세척한다.
6.2.2 장시간 보관시 분석컬럼은 100 % acetonitrile이나 methanol에 보관한다.
7. 결과
7.1 검량선 작성
표준용액을 액체크로마토그래프에 주입한 후 얻어진 크로마토그램상의 피
크 높이 또는 면적을 이용하여 검량선을 작성한다.
7.2 정성방법
표준용액과 시험용액을 동일조건에서 분석하여 머무름 시간을 비교하여 동
일물질인지 정성 확인한다.
정밀검사발전연구회
143
II. 유가공품 시험법
7.3 정량방법
시험용액 및 표준용액을 각각 20 μL 주입하여 얻은 표준용액의 피크면적
또는 높이에 의해 구한 검량선을 사용하여 시험용액의 나타마이신의 농도 (μ
g/mL)를 구하고, 다음 식에 의해 검사시료 중 나타마이신 함량을 산출한다.
나타마이신 함량(mg/kg) =
S
×
a × b
---------------------검사시료채취량 (g)
S = 시험용액중의 나타마이신의 농도 (μg/mL)
a = 시험용액의 전량 (mL)
b = 시험용액의 희석배수
8. 참고문헌
8.1 KS H ISO 9233:2006, 치즈 및 치즈 외층-나타마이신 함량 측정법
8.2 ISO 9233 Cheese and cheese rind-Determination of natamycin content
144
정밀검사발전연구회
II. 유가공품 시험법
붙임 1. 검사흐름도
시료 채취(5 g)
↓
Methanol 30 mL
균질한 후 증류수 10 mL
↓
shaking(10 min)
refrigerator(-20 ℃, 30 min)
↓
Centrifuge(3 000 r/min * 10 min)
↓
Filter(0.2 μm nylon filter)
↓
HPLC 분석
↓
계산 및 결과판정
정밀검사발전연구회
145
II. 유가공품 시험법
붙임 2. 분석 크로마토그램
그림1. 나타마이신 표준용액 1 μg/mL 크로마토그램<기타>
그림2. 치즈 공시료 분석 크로마토그램
그림3. 치즈 중 나타마이신 1.0 μg/mL 첨가시료 크로마토그램
146
정밀검사발전연구회
III. 육가공품 시험법
III. 육가공품 시험법
1 아질산 이온
아질산염(nitrite)이란 아질산(nitrous acid, HNO2)의 나트륨 또는 칼륨염 으로서
NaNO2 또는 KNO2로 표시된다. 육제품에 첨가되는 (아)질산염은 육색고정, 항미
생물, 항산화 그리고 풍미 증진의 다양한 기능을 나타내나 가장 중요한 이유는
Clostridium botulinum과 같은 맹독성 식중독균의 생장 억제이다. 1970년대 초
아질산염으로 염지된 육제품이 아민과 반응할 경우 발암물질인 니트로사민을
생성할 수 있다는 보고 이후 건강상의 우려가 대두 되었다. 미국 및 유럽에서
1970년대 이후 아질산염을 대체하기 위한 물질을 개발하고자
하였으나 이를
완전히 대체할 수 있는 물질의 개발은 이루어지지 못하고 있다. 이 때문에 아
직까지 외국에서도 대부분의 육제품에 아질산염을 사용하고 있고, 국내에서는
1987년, 2004년에 아질산염의 유해성에 대하여 논란이 일어난 바 있다.
국내외 아질산염 사용 기준
미국 : 아질산염 기준 첨가허용량은 일반 소시지류의 경우 156 mg/kg, 베이컨에
서는 각각 120 mg/kg(염지액 주사), 200 mg/kg(침염)과 625 mg/kg(건염)이며
유아식품에서는 사용 금지. 아질산염과 질산염이 병용될 때 제품내 잔존
질산염은 아질산염으로 환산하여 잔존량이 규제되며 이 경우 아질산염의
양은 아질산나트륨을 기준하여 최종제품에서 200 mg/kg 이하로 규제
유럽연합 : 아질산염의 경우 첨가허용량은 150 mg/kg, 잔류허용량은 익히지 않
은 건조소시지의 경우 50 mg/kg, 기타 염지육제품에서는 100 mg/kg
으로 규제하고 있으며, 질산염을 사용할 경우 첨가허용량은 300
mg/kg, 잔류허용량은 250 mg/kg으로 규제
Codex : 아질산염의 최대사용량은 익힌 염지햄과 익힌 염지돼지 어깨살의 경우
125 mg/kg이고 콘비프 통조림은 50 mg/kg, 런천미트와 익힌 염지 세절육
제품은 125 mg/kg으로 각각 허가
우리나라 및 일본 : 육제품에 대한 아질산이온 기준으로서 잔류량 (0.07 g/kg)
이하로 동일하게 적용
정밀검사발전연구회
149
III. 육가공품 시험법
1. 분석원리
방향족 amine류는 NO2에 의해 diazo화 되며, 이 diazonium염은 또한 적당한
결합제(방향족 amine류)에 의해 azo색소를 생성한다. 이것은 NO2의 특이한 반
응으로서, 대부분의 NO2정량법은 거의 이 반응을 이용하여 비색정량을 행한다.
이 방법에서는 산성조건 하에서 sulfanilamide와 NO2가 반응하여 diazonium염을
만들고 또한 naphthylethylenediamine과 결합시켜 생긴 azo 색소를 비색 정량한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
식육 가공품 : 햄류, 소시지류, 베이컨류, 건조저장육류, 양념육류, 분쇄가공
육제품, 갈비가공품, 포장육은 제외
2.2. 기준 : 0.07 g/kg
3. 장치
3.1. Filter paper : Advantec 5A
3.2. Cuvet : 용량 2.5 mL(Brand 7590 05)
3.3. Water Bath : 80 ℃설정이 가능한 것
3.4. UV/VIS Spectrophotometer : Varian cary 100
3.5. Balance : 분석저울 0.1 mg까지, 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1 0.5 N NaOH(분석급, Merck 1.09138)
4.1.2. Sulfanilamide(분석급, Sigma S-9251)
4.1.3. Naphthylethylenediamine(분석급, Merck 1.06237)
4.1.4. Ammonium acetate(분석급)
4.1.5. Zinc sulfate(분석급)
4.1.6. 3차 증류수
4.2 시액
4.2.1. Zinc sulfate solution(12 %)
Zinc sulfate 12 g을 증류수 100 mL에 녹인다.
4.2.2. Ammonium acetate buffer(pH 9.1)
Ammonium acetate 100 g을 증류수 약 900 mL에 녹이고 10 % 암모니아수
로 pH 9.1로 맞춘 다음 증류수를 넣어 1,000 mL로 한다.
150
정밀검사발전연구회
III. 육가공품 시험법
4.2.3. Sulfanilamide solution
Sulfanilamide 0.5 g을 넣고 증류수:HCl=1:1 100 mL에 가온하여 녹인다.
4.2.4. Naphthylethylenediamine solution
Naphthylethylenediamine 0.12 g을 증류수 100 mL에 녹인다.
4.3. 표준물질
Sodium nitrite(100 μg/mL) : AccuStandard. 또는 이와 동등품　4.4. 표준용액 제조(사용시 제조)
4.4.1. Stock standard solution(0.20 mg/L)
표준물질 100 μL를 50 mL vol. flask에 넣고 증류수로 채운다.
4.4.2. Working standard solution(0.02, 0.05, 0.10, 0.15 ,0.20 mg/L)
위의 Stock sol.을 각각 2, 5, 10, 15 및 20 mL를 25 mL의 vol. flask에
취하고 증류수를 넣어 약 20 mL로 한다.
주의) Working sol.은 흡광도를 측정하기 전 발색시약 및 증류수를 첨가하여
야 하므로 20 mL정도까지만 채우도록 한다.
5. 시험방법
5.1 시료전처리
5.1.1. 실험시작 전 water bath와 ice maker의 전원을 미리 켜놓고 80 ℃
증류수(3차)도 미리 준비한다.
5.1.2. 시료 약 10 g을 잘게 썰어서 200 mL vol. flask에 넣는다.
5.1.3. 80 ℃ 증류수 100 mL과 0.5 N NaOH 10 mL, 12 % zinc Sulfate 10 mL
를 첨가한다.
5.1.4. 80 ℃ water bath에서 가끔씩 흔들면서 20분간 가온한다.
5.1.5. 꺼내어 찬물에서 실온이 될 때까지 식힌다.
참고) 얼음을 이용할 경우 30분정도 소요된다.
5.1.6. Ammonium acetate buffer 20 mL를 첨가하고 증류수로 200 mL 까지 채
운다.
5.1.7. 잘 섞은 후 10분간 방치한다.
5.1.8. 5A filter paper로 여과한다.
5.1.9. 여과한 액 중 최초의 20 mL는 버리고 맑은 여액만 받고 이를 시험 용
액으로 한다.
5.1.10. 시험용액 20 mL를 25 mL vol.flask 에 넣는다.
정밀검사발전연구회
151
III. 육가공품 시험법
5.2. 공시험
공시험 용액은 검사시료 대신에 물 10 mL을 사용하여 5.1.3.이하와 동일
하게 조작한다.
Table 1. 표준용액 및 시험용액의 희석
표준용액 농도(mg/L)
구분
시험용액
표준액 및 시험용액
0.0
대조액
0.0
Sulfanilamid
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1
Naphtylethlenediamine
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1
증류수
23.0
21.0
18.0
13.0
8.0
3.0
3
최종 volume (mL)
25
25
25
25
25
25
25
0.02
0.05
0.1
0.15
0.2
시료
2.0
5.0
10.0
15.0
20.0
20
6. 기기분석조건
6.1 분석파장 : 540 nm
6.2. 흡광도 측정
6.2.1. 기기는 흡광도 측정 전 최소 20분 전에 켜둔다.
6.2.2. 표준용액에 대한 대조액, 표준용액, 공시험용액, 시험용액이 들어있는
각각의 vol. flask에 sulfanilamide 용액 1 mL와 naphthyl ethylenediamine
용액 1 mL를 첨가하고, 증류수로 채운다.
주의) 대조액 : 증류수 20 mL를 표준용액과 동일하게 처리한 용액
주의) 공시험용액 : 증류수 10 mL를 시료와 동일하게 전처리한 용액
6.2.3. 20분간 발색시킨다.
6.2.4. 표준용액에 대한 대조액을 이용하여 기기를 zero setting 한 후 표준용
액의 흡광도를 측정한다.
6.2.5. 이어서 공시험용액(B) 및 시험용액(A)의 흡광도를 측정한다.
주의) 시험용액의 흡광도가 검량선의 범위를 벗어날 경우 처음 농도를 감안
하여 5.1.9.의 시험용액을 희석하여 발색시킨 후 흡광도를 측정한다.
6.2.6. 시험용액이 착색되어 있는 경우
․ 시험용액 20 mL에 HCl(1+1) 1mL와 물을 넣어 25mL로 한다.
․ 물을 대조액으로 하여 흡광도(C)를 측정한다.
주의) 발색 후 시간이 지남에 따라 흡광도가 변하므로 시험용액 및 표준 용액의
발색시간(20분)을 준수한다.
152
정밀검사발전연구회
III. 육가공품 시험법
7. 결과
7.1. 검량선 작성
7.1.1. 표준용액 및 대조액의 흡광도를 측정하여 검량선을 작성한다.
7.2. 계산
아질산이온 ( g/kg) =
A-B
희석배수× 1
채취량 ( g) ×
1000
A = 시료중의 아질산이온 농도(mg/L)
B = 공시료중의 아질산이온 농도(mg/L)
8. 참고문헌
8.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
8.2. 육가공품에 사용되는 아질산염의 사용기준, 대사, 섭취량과 안전성에
대
한 조사 연구. KOREAN J. FOOD SCI. ANI. RESOUR. Vol. 25. No. 1, pp.
103~120(2005).
8.3. 표준 식품분석학(2010), 지구문화사.
정밀검사발전연구회
153
III. 육가공품 시험법
붙임 1. 검사흐름도
water bath(80 ℃) 및
80 ℃ 증류수 준비
↓
시료 및 공시료 전처리
↓
표준용액 희석
↓
표준용액, 공시험용액, 시험용액
순으로 Sulfanilamid용액 및
Naphtylethlenediamine용액을 첨가하고
최종희석
↓
20분간 발색(시간엄수)
◦ Spectrophotometer의 전원을
미리 켜 놓는다.
↓
표준용액, 공시험용액, 시험용액
순으로 흡광도 측정
↓
계산 및 결과판정
154
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III. 육가공품 시험법
2
굴절률
1. 분석원리
액체에 광선이 입사되면 광선은 굴절되는데, 이 때 입사와 굴절 사이의
각도의 비는 물질에 따라 일정한
것으로서, 유지는 겉보기에는 모두 비슷하나
제품에 따라 굴절률이 다르다. 따라서 굴절율을 측정함으로써 그 물질의 순도나
농도 등을 알 수 있다. 단, 굴절율은 동일물질이라도 측정할 때의 광원의 파장,
온도 및 시료의 농도에 따라 다르다.
2. 검사대상 및 기준
2.1.
검사대상
식용우지, 식용돈지 (원료우지 및 원료돈지는 제외)
2.2.
기준
식용우지 1.448~1.460(40 ℃)
식용돈지 1.448~1.461(40 ℃)
3. 장치
3.1. 탈지면
3.2. Water bath
3.3. 압베 굴절계
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155
III. 육가공품 시험법
4. 시약 및 시액
4.1. 온수
4.2. Ether(분석급)
5. 검사방법
5.1. 압베 굴절계의 A, B 2개의 금속상자 중에서 각각 프리즘이 있어 D에서
E로 온탕을 흘려서 양 프리즘을 일정한 온도로 가열한다.
5.2. 프리즘을 열고 에테르로 적신 면으로 프리즘의 면을 깨끗이 닦는다.
(사용한 다음에도 같은 방식으로 닦아준다.)
5.3. 굴절계의 A, B를 닫고 OK에서 관찰한다.
5.4. 전체 반사의 경계선 (명암의 경계)이 눈의 교차점에 오도록 J를 움직여
프리즘을 회전하고 그 때의 S상의 눈금을 루우베 L에서 보고 직접 굴절률을
읽는다.
5.5. 이 같은 방법으로 여러 번 되풀이하여 그 수를 읽고, 평균값을 구하고 그
값을 굴절율로 한다.
주의) 프리즘의 면을 닦을 때는 알칼리 물질을 이용해서는 안 된다.
6. 결과
여러 번 되풀이하여 굴절률을 읽고 평균값을 구한다.
7. 참고문헌
7.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
7.2. 표준식품분석학(2010), 지구문화사.
156
정밀검사발전연구회
III. 육가공품 시험법
3
비누화가
Ester 화합물은 일반적으로 염기가 존재할 때 가수분해 되어 카르복실산과
알코올을 생성하는데, 이 반응을 비누화반응(saponification) 혹은 검화반응이라
하며, 비누화가는 유지 1g을 비누화시키는데 필요한 KOH의 mg수를 말한다.
비누화가 검사를 통하여 유지중에 비누화될 수 있는 양과 유지의 구성지방산의
분자량의 대소를 알 수 있다. 즉 비누화가는 유지의 구성지방산의 분자량에
반비례하므로 저급지방산 함량이 많은 유지는 비누화가가 크며 고급지방산
함량이 많은 유지는 비누화가가 작다.
1. 분석원리
일정한 무게의 유지시료를 일정량의 KOH로 가수분해 시킨 다음 과잉으로
남은 KOH를 HCl로 적정하여 시료를 가수분해 하는데 사용된 KOH의 양을 알
아내고 여기서 다시 지질 1 g 중의 에스테르의 비누화에 필요한 KOH의 mg수
(비누화가)를 계산하는 방법이다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
식용우지, 식용돈지
2.2. 기준
식용우지 : 190~202 (원료우지 제외)
식용돈지 : 192~203 (원료돈지 제외)
3. 장치
3.1. 뷰렛
3.2. 환류냉각기(또는 Soxhlet 장치)
3.3. Water bath(또는 Hot plate)
3.4. Balance : 분석저울 0.1 mg 까지, 일반저울 10 mg 까지 측정할 수 있는 것
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157
III. 육가공품 시험법
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. 0.5 N KOH ethanolic solution(분석급, Merck OB477677)
4.1.2. Methyl-red 용액(분석급)
4.1.3. 0.5 N HCl(분석급)
4.1.4. NaHCO3(분석급)
4.1.5. 3차 증류수
5. 시험방법
5.1. Factor 결정법
5.1.1. NaHCO3 0.8 g을 삼각플라스크에 넣고 증류수 50 mL로 녹인다.
5.1.2. 지시약 metyl red 2~3방울을 넣고 0.5 N HCl용액으로 용액의 색깔이 노
란색에서 붉은색으로 바뀌는 시점까지 적정하여 그 소비량을 기록한다.
5.1.3. 계산법
F =
 × 
 당량  ×  × 
S : NaHCO3 량
T : 0.5 N HCl 소비량
N : 노르말농도
5.2. 검사법
5.2.1. 시료 1~2 g을 200 mL 삼각플라스크에 취한다.
주의) 검사시료를 사용하지 않은 blank를 만들어 함께 실험한다.
5.2.2. 0.5 N KOH ethanolic solution 25 mL를 정확히 넣는다.
5.2.3. 환류냉각기를 달고 hot plate에서 30분간 가끔씩 흔들면서 가열한다.
5.2.4. Phenolphthalein을 첨가하고 즉시 0.5N HCl로 적정하여 분홍색이
없어
지는 시점까지의 소비량을 기록한다.
5.2.5. 계산한다.
6. 결과
6.1. 계산
비누화가(mg/g) =
158
 ×     × 
시료무게
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III. 육가공품 시험법
a : 시료 검사시 소비된 0.5 N HCl 량(mL)
b : Blank 검사시 소비된 0.5 N HCl 량(mL)
f : 0.5 N HCl 의 역가
7. 참고문헌
7.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
7.2. 표준식품분석학(2010), 지구문화사.
정밀검사발전연구회
159
III. 육가공품 시험법
붙임1. 검사흐름도
삼각플라스크(200 mL)에
시료 채취(1~2 g)
↓
0.5 N KOH ethanolic solution
25 mL
↓
환류냉각기 장착
30분간 가열
↓
지시약(페놀프탈레인)첨가
↓
0.5 N HCl 적정
160
◦ 분홍색→무색
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III. 육가공품 시험법
4
요오드가
요오드가는 유지 100 g에 흡수되는 요오드의 g수이다. 요오드는 유지 중의
불포화결합의 부분에 부가된다. 따라서 요오드가는 유지를 구성하는 지방산의
불포화도에 비례되는 수치이므로 요오드가가 높은 유지일수록 유지 중에 불포화
지방산을 많이 함유하는 것이 된다.
1. 분석원리
ICl를 유지에 가하여 흡수시키고 잔존하는 ICl에 즉시 KI용액을 가하여
여
기서 유리되는 I2를 Na2S2O3로 적정한 후 지질 100 g에 흡수되는 I2의 양을 g
수로 계산하는 방법이다,.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
식용우지, 식용돈지
2.2. 기준
식용우지 : 32~50 (원료우지 제외)
식용돈지 : 45~70 (원료돈지 제외)
3. 장치
3.1. 뷰렛
3.2. 갈색병
3.3. Balance: 분석저울 0.1 mg 까지, 일반저울 10 mg 까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. CCl4(분석급)
4.1.2. KI(분석급)
4.1.3. Acetic acid(분석급)
4.1.4. 전분(분석급)
4.1.5. Na2S2O3(분석급)
정밀검사발전연구회
161
III. 육가공품 시험법
4.1.6. K2Cr2O7(분석급)
4.1.7. 35 % HCl(분석급)
4.1.8. Wij's Reagent(분석급)
4.1.9. 3차 증류수
4.2. 시액
4.2.1. Wij's Reagent(ICl-Acetic acid 용액) 제조시
․ ICl3 7.9 g 과 I2 8.7 g을 따로 플라스크에 달아 각각 적당량의 Acetic
acid를 더하여 가온 용해시킨 다음 식힌다.
․ 두 용액을 흔들어 잘 혼합하여 1 L vol.flask에 넣고 Acetic acid로 채운
후 갈색병에 보관하여 사용한다.
4.2.2. 10 % KI : KI 10 g을 증류수 90 mL 에 녹인다.
4.2.3. 1 % 전분 시액(지시약) : 가용성전분 1 g을 증류수 100 mL에 가온 용해
한다.
4.2.4. 0.1 N Na2S2O3 : Na2S2O3 24.8 g을 증류수에 녹여 1 L로 하고, factor를 구한다.
4.2.5. 0.1 N K2Cr2O7 : K2Cr2O7 4.9035 g을 증류수에 녹여 1 L로 한다.
5. 시험방법
5.1. Factor 결정법
5.1.1. 10 % KI 10 mL, 35 % HCl(진한염산) 5 mL를 잘 혼합한다.
5.1.2. 여기에 0.1 N K2Cr2O7 용액 25 mL 와 증류수 100 mL를 넣고 혼합한다.
5.1.3. 0.1 N Na2S2O3 용액으로 적정한다.
5.1.4. 용액의 황색이 점점 소실될 때 1 % 전분용액을 가하여 적정을 계속하고 전분의
청색이 없어지고 녹색이 나타나는 시점까지 적정하여 소비량을 기록한다.
5.1.5. 0.1N K2Cr2O7을 넣지 않은 Blank를 똑같은 방법으로 실험한다.
5.1.6. 계산법
F =
 × 

f : 0.1 N K2Cr2O7의 factor=1
a : 본시험의 0.1 N Na2S2O3소비량
b : Blank 의 0.1 N Na2S2O3소비량
5.2. 검사법
5.2.1. 시료 0.2 g을 정확히 250 mL 삼각플라스크에 취한다.
주의) 검사시료 대신 증류수 0.2 mL로 Blank를 만들어 함께 실험한다.
162
정밀검사발전연구회
III. 육가공품 시험법
5.2.2. CCl4 15~20 mL를 넣어 시료를 완전히 용해하고, Wij's reagent 25 mL를
가하여 뚜껑을 닫고 잘 섞는다.
5.2.3. 뚜껑을 덮고 암실에 30분간 둔다
주의) 요오드가가 130 이하의 것은 1시간, 130 이상의 것은 2~3시간 두며, 20분
간격으로 잘 흔들어 준다.
5.2.4. 10 % KI 20 mL, 증류수 100 mL을 가하여 혼합한 다음 0.1 N Na2S2O3
용액으로 적정하고 담황색이 된 때에 1 % 전분시액(지시약) 1 mL를
가하여 magnetic bar로 잘 섞는다.
5.2.5. 0.1 N Na2S2O3용액으로 다시 적정한다
주의) 청남색에서 무색으로 변하는 시점을 관찰하며, blank는 무색이어야 한다.
5.2.6. 계산한다.
6. 결과
6.1. 계산
요오드가(g/100 g) =
 ×     ×  × 
시료무게
a : 시료 검사시 소비된 0.1 N Na2S2O3 량(mL)
b : Blank 검사시 소비된 0.1 N Na2S2O3 량(mL)
f : 0.1 N Na2S2O3의 factor
0.01269 : 0.1 N-Na2S2O3 용액 1 mL에 상당하는 I2의 양 (g)
7. 참고문헌
7.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
7.2. 표준식품분석학(2010), 지구문화사.
정밀검사발전연구회
163
III. 육가공품 시험법
붙임 1. 검사흐름도
삼각플라스크 : 300 mL
◦ 시료채취
↓
시료용해
◦ 사염화탄소 10 mL
↓
Wijs 시약 25 mL
↓
20 ~ 30 ℃ 암소에 보관
◦ 요오드가 130이하 : 1시간
◦ 요오드가 130이상 : 2-3시간
↓
10 % KI 20 mL ＋ 증류수 100 mL
◦ 분홍색→무색
↓
0.1 N-Na2S2O3 적정
◦ 담황색
↓
1 % 전분용액 첨가
↓
0.1 N-Na2S2O3 적정
◦ 청색소실
↓
계산 및 결과판정
164
정밀검사발전연구회
III. 육가공품 시험법
5
부패육 시험법
식육은 각종 영양소와 수분이 많아 미생물의 성장에 적합한 조건을 갖추고
있는 식품으로 부패가 용이하다 . 고기 중에는 최초의 오염원, 저장중의 환경
조건에 따라서 미생물이 번식하여 부패를 일으키게 되는데 단백질은 펩타이드,
아미노산으로 분해되고, 더 나아가 암모니아, 아민, 유화수소 등으로 분해됨으로서
매우 불쾌한 냄새를 발생한다.
휘발성염기질소
단백질 식품은 부패에 의하여 암모니아나 아민류를 생성하는데 암모니아와
휘발성 아민류를 총칭하여 휘발성 염기질소(VBN : volatile basic nitrogen)라 하
며 이것은 어육과 식육의 신선도를 나타내는 지표로 이용된다. 신선한
어육에
는 10~15 ㎎ % 함유되어 있으며, 초기 부패육에는 30~40 ㎎ %, 부패육에는
50
㎎ %이상 함유되어 있다.
Trimethylamine
Trimethylamine(TMA)은 어육 또는 식육의 부패에 의해 생성되는 특유의
악취
(어취)를 갖는 무색의 기체로 육류의 신선도 판정의 지표가 된다.
부패육 (신선도 )판정 기준
시 험 항 목
기
준
o pH
6.2~6.3이면 부패초기로 의심
(※고기의 최종 pH는 대개 5.5내외)
o 암모니아 시험
음성
o 유화수소 검출시험
미검출
o Walkiewicz 반응
음성
o Trimethylamine
시료 100 g 중 4mg 이하
o 휘발성염기질소
시료 100 g 중 20 mg 이하
정밀검사발전연구회
165
III. 육가공품 시험법
5.1 휘발성 염기질소
1. 분석원리
Conway 미량확산기의 외실에 시료추출액을 넣고 K2CO3를 가해 알칼리성으로
하였을 때 휘발되는 염기를 내실중의 황산용액중에 흡수시킨다. 일정온도에서
흡수 시킨 후 염기 표준용액으로 황산용액을 적정한다(미적색→녹색). 이 방법은
시료 중에 함유되어 있는 휘발성 염기질소를 일정량의 황산 등에 흡수시켜 중화
하고 남은 황산량을 수산화나트륨으로 중화적정하여 질소량을 산출하는 것이다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
원료육 및 포장육
2.2. 기준 : 20 mg% 이하
3. 장치
3.1. 피펫 또는 마이크로뷰렛
3.2. Conway미량확산용기
3.3. 여과지: 정성용 11 cm (회분 0.09 mg/disk), Advantec 5A
3.4. Shaker
3.5. 분석저울 : 0.1 mg까지, 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1. Brunswik시약 (Methyl red-Methylene blue 혼합지시약)
Methyl red 0.2 g, Methylene blue 0.1 g을 95 % ethanol 100 mL에 녹인
후 여과하여 갈색병에 넣어 사용한다.
(변색범위 pH 4.3～5.2, pH 4.5에서 녹색에서 분홍)
주) 0.2 g methyl red + 0.1 g bromocresol green 0.1 g/ 100 ml 95% EtOH로 대체 가능
4.2. 0.01 N-H2SO4용액
1 N 황산을 물로 100배 용량으로 희석하고 표정한다.
4.3. K2CO3 포화용액
K2CO3 60 g을 증류수 50 mL에 가열하여 녹이고 NH3 가스를 피하여
식히고 위의 맑은 상층액을 이용.(Hood 안에서 작업)
166
정밀검사발전연구회
III. 육가공품 시험법
4.4. 0.01 N NaOH 용액 : 표정하여 사용한다.
4.5. 기밀제 : 글리세린
5. 시험방법
Conway 미량확산기 (Conway (micro) diffusion cell) 의 모식도 및 기울기
5.1. 시료전처리
5.1.1. 시료 10 g을 2개의 centrifuge tube에 따로 넣는다.
(2회 시험하여 평균값을 결과값으로 한다.)
5.1.2. 증류수로 50 mL까지 채워 30분간 shaker를 이용하여 침출 한다.
5.1.3. 5A filter paper를 깔대기에 끼워 눈금 있는 비이커에 대고 여과한다.
정밀검사발전연구회
167
III. 육가공품 시험법
5.1.4. 여과액을 5 % 황산으로 약산성(pH 3~5)으로 중화한 후 증류수를 넣어
일정량(예 : 100 mL)으로 하여 시험용액으로 한다.
주의) 중화용인 5 % 황산은 1 N 황산 등으로 대체 가능하다.
5.1.5. 확산기의 외실 (B) 의 아래쪽에 시료액 1 mL를 넣는다.
5.1.6. 내실 (A) 에 0.01 N-H2SO4 1 mL를 넣는다.
5.1.7. 덮개의 갈아 맞춘 부분에 기밀제 소량을 고루 바른 후 외실 (B)윗쪽에
K2CO3 포화용액 1 mL을 넣고, 뚜껑을 덮은 후 외실쪽이 잘섞이게 한다.
주의) 뚜껑을 잘 맞추어 외실로부터 발생한 휘발성 염기가 새어나가지
않도록 밀착시켜 뚜껑을 철제크립으로 압착한다.
주의) 또한 K2CO3 포화용액을 가할때 내실에 튀지 않도록 주의한다.
5.1.8. 25 ℃에서 1시간(20 ℃ 120분, 16 ℃ 140분, 10 ℃ 160분이상)
정치 시
킨다.
5.1.9. 뚜껑을 열어 내실에 Brunswik시약 1방울을 넣고 0.01 N-NaOH 용액 으로
적정(적색→녹색)한다.
5.2. 공시험
시험용액 대신 증류수 10 mL을 사용하여 5.1.2이하와 동일하게 조작한다.
주의) 이 검사법은 중화법에 의한 미량 분석이므로 실험실내에 산성 또는
알칼리성 가스가 발생하지 않도록 주의하여야 한다.
6. 결과
6.1.계산

휘발성염기질소량 ㎎    × V   V   × F × D × 
S
V1 : 0.01 N-NaOH용액 적정 소비량 (mL)
V0 : 공시험의 0.01 N-NaOH용액 적정 소비량 (mL)
F : 0.01 N-NaOH용액의 역가
D : 희석배수
S : 시료채취량 (g)
7. 참고문헌
7.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
7.2. 표준 식품분석학(2010), 지구문화사.
168
정밀검사발전연구회
III. 육가공품 시험법
7.3. FAO Corporate Document Repositort, Non-sensory Assessment of fish
quality, Torry Research Station ,Series title: Torry Advisory Notes - No. 92
7.4. Conway, E.J., Microdiffusion Analysis and Volumetric Error. Grosby,
Lockwood and Sons Ltd., London, (1968)
정밀검사발전연구회
169
III. 육가공품 시험법
붙임 1. 검사흐름도
시료 채취
↓
시료 및 공시료 전처리
↓
확산기에서 정치
(25 ℃에서 1시간)
↓
0.01 N-NaOH 용액으로 적정
↓
계산 및 결과판정
170
정밀검사발전연구회
III. 육가공품 시험법
5.2 Trimethylamine
1. 분석원리
시료추출액에 formalin 용액, toluene과 알칼리 K2CO3를 가해 교반하면
trimethylamine은 유리하여 toluene층으로 이행한다. 탈수한 toluene층에 picric
acid를 가하면 trimethylamine의 picrate를 생성하여 황색을 나타낸다. 이것을
410 nm에서 흡광도를 측정하여 비색 정량한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상 : 식육
2.2. 기준
시료 100 g중 Trimethylamine(TMA) 4~6 mg이면 부패초기로 인정
(0.04~0.06 mg/g)
3. 장치
3.1. Cuvet : 2.5 mL용(Brand 7590 05)
3.2. 시험관 : 유리 재질, 10mL용
3.2. 원심분리기
3.3. UV/VIS Spectrophotometer : Varian cary 100
3.4. Balance : 분석저울 0.1 mg까지, 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1 시약
4.1.1. Trichloroacetic acid solution : 7.5 % 수용액
4.1.2. Sodium sulfate anhydrous
4.1.3. Toluene : Sodium sulfate anhydrous로 탈수한다.
4.2. 시액
4.2.1. 0.02
% picric acid․toluene solution
Picric acid 100 mg을 탈수 tolune 500 mL로 용해한다.
4.2.2. 포화Potassium carbonate(K2CO3) solution
100 g K2CO3를 100 mL 증류수에 녹인다.
정밀검사발전연구회
171
III. 육가공품 시험법
4.2.3. 10 % 중성 Formalin solution
20 %, 1 L 상용 formalin을 거의 색이 없어질 때까지 100g MgCO3 넣고
흔들어 여과한다. 100 mL를 200 mL로 희석한다.
4.2.4. HCl(1+3) solution : HCl 1 mL와 증류수 3 mL을 넣어 섞는다.
4.3 표준물질
Trimethylamine hydrochloride, 98 %(Sigma-aldrich T 72761)
4.4. 표준용액 제조
4.4.1 Stock standard solution(1 mg/mL)
TMA hydrochloride 0.682 g을 취하여 HCl(1+3)용액 1 mL를 가하고 증류
수로 100 mL로 맞춘다.
4.4.2. Working standard solution(0.01 mg/mL)
1 mL stock sol에 1 mL HCl(1+3)을 가하고 증류수로 100 mL로 맞춘다.
5. 시험방법
5.1 시료전처리
5.1.1. 시료(식육)를 가능한 한 지방이 혼입되지 않도록 근육시료 5 g을 채취하여
centrifuge tube에 담는다.
5.1.2. 천칭한 시료에 7.5 % trichloroacetic acid 25 mL를 가하고 30분간 혼합한다.
5.1.3. 2,000~3,000 r/min에서 상층이 투명해질 때까지 원심 분리하고, 상층액 중
4 mL을 취한다.
5.1.4. Formalin sol. 1 mL, toluene 10 mL 및 포화 K2CO3 3 mL을 가하고, 마개를
막은 다음 손으로 30~40회 정도 강하게 진탕한다.
5.1.5. 실온에서 5~10분간 정치한 후 상층의 toluene을 7~9 mL를 취한다. 이 때
수용액층은 피한다.
5.1.6. 무수황산나트륨 0.1 g이 들어있는 마개가 있는 시험관에 위의 toluene
용액을 넣고 흔들어 탈수한다.
5.1.7. 별도의 시험관에 위의 탈수 toluene용액 5 mL를 취하고 0.02 % picric
acid sol. 5 mL를 가하여 혼합되도록 약하게 흔든다.
5.1.8. 410 nm에서 분석한다.
5.1.9. 만약 시료추출액이 0.03 mg이상의 TMA을 포함하면 7.5 % trichloroacetic
acid sol.으로 희석하여 5.1.4부터 다시 분석한다.
172
정밀검사발전연구회
III. 육가공품 시험법
5.2. 공시험
공시험은 시료추출액 대신에 증류수 4 mL을 사용해서 5.1.4부터 동일하게
처리하여 흡광도를 측정한다.
6. 기기분석조건
6.1. 분석파장 : 410 nm
6.2. 흡광도 측정
6.2.1. 기기는 흡광도 측정 전 최소 20분 전에 켜둔다.
6.2.2. 공시험 용액으로 zero setting을 하고 나머지 표준용액의 흡광도를 측
정한 후 시험용액의 흡광도를 측정한다.
7. 결과
7.1. 검량선 작성
7.1.1. 4.4.2.의 standard sol.을 각각 1.0, 2.0, 3.0 mL을 취하고 증류수로 각각
4 mL로 희석한다.
7.1.2. 5.1.4부터 전처리하여 흡광도를 측정하고 검량선을 작성한다.
7.2. 계산
Trimethylamine
= 검출된 농도(μg/mL) ×
(mg/100 g)
희석배수
시료량 (g)
×
100
1000
8. 참고문헌
8.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
8.2. AOAC Official Methods of Analysis(1995), Fish and Other Marine Products,
Chapter 35, p, 7
8.3. AOAC Official Method 971.14, Trimethylamine Nitrogen in Seafood.
: Colorimetric method.
8.4. 표준 식품분석학(2010), 지구문화사.
정밀검사발전연구회
173
III. 육가공품 시험법
붙임 1. 검사흐름도
시료 채취(muscle)
↓
시료, 공시료 및 표준용액 전처리
↓
흡광도 측정
(410nm)
↓
계산 및 결과판정
174
정밀검사발전연구회
III. 육가공품 시험법
5.3 유화수소 시험법
1. 분석원리
식육이 부패가 진행되면 미생물에 의해 식육 단백질이 분해되어 암모니아와
유화수소를 발생시키게 된다. 본 법은 이 원리를 이용해 시료 중의 유화수소
가스의 발생정도를 측정함으로써 식육의 부패여부를 간접 측정하는 시험방법이다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상 : 식육
2.2. 기준 : 미검출
3. 장치
3.1. 여과지
3.2. 시험관 : 직경 2 cm, 높이 10 cm
4. 시약 및 시액
4.1. 묽은 황산(pH ≒ 5.75) : (10 % 황산)
4.2. 10 % 질산납 용액(Lead nitrate) 또는 초산납 용액(Lead acetate)
5. 시험방법
5.1. 시료 10~25 g을 세절하여 시험관에 넣고 시료가 완전히 젖을 정도가
되도록 묽은 황산을 가한다.
5.2. 10 % 질산납 용액 혹은 초산납 용액을 시료가 완전히 잠길 때까지 추가한
다음 여과지를 시약면이나 시험관의 벽에 접촉되지 않게 매달은 후 밀봉하고
관찰한다.
정밀검사발전연구회
175
III. 육가공품 시험법
6. 결과
6.1. 결과
여과지가 담황색 내지 갈색을 나타내면 소량의 유화수소가 존재하는 것이며,
여과지가 담홍색으로 변하면 다량의 유화수소가 존재하는 것으로 판정한다.
※부패의 정도에 따라 황색〈갈색〈흑색으로 변한다.
7. 참고문헌
7.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
7.2. 축산식품학(1998), 선진문화사.
176
정밀검사발전연구회
III. 육가공품 시험법
붙임 1. 검사흐름도
시료 채취
묽은 황산 가함
↓
10 % 질산납 용액 첨가
(시료가 잠길 때까지)
↓
시험관 뚜껑에 여과지를 부착 후 밀봉
↓
유화수소 발생여부 관찰
정밀검사발전연구회
177
III. 육가공품 시험법
5.4 암모니아 시험법
1. 분석원리
식육이 부패가 진행되면 미생물에 의해 식육 단백질이 분해되어 암모니아나
유화수소를 발생하게 된다. 본법은 이 원리를 이용해 시료 중의 암모니아 가스의
발생 정도를 측정함으로써 식육의 부패여부를 간접 측정하는 시험법이다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상 : 식육
2.2. 기준 : 음성
3. 장치
3.1. 시험관(직경 2 cm, 높이 10 cm)
3.2. 백금선이 부착된 시험관 뚜껑
주의) 철(Fe)성분이 있을 경우 의양성(false positive)반응이 일어날 수도 있다.
4. 시약 및 시액
25 % 염산 : Ethyl ether : Ethanol = 1 : 1 : 3
5. 시험방법
5.1. 시료전처리
5.1.1. 위의 혼합액을 직경 2 cm 높이 10 cm의 시험관 밑바닥으로부터 1 cm
높이가 되게 넣어 마개를 하고 밀봉(Rubber stopper등)한다.
5.1.2. 잘 진탕하여 끓는 물속에서 가열한다.
5.1.3. 검체 육편을 시험관 뚜껑에 부착된 백금선에 붙여서 신속히 마개를
열고 관의 벽면에 육편이 닿지 않도록 하여 시약면에서 약 1 cm 높이가
되게 늘어뜨려 암모니아 가스의 흰 연기가 발생하는지 관찰한다.
5.2. 대조군 시험
5.2.1. 신선한 동일종의 육을 대조군으로 하여 같은 방법으로 실험하고 관찰한다.
178
정밀검사발전연구회
III. 육가공품 시험법
양성시료 / 흰 안개가 관찰됨
음성대조군
6. 결과
6.1. 결과
관내에 흰 안개가 발생하면 양성으로 판정한다. 보다 정확한 판정을 위하여
대조군과 비교한다.
7. 참고문헌
7.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
7.2. 축산식품학. 1998, 선진문화사.
정밀검사발전연구회
179
III. 육가공품 시험법
붙임 1. 검사흐름도
혼합액 준비
25 % 염산: Ethyl ether: Ethanol
1
:
1
:
3
↓
시험관 뚜껑에 백금선 부착
식육을 걸어 밀봉
↓
암모니아 흰 연기 발생여부 관찰
180
정밀검사발전연구회
III. 육가공품 시험법
6
우지의 불용성불순물
불용성 불순물이란 n-hexane 또는 petroleum ether에 불용인 오물 및 외래
물질의 양을 말한다. 이 불순물은 기계 장치에서 유래한 불순물, 미량
물질,
탄수화물, 질소성 물질, 다양한 수지, 칼슘 비누, 산화 지방산, 지방산 락톤
및 알칼리 비누(또는 일부분), 히드록시-지방산
및 이들의 글리세리드를 포함
한다.
1. 분석원리
시료를 petroleum ether에 녹였을 때 시료내의 녹지 않는 불용성불순물을
측정하는 방법이다.
2. 검사 대상 및 기준
2.1. 검사대상 : 식용 및 비식용 우지
2.2. 기준 : 0.15 % 이하
3. 장치
3.1. G3 glass filter
3.2. 데시케이터 및 실리카겔
3.3. 고무장치 : Glass filter 장착용
3.4. Flask : Plastic재질, 1 L용
3.5. Vacuum pump
3.6. 건조기
3.7. Balance : 분석저울 0.1 mg까지, 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
Petroleum ether (시약급)
정밀검사발전연구회
181
III. 육가공품 시험법
5. 시험방법
5.1. 시료전처리
5.1.1. Glass filter를 dry oven(105 ℃)에서 4시간 동안 항량시킨 후 desicator
에서 방냉시켜 준비한다.
5.1.2. 우지를 50 g 정도 채취하여 50 mL centrifuge tube에 담는다.
5.1.3. 채취한 시료를 60 ℃ 오븐에 넣어 녹인다.
5.1.4. 미리 향량시킨 glass filter를 저울에 달아 무게를 잰다.
5.1.5. 한 개의 시료(우지)당 3개의 비이커에 transfer pipette을 사용하여
시료를 각 10 g씩 칭량한다.
5.1.6. Flask(1 L)에 고무장치를 끼우고, 각 시료에 해당하는 glass filter를 장
착한 후 시료 10 g이 있는 비이커에 petroleum ether 100 mL를 부어
잘 녹인 다음 glass filter에 붓고 vacuum pump를 작동하여 여과한다.
5.1.7. 비이커를 petroleum ether 100 mL로 세척하여 비이커에 남은 우지를 녹
인 다음 glass filter에 붓고 vacuum pump를 작동한다.
5.1.8. 외부공기에 노출시켜 수분을 증발시킨 후, 105 ℃ 오븐에 1시간 넣은
후 30분간 방냉 후 그 무게를 잰다.
6. 결과
6.1. 계산
함량( %) =
  
× 100

w0 : 항량후의 glass filter의 무게(g)
w1 : 건조후 glass filter의 무게 (g)
s : 검사시료의 무게(g)
위 계산식을 이용하여 시료 당 3개의 값을 구하고 그 평균을 낸다.
7. 참고문헌
7.1. 사료공정서.
182
정밀검사발전연구회
III. 육가공품 시험법
붙임 1. 검사흐름도
Glass filter 항량 및
시료 채취(10 g)
↓
Petroleum ether(100 mL)로 용해
↓
필터장착 후 여과
↓
Dry oven에서 1시간 정체 후 방냉
↓
필터 무게 측정
↓
계산 및 결과판정
정밀검사발전연구회
183
IV. 알가공품 시험법
IV. 알가공품 시험법
1
원료알의 관능검사법
1. 분석원리
원료알의 외부와 내용검사를 실시하고 비중검사를 하여 식용 부적합 알을
분류한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상 : 원료알
2.2. 기준 : 각 검사기준 참고
3. 장치
3.1. 확대경
3.2. 검란기 혹은 불빛
3.3. 유리판
3.4. 자외선 검사기
4. 시약 및 시액
8 %, 10 %, 11 % 식염수
5. 시험방법
5.1. 외부검사법
5.1.1. 외관
시료에 대해서 먼저 오염도 및 파손의 유무를 검사한다. 신선알 껍질은
광택이 없고 거칠며 오래된 계란은 표면에 광택이 있고 거칠다.
5.1.2. 진음
계란을 흔들어 볼 때 신선알은 아주 소리가 없으나 묵은 계란은 진음이 있다.
5.1.3. 투시
검란기나 검란상자에 넣고 투시하면 신선알은 내용이 균일하며 홍색을
보이고 기실이 깨끗하게 보이나 묵은 계란은 기실이 보다 넓고 내용이
어둡게 보이며 난황의 자리가 동요되고 특히 부패란은 암흑색을 보인다.
5.1.4. 자외선 조사법
계란에 자외선을 조사하면 신선란은 붉은 형광색을 나타내나 수주일 지난
계란은 푸른색의 형광을 나타낸다.
정밀검사발전연구회
187
IV. 알가공품 시험법
5.2. 내용검사법
깨끗한 유리판에 계란의 내용물을 옮기고 그 색깔, 난황의 위치, 배반의 배
자발육유무 및 혈관형성 여부를 관찰한다. 그 위에 풍미, 냄새, 먼지의 혼
입, 기타 이물의 혼입 및 용해상태를 검사한다. 그리고 난황의 높이 및 용
해 상태를 검사한다. 그리고 난황의 높이 및 직경을 측정하여 난황계수를 계
산한다. (Figure 1. 난황계수 참고)
5.3. 비중에 의한 검사법
정상적인 신선알의 비중은 1.0784~1.0914이다. 아래와 같은 방법에 의하여
비중을 측정할 수 있다.
5.3.1. 11 % 식염수에 즉시 가라앉으면 비중은 1.080이상이다.
5.3.2. 11 % 식염수에는 떠오르나 10 % 식염수에 가라앉으면 비중은 1.073정도이다.
5.3.3. 10 % 식염수에는 떠오르나 8% 식염수에 가라앉으면 비중은 1.060정도이다.
5.3.4. 8 % 식염수에 떠오르는 경우에는 비중은 1.058미만이다.
Figure 1. 난황계수
6. 결과
관능검사 결과 부패된 알, 산패취가 있는 알, 곰팡이가 생긴 알, 이물이 혼입
된 알, 혈액이 함유된 알, 내용물이 누출된 알, 난황이 파괴된 알(물리적 원인에
의한 것은 제외한다), 부화를 중지한 알 등을 식용 부적합알로 분류한다.
7. 참고문헌
7.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
188
정밀검사발전연구회
IV. 알가공품 시험법
붙임 1. 검사흐름도
원료알 외부검사
↓
내용검사
↓
비중검사
↓
결과판정
정밀검사발전연구회
189
V. 공통 시험법
V. 공 통 시험법
1
수분
수분은 영양소는 아니지만 식품의 품질평가에 있어서 가장 기본적인 항목
이다. 수분과 고형분은 보는 견지를 달리한 표현으로서, 일반적으로 식품은
수
분과 고형분의 합으로 이루어져 있다. 수분측정에 있어서 주의해야 할 점은 시
료자체의 수분이 변화하기 쉬워서 조금만 부주의하면 흡습 또는 탈습 현상이 나
타나므로 시료의 특성을 충분히 파악하여 시료전체를 대표할 수 있는 시료를
채취하는 데 있다.
1. 분석원리
시료를 일정량 취하여 상압하에서 물의 끓는점보다 약간 높은 98~100 ℃로
가열 건조하여 수분을 제거한 후 건조 전후 중량 차이의 항량값을 수분량으로
계산하는 방법이다.
2. 검사대상 및 기준
검사항목
검사대상
수분(%)
유고형분(%)
무지유고형분(%)
우유류
8.0 이상
저지방우유류
8.0 이상
가공유류
가공유
7.2 이상
저지방가공유
5.5 이상
유음료
4.0 이상
7.5 이상
산양유
발효유류
버터유류
농축유류
발효유
3.0 이상
농후발효유
8.0 이상
크림발효유
3.0 이상
농후크림발효유
8.0 이상
발효버터유
발효유분말
버터유
8.0 이상
5.0 이하
85 이상
6.5 이상
버터유분말
5.0 이하
95 이상
농축우유
탈지농축우유
가당연유
정밀검사발전연구회
22.0 이상
27.0 이하
29.0 이상
193
V. 공 통 시험법
검사항목
검사대상
수분(%)
유고형분(%) 무지유고형분(%)
가당탈지연유
29.0 이하
25.0 이상
가공연유
32.0 이하
22.0 이상
유크림류
분말유크림
5.0 이하
버터류
버터
18.0 이하
80.0 이상
가공버터
18.0 이하
30.0 이상
버터오일
0.3 이하
99.6 이상
농축유류
자연치즈
가공치즈
분유류
유청류
경성치즈
60.0 이상
반경성치즈
40.0 이상
연성치즈
35.0 이상
생치즈
18.0 이상
경성가공치즈
50.0 이상
반경성가공치즈
46.0 이상
혼합가공치즈
38.0 이상
연성가공치즈
34.0 이상
전지분유,
5.0 이하
95.0 이상
가당분유
5.0 이하
70.0 이상
혼합분유
5.0 이하
50.0 이상
탈지분유
유청
5.0 이상
농축유청
25.0 이상
유청분말
5.0 이하
95.0 이상
유당
5.0 이하
95.0 이상
유단백가수분해식품
5.0 이하
유청단백분말
조제유류
조제분유,
성장기용조제분유,
기타조제분유
5.0 이하
아이스크림분말류
식육추출가공품
5.0 이하
건조제품에 한함
10.0 이하
식용우지,식용돈지
0.3 이하
원료우지,원료돈지
0.7 이하
알가공품
194
분말제품에 한함
10.0 이하
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
3. 장치
3.1. 수분항량병
3.2. 유리봉 : Sea sand 15~20 g을 칭량한 평량병에 옆으로 삽입했을 때
적어도 1.5 cm 이상 해사로부터 나와 있어야 한다.
3.4. 건조기 : 100~110 ℃ 온도를 유지할 수 있는 것으로 적어도 ±1 ℃의
온도조절이 가능한 것
3.5. 데시케이터
3.6. Balance : 분석저울 0.1 mg까지, 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
Sea sand 15~20 mesh(분석급)
5. 시험방법
5.1. 검사준비
5.1.1. 수분항량병 준비
수분항량병에 sea sand 15~20 g 과 유리봉을 넣고 건조기
(100~105 ℃)에서 3~4시간 이상 미리 항량한 후 데시케이터에 넣어 약
30분간 식힌다.
주의) 한 시료당 두개의 항량병 준비
5.1.2. 시료준비
시료는 가능한 한 빨리, 잘게 썰고 수분이 날아가지 않도록 덮어 놓는다.
5.2. 검사법
5.2.1. 면장갑을 끼고 식혀 놓은 수분항량병(유리봉포함)을 꺼내 무게를 잰다.
5.2.2. 항량병에 시료를 넣고 정밀히 칭량한다.
(고체 및 액체 시료 : 5 g, 분말 시료 : 2.5 g)
5.2.3. 유리봉으로 시료를 세절하면서 해사와 잘 혼합하여 최대한 표면적을
넓게 한다.
5.2.4. 건조기에 넣어서 3~4시간 건조하여 항량이 되게 한 후 데시케이터에 넣어
30분간 식히고 무게를 단다.
주의) 버터 및 우지는 1시간 이하로 건조한다.
5.2.5. 계산한다.
정밀검사발전연구회
195
V. 공 통 시험법
6. 결과
6.1. 계산
6.1.1. 수분(%) = 100-(

× 100 )

6.1.2. 유고형분, 건조물량( %) =

× 100

a : 수분항량병+sea sand+유리봉의 무게(g)
b : 건조 후 항량이 되었을 때의 무게(g)
c : 검사시료의 무게(g)
7. 참고문헌
7.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
7.2. 표준식품분석학(2010), 지구문화사.
196
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
붙임1. 데이터 및 결과 예
1. 시료 : 경성치즈
2. 건조온도 : 98~100 ℃
3. 항량병 측정 (a) : 4시간 이상 건조, 30분 방냉 후 칭량 : 81.9594 g
4. 시료량 측정(d) : 5.5920 g
5. 시료 건조 후 항량병의 측정(c) : 85.6711 g
6. 유고형분 계산
유고형분( %) =
정밀검사발전연구회
  
× 100= 66.3752( %)

197
V. 공 통 시험법
붙임 2. 검사흐름도
항온(98~100 ℃)건조기
◦ 정제해사를 담은 평량병을 건조
↓
항량병 칭량
↓
◦ 시료는 표면적이 넓게 골고루 펴
항량병에 시료채취
넣는다.
◦ 유리봉으로 시료와 해사를 잘 혼합
한다.
↓
칭량
◦ 액상시료의 경우 중탕→증발
↓
항온(105 ℃)건조기
◦ 4시간 건조
◦ 버터, 우지는 1시간 이내 건조
↓
데시케이터
◦ 30분간 방냉
↓
칭 량
◦ 항량이(0.001 g이내) 될 때까지 건조·
방냉·칭량 반복
↓
계산 및 결과판정
198
◦ 수분 및 유고형분 계산
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
2
보존료
보존료는 미생물의 증식에 의해서 일어나는 식품의 변질, 부패 및 화학적
변화를 방지하여 식품의 영양가와 신선도를 유지시키기 위해 사용되는 식품
첨가물로서 일반적으로 방부제로 불려지는 물질을 말한다. 특히 안식향산
(benzoic acid), 소르빈산(sorbic acid), 데히드로초산(dehydroacetic acid)등은 식품을
보존하려는 목적으로 세계적으로 많이 사용되며 다양한 축산물가공품에도 사용되고
있다.
축산물의 가공기준 및 성분규격의 보존료 검사대상 및 기준
자연치즈, 가공치즈
데히드로초산
데히드로초산나트륨
소르빈산
소르빈산칼륨
프로피온산칼슘
프로피온산나트륨
0.5 g/kg이하(데히드로초산으로서)
3.0 g/kg이하(소르빈산으로서 기준하며, 프로피온산
칼슘 또는 프로피온산나트륨을 병용할 때에는 소르빈산
및 프로피온산의 사용량의 합계가 3.0 g/kg이하)
3.0
g/kg이하(프로피온산으로서
기준하며,
소르빈산
또는 소르빈산칼륨을 병용할 때에는 프로피온산 및 소르
빈산의 사용량의 합계가 3.0 g/kg이하)
버터류
데히드로초산
데히드로초산나트륨
0.5 g/kg이하(데히드로초산으로서)
식육가공품(식육추출가공품, 식용우지, 식용돈지 제외)
소르빈산
소르빈산칼륨
정밀검사발전연구회
2.0
g/kg이하(소르빈산으로서
양념육류(육지물),
기준하며,
분쇄가공육제품,
포장육,
갈비가공품은
검출 되어서는 아니된다.)
199
V. 공 통 시험법
2.1 HPLC를 이용한 sorbic acid 및 benzoic acid 시험법
1 분석원리
시료에 증류수를 넣고 초음파로 추출한 후 C18 cartridge를 이용하여 정제
하고 HPLC/UVD로 검출한다.
1.1 적용물질
Sorbic acid(소르빈산, SA), Benzoic acid(안식향산, BA)
2. 검사대상 및 기준
축산물의 가공기준 및 성분규격의 검사대상 및 기준 참고
3. 장치
3.1. Filter paper : Advantec 5A
3.2. Sep-pak C18 cartridge, 6 cc, 500 mg(Waters WAT043395)
3.3. Sonicator
3.4. Vacuum manifolder
3.5. 진공펌프
3.6. HPLC : Agilent 1100(UVD)
3.7. Balance : 분석저울 0.1 mg까지, 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. Methanol(HPLC급)
4.1.2. Potassium phosphate monobasic(KH2PO4)(분석급)
4.1.3. Potassium phosphate diabasic(K2HPO4)(분석급)
4.1.4. Cetyltrimethylammonium(CTA)(분석급, Wako 087-06302)
4.1.5. 1 N HCl
4.1.6. 3차 증류수
4.2. 시액
4.2.1. 0.005 M CTA solution
CTA 0.8 g을 정밀히 달아 증류수 500 mL로 채운다.
200
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
4.2.2. 50 mM 인산완충액(pH 5.0)
KH2PO4 6.8045 g을 정밀히 달아 증류수 900 mL에 녹인다. 50 mM
K2HPO4용액(0.879 g을 달아 증류수 100 mL에 녹임)으로 pH를 5.0으로
맞추고 증류수로 1 L까지 채운다.
4.2.3. Mobile phase
Methanol : 50mM 인산완충액[40:60, (v/v)]
4.3. 표준물질
Sorbic acid potassium salt(Sigma S-1751)
Potassium benzoate(Fluka 60065)
주의) sorbic acid, benzoic acid는 물에 잘 녹지 않으므로, 가능하면
salt(K 또는 Na)형태의 표준품을 준비한다.
4.4. 표준용액 제조
4.4.1. Stock standard solution(10,000 μg/mL)
Sorbic acid potassium salt 1.3518 g, Potassium benzoate 1.3228 g을 정
밀히 달아 증류수에 녹여 100 mL로 한다.
4.4.2. Intermediate standard solution(100 μg/mL)
위의 stock sol. 1mL를 100mL vol.flask에 넣고 methanol로 채운다.
4.4.3. Working standard solution(5, 10, 20, 40 μg/mL)
위의 stock sol.을 5, 10, 20, 40 μg/mL이 되도록 각각 methanol로 희석한다.
주의) 표준용액 제조시에는 salt의 분자량을 감안하여 계산하여야 한다.
예) 10,000 μg/mL 농도의 sorbic acid stock sol. 100mL 제조시
sorbic acid potassium salt의 분자량 : 150.22
potassium의 분자량 : 39.10
150.22 : 111.12 = χ g : 1 g
χ=1.3518 g
∴ sorbic acid potassium salt 1.3518 g을 증류수 100 mL에 녹인다.
5. 시험방법
5.1. 시료전처리
5.1.1. 시료 5 g을 칭량하여 centrifuge tube에 넣고 증류수로 25 mL이 되게 한다.
5.1.2. 30분간 초음파 처리(또는 shaking)한 후 이 액 5 mL를 취하여 1 N HCl
0.5 mL, 0.005 M CTA용액 0.5 mL를 가하여 섞어준다.
5.1.3. C18 cartridge를 vacuum manifolder에 장착하고 methanol 10 mL,
0.005
M 10 mL를 미리 흘려준다.
정밀검사발전연구회
201
V. 공 통 시험법
주의) Cartridge 작업시 중간에 마르지 않도록 유의한다.
5.1.4. 이어 시험용액을 흘려주고(2 mL/min) 증류수 10 mL로 씻어준다.
5.1.5. 진공을 걸어 cartridge를 충분히 건조시킨다.
5.1.6. Methanol 10 mL로 보존료를 용출시키고, 전량을 10 mL가 되게 한다.
5.1.7. 이 액을 0.45 μm syringe filter로 여과하여 시험용액으로 한다.
5.2. 공시험
시료 대신 증류수를 이용하여 시료와 동일하게 전처리한다.
5.3. 회수율 시험
5.3.1. 보존료가 검출되지 않은 시료를 잘게 썰어 준비한다.
5.3.2. 위의 시료 5g에 4.4.1.의 stock sol.(10,000 μg/mL)을 50 μL 또는 100
μL(원하는 농도 만큼)를 첨가하여 시료와 동일하게 전처리한다.
6. 기기분석조건
6.1 HPLC 조건
6.1.1. Column : Capcell pak C18, 250×4.6 mm, 5 μm
6.1.2. Detector : UV detector(wavelength : 235 nm)
6.1.3. Flow rate : 1.0 mL/min
6.1.4. Injection volume : 20 μL
6.1.5. Retention time : 15 min
7. 결과
7.1. 검량선 작성
표준용액을 각각 주입하여 얻은 피크의 넓이 또는 높이를 구하여 검량선을
작성한 후 시험용액의 각 보존료별 농도를 구한다.
7.2. 계산
보존료의 양(g/㎏) =
S×a ×
시료량
1
1000
S : 시험 용액중의 각 보존료의 농도(μg/mL)
a : 시험용액의 희석배수
8. 참고문헌
8.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
202
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
붙임 1. Standard 및 sample chromatogram
1-1. Standard chromatogram
DAD1 D, Sig=230,16 Ref=360,100 (070905P\SORBIC05.D)
mAU
3.093 - benzoic acid
400
300
4.080 - sorbic acid
500
200
100
0
0
2
4
6
8
min
6
8
min
1-2. Sample chromatogram
4.293 - sorbic acid
DAD1 D, Sig=230,16 Ref=360,100 (070905P\SORBIC19.D)
mAU
700
600
500
400
300
200
100
0
0
정밀검사발전연구회
2
4
203
V. 공 통 시험법
붙임 2. 검사흐름도
시료 채취
↓
추출(sonication 또는 shaking)
↓
정제 및 추출
(sep-pack C18 cartridge)
↓
표준물질 희석
↓
HPLC 분석
◦ UV detector 235 nm
↓
결과판정
204
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
2.2 GC를 이용한 sorbic, dehydroacetic acid 및
그 염류 시험법
1. 분석원리
식품첨가물공전에 등재되어 있는 합성 보존료에 대하여 증류한 후 유기용매로
추출하여 GC/FID로 분석한다.
1.1 적용물질
Sorbic acid(SA) 및 그 염류,
Dehydroacetic acid(DHA) 및 그 염류
2. 검사대상 및 기준
축산물의 가공기준 및 성분규격의 검사대상 및 기준 참고(page 193)
3. 장치
3.1. Distillation bottle
3.2. 비이커 : 500 mL
3.4. 거즈
3.5. 회전증발농축기
3.6. 증류장치 Buchi distillation unit K355
3.7. Gas Chromatograph : Agilent 6890N(FID)
3.8. Balance : 분석저울 0.1 mg까지, 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. Diethyl ether(Extra pure, Merck 1.00921)
4.1.2. Sodium chloride(분석급)
4.1.3. Sodium sulfate anhydrous(분석급)
4.1.4. Acetone(GC급)
4.1.5. 1 N NaOH
4.1.6. 3차 증류수
정밀검사발전연구회
205
V. 공 통 시험법
4.2. 시액
4.2.1. 10 % phosphoric acid solution
Phosphoric acid 10 mL을 증류수로 희석하여 100 mL로 만든다.
4.2.2. 15 % tartaric acid solution
Tartaric acid 15 mL을 증류수로 희석하여 100 mL로 만든다.
4.2.3. 10 % hydrochloric acid solution
38 % hydrochloric acid를 증류수로 희석하여 10 %로 만든다.
4.3. 표준물질
․ Sorbic acid(SA), Dehydroacetic acid(DHA) 및 그 염류
․ Acetanilide : Internal standard
4.4. 표준용액 제조
4.4.1. Stock standard solution(1,000 μg/mL)
각 보존료 표준품을 0.1 g씩 정밀히 달아 acetone 100 mL에 녹인다.
4.4.2. Working standard solution(25, 50, 100, 200 μg/mL)
Stock standard solution을 25, 50, 100, 200 μLl를 각각 취하고 internal
standard solution 100 μLl를 취하여 각각의 vial에 넣고, acetone으로
각각1 mL로 만든다.
4.4.3. Internal standard solution(1,000 μg/mL)
Acetanilide 0.1 g을 정밀히 달아 acetone으로 희석하여 100 mL로 만든다.
5. 시험방법
5.1. 시료전처리
5.1.1. 보존료의 함량에 따라 10~20 g의 시료를 취하여 거즈(2겹이상)로 싸서
증류 플라스크(distillation bottle)에 넣는다.
5.1.2. 1 N NaOH용액 또는 1 N HCl용액 으로 중화하고, 15 % 주석산 용액 5 mL,
NaCl 약 80 g 및 실리콘수지 한 방울을 넣고 증류수를 100 mL 넣는다.
5.1.3. 증류기에 연결하여 매분 약 10 mL의 속도로 증류하여 500 mL가 될 때
까지 증류한다.
주의) 여러 시료를 전처리 할 경우 시료를 증류한 후 증류 플라스크에 증류수
만을 넣고 증류장치를 가동하여 세척 후, 다음 시료의 전처리를 한다.
5.1.4. 증류액 일정량 25 mL를 centrifuge tube에 넣고 NaCl 1 g, 10 % 염산 1
mL를 넣는다.
206
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
5.1.5. 증류액에 ether 20 mL를 넣고 2분간 세게 흔든 뒤 5분정도 정치한 후
상층의 ether를 다른 centrifuge tube에 모은다.
5.1.6 추출은 총 3회 실시하며, 두번째 세번째 추출시에는 ether를 각각 10 mL
를 넣어 추출한다.
5.1.7. Ether를 모은 centrifuge tube에 증류수 2 mL를 넣고 약하게 흔들고 난 후
층이 생기면 아래층의 물을 스포이드를 이용하여 최대한 제거한다.
5.1.8. Ether에 남아있는 수분 제거를 위하여 sodium sulfate를 통과시킨다.
5.1.9. Ether를 둥근 바닥 플라스크로 옮기고, 회전증발농축기에서 ether를
모두 날려 보낸다.(400 mbar, 50 ℃)
5.1.10. Internal standard sol.을 500 μL 첨가하고 전체가 5 mL가 되도록
acetone으로 희석하여 시험용액으로 한다.
참고) 이 때 ISTD농도는 100 μg/mL이고 희석배수는 100배가 된다.
6. 기기분석조건
6.1. GC 분석조건
Parameter
Injector
Detector
Column
Carrier gas
Flow rate
Split ratio
Injection volume
Oven
Run time
GC condition
280 ℃
FID 300 ℃
HP-5(30 m×0.25 μm×0.32 mm)
N2
1.2 mL/min
10:1
2 μL
120 ℃(1 min)/10 ℃/210 ℃(4 min),
post run : 120 ℃(1 min)
16 min
7. 결과
7.1. 검량선작성
시험용액 및 표준용액을 GC/FID에 주입하고 분석하여 얻은 피크의 머무름
시간(retention time)을 비교하여 정성을 하고, 이 때 얻어진 피크의 면적
으로 검량선을 작성하여 각 보존료의 함량을 내부표준법에 따라 정량한다.
주의) 시료중 의심물질의 면적값의 비율이 검량선 내에(가능한한 중앙에) 들어
가도록 작성해야한다.
주의) 내부표준법이란 내부표준물질과의 비율(해당 물질의 면적값/내부표준물
질(Acetanilide 면적값))로 Y축(면적값)을 환산하여 계산하는 것을 의미한다.
정밀검사발전연구회
207
V. 공 통 시험법
해당물질의 면적값/PCNB 면적값
10
.
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
해당물질 농도(ppm)
7.2. 계산
시료 중 검량선에서 얻은 농도(μg/mL)×희석배수(100)
최종농도(g/kg) =
시료량(g)×1000
8. 참고문헌
8.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
208
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
붙임 1. Standard 및 sample chromatogram
pA
350
6.090 - dehydroacetic acid
300
2.495 - sorbic acid
250
200
150
6.497 - acetanilide(ISTD)
1-1. Standard chromatogram
100
50
0
0
2.5
5
7.5
10
min
1-2. Sample chromatogram
2.562 - sorbic acid
6.497 - acetanilide(ISTD)
pA
350
300
250
200
150
4.658
3.414
50
6.658
6.755
100
0
0
정밀검사발전연구회
2.5
5
7.5
10
m
209
V. 공 통 시험법
붙임 2. 검사흐름도
시료 채취
↓
증류
↓
ether로 추출
↓
증발 및 희석
(내부표준물질 첨가)
↓
표준품 희석
↓
GC 분석
↓
계산 및 결과판정
210
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
2.3 GC를 이용한 propionic acid 및 그 염류 시험법
1. 분석원리
식품첨가물공전에 등재되어 있는 합성 보존료 중 propionic acid에 대하여
증류한 후 이온교환수지를 통과시킨 다음, ether로 추출하여 GC/FID로 분석 한다.
1.1 적용물질
Propionic acid 및 그 염류
2. 검사대상 및 기준
축산물의 가공기준 및 성분규격의 검사대상 및 기준 참고(page 193)
3. 장치
3.1. Distillation bottle
3.2. 비이커 : 500 mL
3.3. 강산성 이온교환수지 : Supelco SAX
3.4. 거즈
3.5. Vacuum manifolder
3.6. 진공 펌프
3.7. 회전증발농축기
3.8. 증류장치
3.9. Gas Chromatograph : Agilent 6890N(FID)
3.10. Balance : 분석저울 0.1 mg까지, 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. Diethyl ether(Extra pure, Merck 1.00921)
4.1.2. Sodium chloride(분석급)
4.1.3. Sodium sulfate anhydrous(분석급)
4.1.4. 3차 증류수
정밀검사발전연구회
211
V. 공 통 시험법
4.2. 시액
4.2.1. 10 % phosphoric acid solution
Phosphoric acid 10 mL를 증류수로 희석하여 100 mL로 만든다.
4.2.2. 1 % Sodium hydroxide(NaOH) solution
NaOH 2 g을 증류수에 녹여 200 mL로 만든다.
4.3. 표준물질
Propionic acid : Sigma-aldrich 402907
Crotonic acid : Internal standard
4.4. 표준용액 제조
4.4.1. Internal standard solution(10,000 μg/mL)
Crotonic acid 1 g을 정밀히 달아 증류수로 100 mL로 만든다.
4.4.2. Stock standard solution(10,000 μg/mL)
Propionic acid 1g을 정밀히 달아 증류수로 채운다.
4.4.3. Working standard solution(50, 100, 200 μg/mL)
․ Stock standard solution을 각각 50, 100, 200 μL를 취하여 10 mL vol.
flask 에 넣고, internal standard도 100 μL씩 취하여 각각의 vol. flask
에 넣고, 증류수로 채운다.
․ 10 % phosphoric acid 1 mL를 첨가하고 ether로 3회 반복 추출
하여
ether의 총량이 10 mL이 되도록 한다.
5.시험방법
5.1. 시료전처리
5.1.1. 시료 10~20 g(프로피온산 100~200 mg)을 취하여 거즈로 싼 후
증류
플라스크(distillation bottle)에 넣는다.
5.1.2. 증류수 100 mL, 염화나트륨 80 g, 10 % phosphoric acid 10 mL 및 실리
콘 수지 1방울을 가해 증류액이 500 mL이 될 때까지 증류한다.
5.1.3. 이 때 500 mL 비이커에 1 % NaOH 20 mL를 가해 냉각기 끝이 잠기도록
한다.
주의) 여러 시료를 전처리 할 경우 시료를 증류한 후 증류플라스크에 증류수
만을 넣고 증류장치를 가동하여 세척 후 다음 시료 전처리를 수행한다.
5.1.4. 증류액 25 mL를 둥근 바닥 플라스크에 정확히 취하여 감압․농축 (400
mbar, 50 ℃)한 다음 잔류물을 증류수 1 mL로 녹인다.
212
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
5.1.5. 이온교환수지에 0.5 M NaCl용액 5 mL, 증류수 5 mL 순으로 통과시킨다.
5.1.6. 이온교환 수지 컬럼의 상부에 시료를 넣고, 용출액은 internal std. sol.
100 μL를 미리 넣은 15 mL centrifuge tube에 받는다.
주의) 이온교환수지컬럼을 활성화시킨 후 시료의 loading이 늦어질 경
우에는 컬럼 상부에 증류수를 약간 남겨 컬럼이 마르지 않도록 한다.
5.1.7. 증류수 1 mL씩으로 잔류물을 녹여서 이 조작을 되풀이하여 용출액의
전량을 10 mL로 만든다.
5.1.8. 용출액(물층)에 10 % phosphoric acid 1 mL, ether 5 mL를 가하여 추출
한다.
5.1.9. 다시 물층을 ether로 1~2회 추출하고 ether층을 모두 합쳐 일정량
(10 mL)으로 하여 시험용액으로 한다.
6. 기기분석조건
6.1 GC 분석조건
Parameter
GC condition
Injector
Detector
Column
Carrier gas
220 ℃
FID 250 ℃
HP-FFAP(30 m×0.25 μm×0.32 mm)
N2
Flow rate
1.2 mL/min
Split ratio
Injection volume
10 : 1
2 μL
Oven
Run time
80 ℃(1 min)/10 ℃/210 ℃(2 min),
post run : 80 ℃(1 min)
15 min
7. 결과
7.1. 검량선작성
시험용액 및 표준용액을 GC/FID에 주입하고 분석하여 얻은 피크의 머무름시
간(retention time)을 비교하여 정성을 하고, 이 때 얻어진 피크의 면적으
로 검량선을 작성하여 각 보존료의 함량을 내부표준법에 따라 정량한다.
주의) 시료중 의심물질의 면적값의 비율이 검량선 내에(가능한한 중앙에)
들어가도록 작성해야한다.
정밀검사발전연구회
213
V. 공 통 시험법
주의) 내부표준법이란 내부표준물질과의 비율(해당 물질의 면적값/내부표
준물질(crotonic acid)면적값))로 Y축(면적값)을 환산하여 계산하는 것을 말
한다.
해당물질의 면적값/PCNB 면적값
10
.
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
해당물질 농도(ppm)
7.2. 계산
시료 중 검량선에서 얻은 농도(μg/mL)×희석배수(200)
최종농도(g/kg) =
시료량(g)×1000
8. 참고문헌
8.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호)
214
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
붙임 1. Standard 및 sample chromatogram
1-1. Standard chromatogram
1-2. Positive Sample chromatogram
1-3. Negative Sample chromatogram
정밀검사발전연구회
215
V. 공 통 시험법
붙임 3. 검사흐름도
시료 채취
↓
증류
↓
이온교환수지 통과
(내부표준물질 첨가)
◦ 이온교환수지 활성화
0.5M NaCl 5 mL, 증류수 5 mL
↓
ether추출(3회 반복)
↓
표준품 희석 및 ether추출
(내부표준물질 첨가)
↓
GC 분석
↓
계산 및 결과판정
216
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
2.4 HPLC를 이용한 보존료 동시분석법
1. 분석원리
식품공전에 등재되어 있는 분석법으로, 식품 중의 보존료를 수증기 증류한 후,
얻은 유액을 액체크로마토그래프로 정성 및 정량 분석하는 방법이다.
1.1 적용물질
Sorbic acid(SA), Benzoic acid(BA), Dehydroacetic acid(DHA
Methyl p-hydroxy benzoate(mPHB)
Ethyl p-hydroxy benzoate(ePHB)
Isopropyl p-hydroxy benzoate(ipPHB)
N-propyl p-hydroxy benzoate(pPHB)
Isobutyl p-hydroxy benzoate(ibPHB)
N-butyl p-hydroxy benzoate(bPHB)
2. 검사대상 및 기준
축산물의 가공기준 및 성분규격의 검사대상 및 기준 참고
3. 장치
3.1. Distillation bottle
3.2. 증류장치
3.3. 비이커 : 500 mL
3.4. 거즈
3.5. HPLC : Agilent 1100(UVD)급 이상
3.6. Balance : 분석저울 0.1 mg까지, 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. Acetonitrile(HPLC급)
4.1.2. TBA-OH(Tetrabutylammonium Hydroxide sol.; Fluka 86854)
4.1.3. Phosphoric acid(HPLC급)
4.1.4. Sodium hydroxide(분석급)
4.1.5. Sodium chloride(분석급)
정밀검사발전연구회
217
V. 공 통 시험법
4.1.6. Tartaric acid(분석급)
4.1.7. 3차 증류수
4.2. 시액
4.2.1. 15 % Tartaric acid solution
Tartaric acid 15 mL를 증류수로 희석하여 100 mL로 만든다.
4.2.2. 1 % Sodium hydroxide(NaOH) solution
NaOH 2 g을 증류수에 녹여 200 mL로 만든다.
4.2.3. Mobile phase
․ Mobile phase A : 0.1 % TBA-OH(0.1 % 인산)용액
40 % TBA-OH 2.5 g과 85 % phosphoric acid 1.2 g을
증류수로 희석하여 1 L로 만든다.
․ Mobile phase B : 100 % Acetonitrile
4.3. 표준물질
Sorbic acid(SA), Benzoic acid(BA)
Dehydroacetic acid(DHA), Methyl p-hydroxy benzoate(mPHB),
Ethyl p-hydroxy benzoate(ePHB)
Isopropyl p-hydroxy benzoate(ipPHB)
N-propyl p-hydroxy benzoate(pPHB)
Isobutyl p-hydroxy benzoate(ibPHB)
N-butyl p-hydroxy benzoate(bPHB)
4.4. 표준용액 제조
4.4.1. Stock standard solution(1,000 ppm)
표준물질을 각 100 mg씩 정밀히 달아 Methanol에 녹여 100 mL로 한다.
4.4.2. Working standard solution
Stock sol.을 5, 10, 20, 40 μg/mL이 되도록 취하여 Methanol로 희석한다.
5.시험방법
5.1. 시료전처리
5.1.1. 시료 10~20 g(보존료 함량에 따라)을 취하여 거즈로 싼 후
증류 플라
스크(distillation bottle)에 넣는다.
5.1.2. 증류수 50~100 mL, 염화나트륨 80 g, 15 % tartaric acid 10 mL 및 실리
콘 수지 1방울을 가해 증류액이 500 mL이 될 때까지 증류한다.
218
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
5.1.3. 이 때, 500 mL 비이커에 1 % NaOH 20 mL를 가해 냉각기 끝이
잠기
도록 한다.(이 과정은 자동증류장치를 이용할 경우만 거친다.)
주의) 여러 시료를 전처리 할 경우 시료를 증류한 후 증류플라스크에
증류수만을 넣고 증류장치를 가동하여 세척 후 다음 시료 전처리를 수
행한다. 또한 자동증류장치를 이용할 경우,
5.1.4. 증류액을 취해 0.45 μm Syringe filter로 여과하여 시험용액으로 한다.
5.2. 공시험
시료 대신 증류수를 이용하여 시료와 동일하게 전처리한다.
5.3. 회수율 시험
5.3.1. 보존료가 검출되지 않은 시료를 잘게 썰어 준비한다.
5.3.2. 위의 시료 10~20g에 4.4.1.의 stock sol.(10,000 μg/mL)을 50 μL 또는
100 μL(원하는 농도 만큼)를 첨가하여 시료와 동일하게 전처리한다.
6. 기기분석조건
6.1 HPLC 조건
6.1.1. Column : Capcellpak C18, 250×4.6 mm, 5 μm
6.1.2. Detector : UV detector(wavelength : 217 nm)
6.1.3. Flow rate : 1.0 mL/min
6.1.4. Injection volume : 10 μL
6.1.5. Mobile phase(gradient mode)
시간(분)
0.0
2.5
7.0
12.0
15.0
이동상 A( %)
0.1 % TBA-OH(0.1 % 인산)용액
75
75
65
60
70
이동상 B( %)
Acetonitrile
25
25
35
40
30
7. 결과
7.1. 검량선 작성
표준용액 및 시험용액을 각각 주입하여 얻은 피크의 머무름 시간이 일치
하는 지를 확인 한 후 표준용액 chromatogram 상의 피크의 높이 또는 면
적를 구하여 검량선을 작성한 후 시험용액의 각 보존료별 농도를 구한다.
정밀검사발전연구회
219
V. 공 통 시험법
7.2. 계산
보존료의 양(g/㎏) =
S×a × 1
시료량
1000
S : 시험 용액중의 각 보존료의 농도(μg/mL)
a : 시험용액의 희석배수(500)
7.3. 확인검사(부적합 시)
부적합이 의심될 경우에는 개별분석법에 따라 반드시 확인검사를 실시한다.
8. 참고문헌
8.1. 식품공전(제2009- 0404호).
220
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
붙임 1. Chromatogram
1-1. Standard chromatogram
데히드로초산(2.8분), 소르빈산(3.5분), 안식향산(4.6분), 파라옥시안식향산메틸(5.1분),
파라옥시안식향산에틸(6.9분), 파라옥시안식향산이소프로필(8.7분),
파라옥시안식향산프로필(9.0분), 파라옥시안식향산이소부틸(10.9분),
파라옥시안식향산부틸(11.2분)
정밀검사발전연구회
221
V. 공 통 시험법
붙임 2. 검사흐름도
시료 채취
↓
시료전처리
(증류-500 mL)
↓
표준품 희석
↓
HPLC 분석
↓
계산 및 결과판정
222
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
2.5 HPLC를 이용한 보존료 동시분석법(스크리닝법)
1. 분석원리
시료를 ethanol로 추출한 후 HPLC/UVD로 검출한다. 이 방법은 스크리닝법으
로서 9종의 보존료를 동시에 검출할 수 있다.
1.1 적용물질
Sorbic acid(SA), Benzoic acid(BA), Dehydroacetic acid(DHA
Methyl p-hydroxy benzoate(mPHB)
Ethyl p-hydroxy benzoate(ePHB)
Isopropyl p-hydroxy benzoate(ipPHB)
N-propyl p-hydroxy benzoate(pPHB)
Isobutyl p-hydroxy benzoate(ibPHB)
N-butyl p-hydroxy benzoate(bPHB)
2. 검사대상 및 기준
축산물의 가공기준 및 성분규격의 검사대상 및 기준 참고(page 193)
3. 장치
3.2. Sonicator
3.3. 원심분리기
3.4. HPLC : Agilent 1100(UVD)
3.5. Balance : 분석저울 0.1 mg까지, 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. Acetonitrile(HPLC급)
4.1.2. Ethanol(분석급)
4.1.3. Phosphoric acid(HPLC급)
4.1.4. 3차 증류수
4.2. 시액
4.2.1. Mobile phase
정밀검사발전연구회
223
V. 공 통 시험법
․ Mobile phase A : 1 % phosphoric acid
Phosphoric acid 10 mL 를 증류수로 희석하여 1 L로 만든다.
․ Mobile phase B : 100 % Acetonitrile
참고) Mobile phase A는 0.1 % phosphoric acid sol.을 사용할 수 있다.
4.3. 표준물질
Sorbic acid(SA), Benzoic acid(BA)
Dehydroacetic acid(DHA), Methyl p-hydroxy benzoate(mPHB),
Ethyl p-hydroxy benzoate(ePHB)
Isopropyl p-hydroxy benzoate(ipPHB)
N-propyl p-hydroxy benzoate(pPHB)
Isobutyl p-hydroxy benzoate(ibPHB)
N-butyl p-hydroxy benzoate(bPHB)
4.4. 표준용액 제조
4.4.1. Stock standard solution
표준물질을 각각 50 mg씩 물에 녹여 100 mL로 한다.
4.4.2. Working standard solution
Stock sol.을 5, 10, 20, 40 μg/mL이 되도록 취하여 ethanol로
희석한
다.
5. 시험방법
5.1. 시료전처리
5.1.1. 시료 1 g을 취하여 50 mL vol. flask에 넣는다.
5.1.2. Ethanol 40 mL를 가하고 30분간 초음파 처리한 후 ethanol로 용량을 맞춘다.
5.1.3. 50 mL centrifuge tube에 옮겨 원심분리(3,500 r/min, 10 min)
한다.
5.1.4. 상층액을 취해 0.45 μm syringe filter 로 여과하여 시험용액으로 한다.
6. 기기분석조건
6.1. Column : Capcellpak C18, 250×4.6 mm, 5 μm
6.2. Detector : UV detector 235 nm
6.3. Flow rate: 1.0 mL/min
6.4. Injection volume : 20 μL
6.5. Mobile phase(gradient mode)
224
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
시간(분)
0
15
28
30
34
이동상 A
이동상 B
(0.1% phosphoric acid)
90
50
50
90
90
(Acetonitrile)
10
50
50
10
10
7. 결과
7.1. 검량선 작성
표준용액 및 시험용액을 각각 주입하여 얻은 피크의 머무름 시간이 일치
하는 지를 확인 한 후 표준용액 chromatogram 상의 피크의 높이 또는
면
적를 구하여 검량선을 작성한 후 시험용액의 각 보존료별 농도를 구한다.
7.2. 계산
보존료의 양(g/㎏) =
S×a × 1
시료량
1000
S : 시험 용액중의 각 보존료의 농도(μg/mL)
a : 시험용액의 희석배수
7.3. 확인검사(부적합 시)
부적합이 의심될 경우에는 개별분석법에 따라 반드시 확인검사를 실시한다.
8. 참고문헌
8.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
8.2. 축산물가공품 중 보존료 동시분석법 개발. Kor. J. Vet. Publ. Hlth, Vol.
27, No. 4. 2003.
정밀검사발전연구회
225
V. 공 통 시험법
붙임 1. Standard 및 sample chromatogram
1-1. Standard chromatogram
M W D 1 D , S ig = 2 3 5 , 1 6 R e f = 3 6 0 ,1 0 0 (1 0 0 4 2 2 P \ 1 0 0 4 2 2 P 2 0 1 0 -0 4 -2 2 1 6 -4 2 -3 4 \ S I G 1 0 0 1 0 . D )
24.409 - Isobutyl benzoate
20.215 - Isopropyl benzoate
24.873 - Butyl benzoate
100
20.675 - Propyl benzoate
200
17.786 - Ethyl benzoate
300
16.354 - Methyl benzoate
14.253 - Sorbic acid
14.489 - Benzoic acid
400
15.041 - Dehydroacetic acid
mA U
0
10
15
20
m in
25
1-2. Positive Sample chromatogram
M W D 1 D , S ig = 2 3 5 , 1 6 R e f = 3 6 0 ,1 0 0 (1 0 0 4 2 2 P \ 1 0 0 4 2 2 P 2 0 1 0 -0 4 -2 2 1 6 -4 2 -3 4 \ S I G 1 0 0 0 5 . D )
mA U
14.249 - Sorbic acid
400
300
200
100
0
10
226
15
20
25
m i
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
1-3. Negative Sample chromatogram
정밀검사발전연구회
227
V. 공 통 시험법
붙임 2. 검사흐름도
시료 채취
↓
시료전처리
(초음파추출 및 원심분리)
↓
표준품 희석
↓
HPLC 분석
↓
계산 및 결과판정
228
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
3
산화방지제
1940년대 후반 미국에서 부틸히드록시아니솔(BHA)이 유지식품에 효과적인
항산화력을 나타내고 식품에 사용해도 안전하다는 사실이 밝혀지면서부터 사용
되었으며 이 후 몰식자산프로필(PG)과 병용하거나 유기산과 혼합하여 사용하는
것이 더 효과적이라고 밝혀졌다. 디부틸히드록시톨루엔(BHT)은 동물성 유지, 터
셔리부틸히드로퀴논(TBHQ)은 식물성 기름이나 고불포화지방산에 효과적인 것
으로 알려져 있다.
축산물의 가공기준 및 성분규격의 검사대상 및 기준
버터류
산화방지제(g/kg) : 다음에서 정하는 이외의 산화방지제가 검출되어서는 아니된다
부틸히드록시아니졸(BHA)
티부틸히드록시톨루엔(BHT)
터셔리부틸히드로퀴논(TBHQ)
몰식자산프로필(PG)
0.2이하(병용할 때에는 부틸히드록시아니졸,디부
틸히드록시톨루엔 및 터셔리부틸히드로퀴논으로
서 사용량의 합계가 0.2 이하)
식용우지
산화방지제(g/kg) : 다음에서 정하는 이외의 산화방지제가 검출되어서는 아니된다
부틸히드록시아니졸(BHA)
0.2이하(병용할 때에는 부틸히드록시아니졸,디부
티부틸히드록시톨루엔(BHT)
틸히드록시톨루엔 및 터셔리부틸히드로퀴논으로서
터셔리부틸히드로퀴논(TBHQ) 사용량의 합계가 0.2 이하)
몰식자산프로필(PG)
0.1이하
식용돈지
산화방지제(g/kg) : 다음에서 정하는 이외의 산화방지제가 검출되어서는 아니된다
부틸히드록시아니졸(BHA)
0.2이하(병용할 때에는 부틸히드록시아니졸,디부
티부틸히드록시톨루엔(BHT) 틸히드록시톨루엔 및 터셔리부틸히드로퀴논으로서
터셔리부틸히드로퀴논(TBHQ) 사용량의 합계가 0.2 이하)
몰식자산프로필(PG)
정밀검사발전연구회
0.1이하
229
V. 공 통 시험법
1. 분석원리
액체크로마토그래프(LC) UV detector(자외선 검출기)를 사용하여 식품(버터, 우지)
중에 들어있는 산화방지제 검사에 사용되는 방법이다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
버터류(버터, 가공버터, 버터오일)
식용우지, 식용돈지
2.2. 기준
축산물의 가공기준 및 성분규격의 검사대상 및 기준 참고(page 224)
3. 기구
3.2. Separating funnel
3.3. 둥근 바닥 플라스크 : 250 mL용
3.4. Glass filter
3.5. 회전증발농축기
3.6. HPLC : Waters 2650
3.7. Balance : 분석저울 0.1 mg까지, 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. Acetonitrile(HPLC급)
4.1.2. Iso-propanol(HPLC급)
4.1.3. Acetic acid glacial(분석급)
4.1.4. Hexane(HPLC급)
4.1.5. Sodium sulfate anhydrous
4.1.6. 3차 증류수
4.2. 시액
4.2.1. Hexane포화 acetonitrile용액
Acetonitrile의 상층에 hexane층이 생길 때까지 hexane을 넣는다.
4.2.2. Acetonitrile : Iso-propanol(1:1) 용액
4.2.3. Mobile phase
230
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
Mobile phase A : 50 % Acetonitrile(컬럼 세척용)
Mobile phase B : 95 % Acetonitrile with 5 % Acetic acid
Mobile phase C : 5 % Acetic acid
4.3. 표준물질
n-propyl gallate(PG) : Sigma P-3130
Butylated hydroxy anisole(BHA) : Sigma B-1253
Butylated hydroxytoluene(BHT) : Sigma B-1378
tert-Butylhydroquinone(TBHQ) : TCI사(Japan)
4.4. 표준용액 제조
4.4.1. Stock standard solution
(PG 2500 μg/mL, BHA, BHT, TBHQ 5,000 μg/mL)
PG 0.025 g, BHA, BHT, TBHQ는 각각 0.05 g을 정밀히 달아
acetonitrile : iso-propanol(1:1) 용액 10 mL에 녹인다.
4.4.2. Working standard solution
(PG 50 μg/mL, BHA, BHT, TBHQ 100 μg/mL)
Stock standard sol.을 희석하여 각각 25, 50, 100 μg/mL의 농도로 희석
한다. 이 때 PG의 농도는 12.5, 25, 50 μg/mL 이다.
5. 시험방법
5.1. 시료전처리
5.1.1. 시료를 centrifuge tube에 가득 담아 60 ℃ 건조기에서 녹인다.
5.1.2. 녹은 시료에서 2.5 g을 채취하여 50 mL centrifuge tube에 넣는다.
5.1.3. Hexane 25 mL를 centrifuge tube에 담아 시료와 섞은 후 separating
funnel에 옮긴다.(2회 반복)
5.1.4. Hexane 포화 acetonitrile 50 mL를 분액 깔대기에 넣은 후 뚜껑을 닫고
가볍게 흔든다.
5.1.5. 1시간 이상 정치 후 하층액을 sodium sulfate를 넣은 glass filter로
여과
하여 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 모은다.
5.1.6. Hexane 포화 acetonitrile 25 mL를 분액 깔대기에 넣은 후 뚜껑을 닫고
가볍게 흔든다.
5.1.7. 30분경과 후 glass filter에 sodium sulfate를 넣고 하층액을 여과하여 앞의
둥근 바닥 플라스크에 모은다.(2회 반복)
정밀검사발전연구회
231
V. 공 통 시험법
5.1.8. 추출액을 3~4 mL 남을 때까지 농축 건조시키고, 메스실린더(10 mL)에 옮겨
acetonitrile로 5 mL까지 채우고 iso-propanol로 10 mL까지
채운다.
주의) 완전히 건조 된 경우는 acetonitrile : iso-propanol(1:1)을 넣어 10 mL로 만든다.
5.1.9. 0.45 μm syringe filter로 여과하여 시험용액으로 한다.
6. 기기분석조건
6.1. Detector : UV Detector 280 nm
6.2. Column : Lichrosorb RP-18, 10μm, 4.6×250 μm
6.3. Injection volume : 10~20 μL
6.4. Run time : 16 min
6.5. Mobile phase(gradient mode)
B : 95 % Acetonitrile with 5 % Acetic acid
C : 5 % Acetic acid
flow rate
(mL/min)
용매(B)
용매(C)
1
30
70
5
1
70
30
10
1
95.0
5
10.10
2
95
5
15.00
2
95
5
15.10
1
30
70
16.0
1
30
70
Time
6.6. 컬럼 세척
6.6.1. 분석이 끝난 후 mobile phase A(50 % acetonitrile sol.)를 이용하여 최소
1시간 이상 흘려준다.
6.6.2. 이어서 100 % methanol로 30분 정도 흘려준다.
7. 결과
7.1. 검량선 작성
표준용액 및 시험용액을 각각 주입하여 얻은 피크의 머무름 시간이 일치
하는 지를 확인한 후 표준용액 크로마토그램상의 피크의 높이 또는 면적을
구하여 검량선을 작성한 후 시험용액의 각 산화방지제의 농도를 구한다.
232
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
7.2. 계산
산화방지제(mg/kg) = 각 표준용액의 농도(mg/kg) ×
 × 

 
PS : 표준용액의 높이 또는 면적
PA : 시험용액의 높이 또는 면적
SA : 시료무게
8. 참고문헌
8.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
8.2. Analytical chemistry laboratory guidebook Antioxidant-7.
정밀검사발전연구회
233
V. 공 통 시험법
붙임 1. Standard 및 sample chromatogram
1-1. Standard chromatogram
BHT - 11.420
BHA - 8.380
AU
0.30
TBHQ - 6.071
PG - 4.499
0.40
0.20
0.10
0.00
2.00
4.00
6.00
8.00
10.00
12.00
14.00
1
6.00
8.00
10.00
12.00
14.00
1
1-2. Sample chromatogram
0.40
AU
0.30
0.20
0.10
0.00
2.00
234
4.00
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
붙임 2. 검사흐름도
시료 준비
(칭량 후 oven에서 녹이기)
↓
추출
◦ 추출 시 가볍게 흔든다.
↓
농축 및 희석
↓
표준품 희석
↓
HPLC 분석
↓
계산 및 결과판정
정밀검사발전연구회
235
V. 공 통 시험법
4
착색료(타르색소)
식품의 착색을 위해서 합성착색료가 널리 사용되고 있으며 그 중에서도
coal tar로부터 합성된 타르색소가 가장 많이 사용된다. 타르색소는 그 종류가
수천에 이르지만 발암성 및 유전독성 등 안전성에 문제가 있어 각 나라마다
비교적 독성이 적은 것만 식품에 사용하도록 규제하고 있으며 우리나라에서도
현재 9종(2007년 현재)만을 허용하고 있다.
허용타르색소 및 비허용타르색소
․ 산성색소 : 적색2호(R2), 적색3호(R3), 적색40호(R40), 황색4호(Y4), 황색5호
(Y5), 녹색3호(G3), 청색1호(B1), 청색2호(B2), 적색102호
․ 유용성색소 : 적색2호(R2), 적색40호(R40), 황색4호(Y4), 황색5호(Y5), 녹색3호
(G3), 청색1호(B1), 청색2호(B2)의 aluminium lake.
․ 비허용타르색소 : 적색1호, 4호, 101호, 103호, 104호, 105호, 106호. 황색1호,
녹색1호, 2호, 자색1호, 등색1호, OrangeⅡ, Martius Yellow,
Uranin, Brilliant Milling Green, Azure blue VX
236
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
4.1 여지 ․ 박층 크로마토그래피법
1. 분석원리
여지크로마토그래프를 이용하여 점적․전개시켜 축산물가공품 중 첨가되어
있는 타르색소를 분리한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
유가공품 : 조제분유, 버터
식육가공품(소시지, 식용우지, 식용돈지 제외)
2.2. 기준 : 불검출
3. 장치
3.1. 탈지양모 : 미리 지방추출장치로 지방을 제거한 후 사용한다
3.1.1. 탈지양모 제조법 1
․ 백색양모 100 g을
강암모니아수(28 %이상) 1~4 mL를 적당히 물로 희
석한 용액 중에 담근다.
․ 가끔 저으면서 45 ℃에서 30~60분간 방치한 다음 건져내어 가볍게 짜
고 다음에 희석한 암모니아수(1→100)에 잠시 방치한 후 건져낸다.
․ 처음에는 온탕, 다음에는 냉수로 씻고 가볍게 짜서 바람에 말린다.
3.1.2. 탈지양모 제조법 2
․ 속시레추출기에서 petroleum ether로 백색양모를 충분히 탈지한 후
ether를 실온에서 증발시켜 물로 충분히 씻고 가볍게 짜서 바람에
말린다.
3.2. Filter paper : Advantec 5A
3.3. TLC plate 또는 여지 크로마토그래피
3.4. Pasteur pipette : 끝을 열을 가해 구부려서 점적하는 도구로 사용한다.
3.5. 증발접시
3.6. Hot plate
3.7. TLC running tank(전개조)
3.8. 드라이기
정밀검사발전연구회
237
V. 공 통 시험법
3.9. UV 확인기
3.11. 원심분리기
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. Diethyl ether(Merck 1.00921)
4.1.2. Ethanol
4.1.3. Ammonium hydroxide
4.1.4. Acetic acid glacial
4.2. 시액
4.2.1. 80 % Ethanol : Etanol 400 mL을 500 mL volumetric flask 넣고 증류수로
채운다.
4.2.2. 70 % ethanol with 1 % ammonia solution
Ethanol 350 mL와 36 % ammonium hydroxide 5 mL를 500 mL vol. flask에
넣고, 증류수로 채운다.
4.2.3. 70 % ethanol with 1 % acetic acid solution
Ethanol 350 mL와 acetic acid 5 mL를 500 mL vol. flask에 넣고, 증류
수로 채운다.
4.2.4. 1 % acetic acid
Acetic acid glacial 1 mL를 100 mL vol.flask에 넣고 증류수로 채운다.
4.2.5. 6 % acetic acid
Acetic acid glacial 6 mL를 100 mL vol. flask에 넣고 증류수로 채운다.
4.2.6. 전개용매(여지크로마토그래피)
․ 아세톤 : 이소아밀알코올 : 물(6:5:5) (v/v)
․ n-부탄올 : 무수에탄올 : 1 % 암모니아수(6:2:3) (v/v)
․ 25 % 에탄올 용액 : 5 % 암모니아수(1:1) (v/v)
4.2.7. 전개용매(실리카겔 박층)
․ 초산에틸 : 메탄올 : 28 % 암모니아수(4.5:1:1 또는 3:1:1) (v/v)
․ 아밀알코올 : 에탄올 : 28 % 암모니아수(10:10:1) (v/v)
․ 메틸에틸케톤 : 에틸렌글리콜모노메틸에테르 : 에탄올: 28 % 암모니아
(20:15:12:1) (v/v)
238
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
4.2.8. 전개용매(폴리아미드 박층)
․ 메탄올: 에탄올 : 이소아밀알코올 : 28 % 암모니아수(15:10:5:3) (v/v)
․ 피리딘 : 메탄올 : 28 % 암모니아수 : 물(5:6:1:16) (v/v)
4.3. 표준물질
4.3.1. TCI F0119 A형 : 식품허용색소 12종(동경화성공업)
적색2호, 적색3호, 적색40호, 적색102호, 적색104호, 적색105호, 적색
106호, 황색4호, 황색5호, 녹색3호, 청색1호, 청색2호
4.3.2. TCI F0118 B형 : 식품비허용색소 15종(동경화성공업)
적색1호, 적색4호, 적색101호, 적색103호, 황색1호, 녹색1호, 녹색2호,
등색1호, 자색1호, OrangeⅡ, Martius Yellow, Uranin, Brilliant Milling
Green, Azure blue VX
4.3.3. 또한 개별색소 표준품을 0.1 %농도로 조제하여 사용할 수 있다.
(붙임1.참고)
5. 시험방법
5.1 산성색소
5.1.1 액상검사시료
․ 검사시료 20~200 mL를 취하여 적당히 물을 가하여 시험용액으로 한다.
․ 알코올을 함유한 것은 중화한 다음 수욕상에서 알코올을 증발시키고
물을 보충하여 색소추출액으로 한다.
5.1.2. 식육가공품(햄, 소시지 등)
․ 잘게 세절한 시료 약 20 g을 큰 여과지나 비이커에 넣고, ether로
몇 번 씻어 탈지하고 ether를 실온에서 날려 보낸다.
․ 검사시료에 3~5배 가량의 온탕을 가하여 잘 저은 다음 잠시 두었다가
여과하거나 원심분리하여(2,500 r/min, 5 min, 실온)고형물을 제거 하여
색소추출액으로 한다.
․ 이 방법으로 색소가 추출되지 않을 때에는 검사시료에 80 % ethanol을
4~5배 가량 가하여 가끔 흔들면서 2~3시간 방치하고 상층액을 취하여
ethanolic ammonia 용액으로 되풀이하여 추출한다.
․ 상층액은 앞의 상층액에 합치고 6 % acetic acid로 중화한 다음 끓여
ethanol을 증발시키고 물을 가하여 색소 추출액으로 한다.
․ 검사시료가 아직 현저하게 착색되어 있을 때에는 ethanolic ammonia 용
정밀검사발전연구회
239
V. 공 통 시험법
액으로 되풀이하여 추출하여 상층액을 취하여 10 % ammonium
hydroxide로 중화하고 끓여 ethanol을 증발시키고 증류수를 가하여 색
소추출액으로 한다.
․ 색소추출액 5 mL에 1 % acetic acid 1 mL를 가하고 탈지양모 0.1 g을
넣고 흔들어 섞은 다음 수욕중에서 30분간 가온한 다음 양모를 건져
내어 양모가 염색되지 않으면 불검출로 한다.
․ 양모가 염색되면 이 염색양모를 1 % ammonium hydroxide 5 mL 중에
넣고 30분간 가온한 다음 양모를 건져내고 6 % acetic acid로 중화 하
고 약 1 %의 농도로 조제(농축)하여 시험용액으로 한다.
․ 농축액과 표준색소액을 여지에 점적한다.(헤어드라이기로 말리면서 10
회 정도 반복한다.)
․ 전개용매에 세워서 전개시킨다.(15 cm)
5.2 유용성 색소
5.2.1 수분이 적은 검사시료 전처리
․ 검사시료(5~10 g)를 200 mL 공전플라스크에 취한다.
․ Petroleum ether 100 mL를 넣고 흔들면서 방치한 후 여과한다.
․ 여과액 30 mL을 분액깔대기에 넣고 동량의 N,N-dimethylformamide 넣어
추출 후 방치한다.
․ Petroleum ether 10 mL씩 3회 씻고 버린다.
․ 증류수 30 mL를 가하여 혼합하고 방치한다.
․ Chloroform 10 mL를 가하여 흔들어 잠시 방치 후 황색으로 착색
하
면 유용성 색소가 있는 것으로 보고 계속 실험을 하고 착색이 안 되
면 없는 것이므로 중단한다.
․ Chloroform을 물로 씻어 무수황산나트륨으로 탈수하고 농축한다.
․ 크로마토그래피용 여과지에 점적하고(중간에 말리면서) 전개한다.(15cm)
5.2.2 수분이 많은 검사시료 전처리
․ 검사시료 5～20g(착색의 정도에 따라 채취량을 증감한다)에 약 5배량
의 60v/v% 에탄올을 가하여 흔들어 섞으면서 30～60분간 방치하고 상징
액은 분액깔때기에 취한다.
․ 검사시료가 아직 착색이 되어 있을 때에는 점차적으로 에탄올의 농도
를 높여 상징액이 착색되지 않을 때까지 앞의 조작을 되풀이 한다.
․ 상징액은 앞의 상징액에 합치고 여기에 같은 양의 물 및 석유에테르
100㎖를 가하여 추출하고 잠시 방치한 다음 석유에테르층을 분취하여
시험용액으로 한다.
240
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
5.2.3 시험방법
(가) 용제에 의한 분리법
시험용액 30㎖를 분액깔때기에 취하고 같은 양의 N,N-디메틸포름아마이드를
가하여 추출한 다음 방치한다. 아래층의 N,N-디메틸포름아마이드용액
을 분취하여 석유에테르 10㎖씩으로 3회 씻고 석유에테르를 버린다.
다음 물 30㎖를 가하여 혼합하고 잠시 방치하여 식힌 다음 클로로포
름 10㎖를 가하여 흔들어 섞고 잠시 방치할 때, 클로르포름층이 황색
으로 착색하면 유용성 색소의 존재가 추정되므로 다음의 (나)여지크로마
토그래피에 의한 방법으로 시험한다.
(나) 여지크로마토그래피
(가)항에서 얻어진 클로로포름용액을 물로 씻은 다음 무수황산나트륨으로
탈수하고 저온에서 농축(약 0.1%의 농도)하여 시험용액으로 하고 크로마
토그래피용 여과지(5%유동파라핀․석유에테르 중에 30분간 담근 다음 바람
에 말린 것 400x60㎜)및 다음의 전개용매를 이용하여 이하 위의 가. 타르
색소 (다)시험방법 1)여지크로마토그래피에 따라 시험한다.
<전개용매>
1) 메탄올 : 초산 : 물(16 : 1 : 3)
2) 아세톤 : 물(7 : 3)
(다) 박층크로마토그래피
(나)항의 시험용액으로 박층크로마토그래피용 실리카겔(100℃에서 60분
간 가열하여 활성화시킨 것) 및 다음의 전개용매를 이용하여 가.타르
색소 (다)시험방법 (나)박층크로마토그래피에 따라 시험한다.
<전개용매>
1) 키실렌
2) 1,1,2-트리클로로에탄
3) n-헥산 : 클로로포름(6 : 4)
4) 초산이소아밀 : n-헥산(15 : 100)
6. 결과
전개가 끝나면 시험용액과 색소표준용액으로부터 전개된 반점의 위치와 색을
처음에 자연광, 다음에 자외선(약 365nm)조사하에서 비교 관찰한다.
정밀검사발전연구회
241
V. 공 통 시험법
7. 참고문헌
7.1. 축산물 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
7.2. 표준 식품분석학(2010), 지구문화사.
7.3. 식품 중 합성첨가물 사용실태 조사 연구. J.Fd Hyg. Safety 15(2),
108-113(2000).
242
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
붙임 1. 타르색소 표준품
색소명
소
Amaranth
적색 3호
Erythrosin B
Aldrich 19826-9, TCI F0118
적색 40호
Allura Red AC
Aldrich 45884-8, TCI F0118
Tartrazine(Acid Yellow 23)
Sigma A-1016, TCI F0118
Sigma T-0388, TCI F0118
황색 5호
Sunset Yellow FCF
녹색 3호
Fast green FCF(Food Green 3)
Sigma F-7252, TCI F0118
청색 1호
Brilliant Blue FCF
Sigma B-0770, TCI F0118
청색 2호
Indigocarmine(Acid blue 74)
Sigma I-8130, TCI F0118
적색 102호
비
Catalog no.
적색 2호
허 황색 4호
용
색
영문명
Aldrich 46522-4, TCI F0118
New Coccine
Aldrich 199737, TCI F0118
적색 1호
Poncear 3R
TCI F0119
적색 4호
Ponceau SX
TCI F0119
적색 101호
Ponceau R
TCI F0119
적색 103호
Eosin
TCI F0119
적색 104호
Phloxine B(Cyanosine)
Sigma P-2759
적색 105호
Rose Bengal(Acid Red 94)
Sigma R-3877
적색 106호
Acid Red
허 황색 1호
Naphthol Yellow S
Aldrich 199621, TCI F0119
용 녹색 1호
Guinea Green B
Aldrich 207721, TCI F0119
색 녹색 2호
소
Light Green SF Yellowish
Aldirch 861200, TCI F0119
등색 1호
Orange Ⅰ
TCI F0119
자색 1호
Acid Violet 6B
TCI F0119
Orange Ⅱ
Sigma O-8126, TCI F0119
Martius Yellow
Aldrich 287814, TCI F0119
Uranin
TCI F0119
Brilliant Milling Green
TCI F0119
Azure Blue VX
TCI F0119
정밀검사발전연구회
243
V. 공 통 시험법
붙임 2
244
여지, 박층 크로마토그래피 전개도
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
붙임 3. 검사흐름도
시료 채취
↓
색소추출
↓
탈지양모 염색
- 탈지양모가 염색이 안될시 불검출
- 탈지양모 염색시 색소 재추출
↓
여지 또는 박층에 색소 전개
↓
자연광 및 자외선 하에서 관찰
↓
결과판정
정밀검사발전연구회
245
V. 공 통 시험법
4.2 HPLC를 이용한 타르색소 시험법
1. 분석원리
액체크로마토그래프 다파장자외선검출기 (LC/UVD)를 이용하여 각 파장에서
타르색소를 분석하는 방법이다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
유가공품 : 조제분유, 버터
식육가공품(소시지, 식용우지, 식용돈지 제외)
2.2. 기준 : 불검출
3. 장치
3.1. 분쇄기 : Polytron, 시료 혼합이 가능한 것
3.2. Sonicator
3.3. 회전증발농축기
3.4. 원심분리기
3.5. HPLC : Agilent 1100
(DAD또는 MWD를 장착한 gradient모드가 가능한 장비)
3.6. Balance : 분석저울 0.1 mg까지, 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. Tetrabutylammoniumhydrogensulfate(TBA-Br)(Sigma T-7158)
4.1.2. Methanol(HPLC grade)
4.1.3. Acetonitrile(HPLC grade)
4.1.4. Ammonium acetate
4.1.5. Absolute ethanol
4.1.6. Ammonium hydroxide
4.1.7. 3차 증류수
246
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
4.2. 시액
4.2.1. 80 % Ethanol : Etanol 400 mL를 500 mL vol. flask 넣고 증류수로 채운다.
4.2.2. 70 % ethanol with 1 % ammonia solution
Ethanol 350 mL와 36 % ammonium hydroxide 5 mL을 500 mL vol. flask에
넣고, 증류수로 채운다.
4.2.3. Mobile phase A
증류수 : acetonitrile : methanol = 85:10:5(v/v/v)
(with 10 mM TBA-Br & 25 mM ammonium acetate)
TBA-Br 3.395 g 및 ammonium acetate 1.927 g을 정밀히 달아
증류
수 850 mL, acetonitrile 100 mL, methanol 50 mL에 녹인 후 0.2 μm
nylon filter로 여과하여 사용.
4.2.4. Mobile phase B
증류수 : acetonitrile : methanol = 30:60:10(v/v/v)
(with 10 mM TBA-Br & 25 mM ammonium acetate)
TBA-Br 3.395 g 및 ammonium acetate 1.927 g을 정밀히 달아 증류수
300 mL, acetonitrile 600 mL, methanol 100 mL에 녹인 후 0.2 μm
nylon filter로 여과하여 사용.
4.3. 표준물질
표준물질은 순도 98 % 이상의 표준물질이나 일정농도로 만들어진 표준용액을
구입하여 사용할 수 있다.(4.1. 여지․박층 크로마토그래피법의 붙임1. 참고)
4.4. 표준용액 제조
4.4.1. Stock standard solution
14종 색소의 혼합표준용액(12 μg/mL, 식용색소청색2호는 20 μg/mL)을
준비 색소의 종류는 필요에 따라 조절할 수 있다.
4.4.2. Working standard solution
각 표준 물질의 농도가 0, 0.1, 0.5, 1.0, 2.0 μg/mL이 되도록 증류수로 희
석한다.
정밀검사발전연구회
247
V. 공 통 시험법
5. 시험방법
5.1. 시료전처리
5.1.1. 시료를 세절하여 약 5 g을 50 mL centrifuge tube에 넣는다.
5.1.2. 시료에 3차 증류수를 25 mL이 되도록 채워서 흔든 후 10분간
sonication후, 4 ℃, 2,500 r/min에서 5분간 원심 분리하여 상층액만을
125 mL 둥근바닥 플라스크에 옮긴다.
5.1.3. 시료의 잔사가 착색되어 있는 경우에는 다시 80 % ethanol sol.을 25
mL가 되도록 채워서 위의 과정을 반복하여 위의 둥근 바닥 플라스크
에 합친다.
5.1.4. 시료의 잔사가 착색되어 있는 경우에는 다시 70 % ethanol with 1 %
ammonia sol.으로 위의 과정을 반복한다.
5.1.5. 혼합액에 흰색 침전물이 나타나면, 이를 다시 원심 분리하여 상층액을
다른 둥근바닥 플라스크에 옮긴다.
5.1.6. 위의 용액이 약 30 mL정도가 될 때까지 회전증발농축기로 건조시킨다.
5.1.7. 농축액을 50 mL vol. flask에 옮기고, 증류수로 채운다.
5.1.8. 이 용액을 0.45 μm 지용성필터로 여과하여 HPLC에 20 μL씩 주입한다.
6. 기기분석조건
6.1. Column : Eclipse XDB-C18 3.5 μm (4.6×250 mm)
6.2. Detector : PDA(240-650 nm, 검출파장 : 420, 520, 620 nm)
6.3. Flow rate : 1 mL/min
6.4. Injection volume : 20 μL
6.5. Mobile phase(gradiant mode)
Time(min)
Solvent A( %)
Solvent B( %)
0
85
15
30
0
100
35
0
100
20분간 초기조건으로 post run할 것
248
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
6.6. 각 색소의 정량파장
정량파장
색소명
420 nm 식용색소 황색4호, 황색5호, 오렌지 П
식용색소 적색1호, 적색2호, 적색3호, 적색40호,
적색44호, 적색94호, crocein scarlet 7B
520 nm
620 nm 식용색소 청색 1호, 청색2호, 녹색3호, patent blue
7. 결과
7.1. 검량선 작성
표준용액 및 시험용액을 각각 주입하여 얻은 피크의 머무름 시간이 일치
하는 지를 확인 한 후 표준용액 chromatogram 상의 피크의 높이 또는
면적를 구하여 검량선을 작성한 후 시험용액의 각 색소의 농도를 구한다.
7.2. 계산
색소의 양(μg/g) = S ×
a(=75) × b(=1)
검사시료채취량(=5)
S : 시험 용액중의 각 색소의 농도(μg/mL)
a : 시험용액의 전량(mL)
b : 시험용액의 희석배수
7.3. 확인검사(부적합 시)
부적합이 의심될 경우 축산물의 가공기준 및 성분규격상의 착색료
시험법에 따른다.
8. 참고문헌
8.1. 국립수의과학검역원 연구보고서(2002).
정밀검사발전연구회
249
V. 공 통 시험법
붙임 1. Standard chromatogram
40
20
13.733
10
9.967
7.829
mAU
8.533 - red 40
0
5
DAD1 D, Sig=520,16 Ref=off (061117T\SIG10004.D)
15
min
15
min
15
min
13.733 - red 3
0
11.359
20
9.965
40
8.533
mAU
7.829 - yellow 5
6.997
7.247 - yellow 4
DAD1 B, Sig=420,16 Ref=off (061117T\SIG10004.D)
0
20
10.612
40
10
9.965 - green 3
mAU
9.189
7.907 - blue 2
0
5
DAD1 E, Sig=620,16 Ref=off (061117T\SIG10004.D)
0
0
250
5
10
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
붙임 2. 검사흐름도
시료 채취
↓
시료 중 색소추출 및 농축
↓
표준용액 제조
↓
HPLC 분석
↓
계산 및 결과판정
정밀검사발전연구회
251
V. 공 통 시험법
5
유해성 금속(납, 주석)
중금속이란 비중이 약 4 이상인 무거운 금속원소로서, 그 종류에는 비소,
안티몬, 납, 수은, 카드뮴, 크롬, 주석, 아연, 바륨, 비스무트, 니켈, 코발트, 망간,
바나듐, 셀렌 등 주기율표상의 아래쪽에 주로 위치하고 있는 금속원소를 말한다.
주석
주석은 지각의 화성암에 약 0.001％ 정도로 존재하며, 천연 금속 입자로도
산출되지만 주로 광물인 석석에서 산화물로 산출된다(→석석). 주석은
반사로(反射爐)에서 석석을 석탄으로 환원(산소 제거)시켜 얻는다. 주석의 값이
비교적 비싼데도 불구하고 경제성은 없다. 주석은 독성이 없고 연성과 전성이
있으며, 압연(壓延)· 회전성형(回轉成形) ·압출성형 (壓出成形) 과 같은 모든
종류의 냉각가공에 쓰인다. 순수한 주석의 색은 공기 중에서도 유지되는데, 그
이유는 공기 중의 산소와 자발적으로 반응하여 보이지 않는 얇은 산화주석(Ⅳ)
보호막이 생기기 때문이다. 주석은 녹는점이 낮고 철·강철·구리·구리합금의
깨끗한 표면에 단단하게 결합될 수 있어 산화방지용 피복제로 쓰인다. 주석에는
2개의 다른 형태, 즉 동소체(同素體)가 존재하는데 잘 알려진 흰색 (또는
베
타) 주석과 분말이며 거의 사용되지 않는 회색(또는 알파) 주석이 있다. 회
주석은 13.2˚C 이상에서 흰색으로 변하며 100˚C 이상의 온도에서는 더욱
색
빠르게 변한다. 주석 페스트(tin pest)라고 하는 역변환은 낮은 온도에서 일어나
지만, 상업용 주석에 일반적으로 포함된 소량의 안티몬·비스무트·구리· 납 등에
의해 방지된다.
납
납(lead)은 화학 기호는 Pb(←라틴어:plumbum)이고 원자 번호는 82이다. 무르고, 무
겁고, 가단성의 독성이 있는 전이 금속으로, 자르고 난 단면은 푸르스름한 빛을
띄나, 공기 중에서 변색되어 흐릿한 회색이 된다. 납은 건축, 납축전지, 총알 등에
사용되며, 땜납, 백랍 등의 가융 합금에 들어간다. 납은 안정 원소 중에 가장
원자 번호가 큰 원소이다.
252
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
1. 분석원리
유도결합 플라즈마 분광광도기(Inductively Coupled Plasma-Atomic Emission
Spectrometer, ICP-AES)는 들뜸 전원에서 유도 코일에 고주파 전력을 공급하여 토오
치에 플라즈마를 형성하고 분무기를 통해 주입된 시료를 플라즈마에서 측정대상
원소의 원자나 이온을 들뜨게 하여 여기 상태를 만든 다음 바닥상태로 돌아갈
때 방출되는 복사선을 분광기로 선택하여 증폭시켜 정성․정량한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
통조림(납, 주석), 피단(납)
2.2. 기준 :
통조림 축산물 : 주석 150(mg/kg)이하, 납 0.3(mg/kg)이하
알가공품(피단) : 납 0.5(mg/kg)이하
3. 장치
3.2. Filter paper : Advantec 5A
3.3. Water bath : 95 ℃ 이상 온도설정이 가능한 것
3.4. ICP-AES : JY
3.5. Balance : 분석저울 0.1 mg까지, 일반저울 10 mg까지 측정할 수 있는 것
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. 중금속 분석용 HNO3
4.1.2. 3차 증류수
4.2. 시액
4.2.1 2 % HNO3 : 1L volumetric flask에 원액 HNO3를 33 mL 넣어 3차
증류수로 1L로 채운다.
4.3. 표준물질
4.3.1. 1,000 μg/mL 주석 (Spex PL Pb 2-2y)
4.3.2. 1,000 μg/mL 납 (Spex PL Sn 2-3y)
정밀검사발전연구회
253
V. 공 통 시험법
4.4. 표준용액
4.4.1. Stock standard solution(100 μg/mL)
표준품을 2 % HNO3로 희석하여 100 μg/mL(v/v) 의 농도로 맞춘다.
4.4.2. Working standard solution
Stock sol.(100 μg/mL)을 2 % HNO3로 희석하여 주석은 0.2, 0.5, 1.0 μ
g/mL이 되게 하고 납은 0.05, 0.10, 0.2 μg/mL이 되게 희석한다.
5. 시험방법
5.1. 시료전처리
5.1.1 시료 각 1.0 g씩 칭량하여 50 mL Centrifuge tube에 담고 중량을 기록
해 둔다. 또한 blank 시료와 spiking 시료를 준비한다.
5.1.2. 시료 분해를 위해 질산원액 5 mL를 첨가한다. 이때 blank 시료와
spiking 시료에도 질산원액 5 mL를 첨가한다.
5.1.3. 95 ℃ water bath에서 90분간 산 분해 시킨다.
5.1.4. 뚜껑을 연 후 후드 안에서 약 30분간 식힌다.
5.1.5. 5A여지로 여과하여 새로운 centrifuge tube에 옮긴다.
5.1.6. 여액을 3차 증류수로 20 mL 눈금까지 맞추어 희석하여 시험용액으로 한다.
5.2. 공시험
시료 대신 증류수 1 mL를 centrifuge tube에 넣고 시료와 동일하게 처리한다.
5.3. 회수율 시험
5.3.1. 주석 표준용액 10 μg/mL, 1 mL, 납 표준용액 10 μg/mL, 0.2 mL를
centrifuge tube에 넣고, 시료와 동일하게 처리한다.
6. 기기분석조건
6.1. Detector : Pb 220.353 nm, Sn 189.989 nm
6.2. ICP 작동순서(JY Ultima에 해당)
6.2.1. Hood, Gas, 냉각수 ON → 장비전원 ON → Peristaltic pump line을 걸어준다.
6.2.2. Computer ON
6.2.3. 분석 프로그램 󰎠
6.2.4. Automatism : control 하에서 plasma gas, auxiliary gas, gainage조절 →
plasma ON → ready 상태
6.2.5. User identification : name(3). code(3) 󰎠
254
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
6.2.6. Communication detail 󰎠 - initialization(Zero drder) 󰎠 하여 조정
6.2.7. Analytical method 󰎠 - 기존의 method 선택 또는 새로운 method 작성
6.2.8. Tasks & Sequence 󰎠 - peak search → auto-attenuate → profile
→ calibration → analysis 순으로 sequence 작성 후 run(▶)󰎠
6.2.9. Results 󰎠 - 원하는 file 선택한 후 report form 작성하여 print
7. 결과
7.1. 검량선 작성
피크의 넓이를 구하여 검량선을 작성하여 시험용액을 각 농도(μg/mL)를 구
하고, 다음 식에 대입하여 검사시료 중의 중금속의 량을 구한다.
(프로그램 상에서 자동으로 작성됨)
.
7.2. 계산
최종농도(mg/kg) =
시료 중 검량선에서 얻은 잔류 농도(μg/mL)×희석배수
시료량(g)
1
×
100
(기계 프로그램상에서 blank에 해당하는 시료와 최종 volume을 설정하면 자
동적으로 계산됨)
8. 참고문헌
8.1.축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
정밀검사발전연구회
255
V. 공 통 시험법
붙임 1. Standard
256
chromatogram
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
붙임 2. 검사흐름도
시료 채취
↓
산분해
↓
실온에서 20분간 방치
↓
표준용액 분석(ICP)
↓
공시험용액, 시료용액, 회수율시험용액
분석(ICP)
↓
계산 및 결과판정
정밀검사발전연구회
257
V. 공 통 시험법
6
이물
이물은 식품의 생산, 저장, 유통 및 보관 등의 과정에서 혼입될 수 있으며
오물, 기생충 등의 원인으로 인한 부패한 조직, 모래나 흙, 유리, 녹, 금속 등과
같은 기타 여러 외부물질 등 다양한 종류의 이물이 존재할 수 있다. 단, 세균은
이에 포함되지 않는다.
축산물의 가공기준 및 성분규격의 이물에 대한 공통기준 및 규격
이물의 정의
“이물”이라 함은 정상축산물의 성분이 아닌 물질을 말하며 동물성으로 절족
동물 및 그 알, 유충과 배설물, 설치류 및 곤충의 기식 흔적물, 동물의 털,
배
설물, 기생충 및 그 알 등이 있고, 식물성으로 종류가 다른 식물 및 그 종자,
곰팡이, 짚, 겨 등이 있으며, 광물성으로 토사, 유리, 금속, 도자기파편 등이
있다.
이물의 일반규격
1. 축산물은 원료의 처리과정에서 그 이상 제거되지 아니하는 정도 이상의
이물과 오염된 비위생적인 이물과 인체에 위해를 끼치는 단단하거나 날카로운
이물을 함유해서는 아니된다. 다만, 고배율 현미경으로 존재가 확인되는 미세한
것과 다른 식물이나 원료식물의 표피 또는 토사 등과 같이 실제에 있어 정상적인
처리․가공상 완전히 제거되지 아니하고 잔존하는 경우의 이물로서 그 양이 적고
일반적으로 인체의 건강을 해할 우려가 없는 정도는 제외한다.
2. 금속이물은 2 mm 그리고 비금속 이물은 3 mm를 초과하여서는 아니되며,
2~3mm이하의 미세입자인 경우에도 영․유아에게 유해할 가능성이 있다고 판단
되는 경우에는 축산물위생심의위원회의 심의를 통하여 적부를 결정할 수 있다.
축산물기준 및 규격 외의 축산물 규격
이물 : 적합하여야 한다.
258
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
1. 분석원리
공통적인 이물 검사를 위한 체분별법, 여과법, 와일드만 플라스크법이 있고,
품목에 따른 개별 이물 검사법이 있다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상 : 축산물가공품
2.2. 기준 : 적합하여야 한다.
3. 장치
3.1. 체 : 500 μm
3.2. 와일드만 플라스크
3.3. 교반봉
3.4. 여과지 : Milk Sediment Disk
3.5. 전등
3.6. 비이커 : 1 L용
3.7. 모세관 피펫
3.8. Buchner 깔대기
3.9. 확대경
3.10. 금속탐지기
3.11. 진공 펌프
3.12. 원심분리기
3.13. 실체현미경 :
Olympus, SZX-16
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. Ethanol
4.1.2. Chloroform
4.1.3. 휘발유
4.2. 시액
4.2.1. Glycerin : Alcohol(1:1)
4.2.2. 포화 NaCl
4.2.3. 1 % 염산, 2 % 염산
정밀검사발전연구회
259
V. 공 통 시험법
4.2.4. 2 % EDTA solution
EDTA 20 g을 증류수 980 mL에 넣고 40 ℃ water bath에 넣어 잘 용해
시킨 후 사용한다.
4.2.5. 4 % EDTA solution
EDTA 40 g을 증류수 980 mL에 넣고 40 ℃ water bath에 넣어 잘 용해
시킨 후 사용한다.
4.2.6. 판크레아틴 용액(사용 직전에 제조)
판크레아틴 5 g에 물 50 mL를 가하여 5~15분간 섞은 후 가볍게 물로 적신
탈지면으로 여과하여 여액을 쓴다.
5. 시험방법
5.1. 체분별법
5.1.1. 시료가 미세한 분말일 때 비교적 큰 이물을 검사할 수 있다
5.1.2. 시료를 체로 포집, 육안검사하고 필요시 현미경으로 약 40배 저배율로
관찰한다.
5.2. 여과법
5.2.1. 시료가 액체 또는 용액일 때 용액을 신속여과지로 여과하여 여과지상의
이물을 검사한다.
5.3. 와일드만 플라스크법
5.3.1. 곤충 및 동물의 털과 같이 물에 잘 젖지 않느 가벼운 이물일 때 사용
한다.
5.3.2. 가벼운 이물은 물과 혼합되지 않는 유기 용매에 섞음으로서 유기 용매
층에 떠오르게 하여 취할 수 있다.
5.3.3. 와일드만 플라스크에 시료, 물 및 물과 혼합되지 않은 포집용매(휘발유
<무색, 투명, 납 비 함유>, 피마자유)를 넣고 45도 기울여 교반봉으로
200-250회/1분 동안 저어 섞는다. (기포 유입 조심)
5.3.4. 자주 섞어 방치하는 방식으로 물과 포집용매의 경계가 플라스크의 목
까지 차도록 물과 포집용매를 넣고 마구 휘젓는다.
5.3.5. 플라스크 벽 및 교반봉에 묻은 시료와 기름방울 등을 털어내고 교반봉을
끌어올려 플라스크 목에 밀착해서 이물을 포함하는 용매층을 소량의
하층액과 함께 비이커에 취한다.
5.3.6. 알코올 및 물로 교반봉, 플라스크 내벽을 씻어 비이커에 합쳐 흡인여과
하여 이물을 관찰한다.
260
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
5.3.7. 현미경으로 관찰시 글리세린․알코올혼액(1:1) 5 mL를 넣은 페트리 접시에
여과지를 적신 후 관찰한다.
5.3.8. 다시 와일드만 플라스크에 포집액 10~20 mL를 넣어 잘 섞고 10~20분간
방치한 다음 위와 같이 조작하여 이물을 검사한다.
5.3.9. 기울여 따라 포집한 액이 다량의 식품조직을 함유하거나, 여과지에 식물
조직이 다량 부착되어 현미경 검사가 어려울 때는 다시 새로운 와일드만
플라스크에 옮겨 물로 잘 혼합시켜 위와 같이 포집한다.
5.3.10. 식물조직을 하층액에 옮겨 포집액을 버린다.
주의) 이 때 이물의 손실을 막기 위해 처음의 포집조작에서 가급적 검사
시료가 떠오르지 않게 하는 것이 중요하며, 하층액으로 포화식염수 또
는 수성알코올을 사용하면 식물 조직의 떠오름을 어느 정도 방지할 수
있다.
5.4. 침강법
5.4.1. 쥐똥, 토사 등의 비교적 무거운 이물일 때 검사할 수 있다.
5.4.2. 시료에 chloroform (또는 carbon tetrachloride, ether 또는
methanol을 가해 비중을 1.49로 한 것)을 가해 섞어 이물을 용기 밑에
가라앉게 한다.
5.4.3. 상층액을 버리고 흡인 여과하여 관찰하고, 여과지상에 이물이 있는 가를
관찰한다. 필요시 5.3.7.의 방법대로 현미경으로 관찰한다.
6. 시험방법
6.1. 우유, 살균산양유, 탈지유, 가공유, 발효유 등
6.1.1. 검병법
․ 검사시료가 투명할 때 광원(태양광선, 전등)에 백색 또는 흑색지를
배
경으로 병을 거꾸로 해서 투시한다.
․ 잔사가 있으면 액체를 살살 기울여 버리고 잔사를 흡인여과하거나
원심침전 하여 여과지상의 잔류물 또는 원심 침전한 경우는 병 밑의
침전물을 모세관 피펫으로 빨아올려 이물의 종류를 관찰한다.
6.1.2. 희석법
시료에 침전물이 있거나 혼탁된 것은 시료를 대형 비이커에 옮겨 물로
희석해서 조용히 저으면서 광원을 비쳐 이물의 유무를 검사하고 분리
법으로 관찰한다.
정밀검사발전연구회
261
V. 공 통 시험법
6.1.3. 분리법
□ Chloroform에 의한 분리 (주로 광물성 이물)
병속에
시료전부를
원심침전,
상층액
버리고
침전을
건조시켜
chloroform으로 여러 번 세척하여 Buchner깔대기 혹은 힐슈깔대기로
흡인여과하고 여과지상의 이물을 관찰한다.
□ 염산분해에 의한 분리 (주로동․식물성 이물)
검사시료 전부를 원심 분리하여 상층액을 버리고 침전물을 삼각플라
스크에 옮겨 1 % hydrochloric acid 200~300 mL를 충분히 넣고 끓인
다.(약 1시간)
□ Buchner깔대기 혹은 힐슈깔대기로 흡인 여과한 여과지상의 이물을
관찰한다.
6.2. 버터 등
6.2.1. 시료 100 g에 2 % hydrochloric acid 200 mL를 가하여 완전히 녹여 여과
지로 여과하여 이물을 관찰한다.
6.2.2. 지방이 응고되어 잘 여과되지 않을 때는 열탕으로 완전히 녹여 여과
하여 여과지에 부착된 이물을 관찰한다.
6.3. 아이스크림분말, 무당연유, 가당연유, 가당탈지연유, 전지분유, 탈지분유,
가당분유 및 조제분유
6.3.1. 검사시료 100 g을 1 L 비이커에 넣고 2 % EDTA (Etheylene - diamine
- tetraacetic acid)용액 100 mL를 가하여 잘 섞어서 덩어리가 없도록
한 후, 저으면서 2 % EDTA용액 400 mL를 천천히 가한다.
6.3.2. 섞는 동안에 차차 황색의 반투명한 액체가 되며 약 30분간 방치하면
완전히 녹는다.
6.3.3. 이를 Buchner 깔때기 또는 힐슈 깔때기로 흡인 여과하여 여과지상의
이물을 육안이나 확대경을 사용하여 확인한다. 실체현미경 (300-500×)
배율로 형태를 확인할 수 있다.
6.4. 식육가공품(납탄검사)
6.4.1. 시료 50 g을 7 mm로 잘라 와일드만 플라스크에 넣는다.
6.4.2. 1 % hydrochloric acid 300 mL로 끓이고 다시 sodium hydroxide sol.으로
pH 6으로 맞추고 다시 tribasic sodium phosphate용액으로 pH 7~8로 맞
춘다.
6.4.3. 온도를 40 ℃로 하고 판크레아틴용액 50 mL을 가한 후 충분히 섞는다.
262
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
6.4.4. 40 ℃에서 30분간 방치한다.
6.4.5. pH 7~8로 맞춰 하룻밤 40 ℃ 항온기에 넣어 소화시킨다.
6.4.6. 소화 후 일단 끓이고 식혀서 휘발유 25 mL를 넣고, 위의 5.3의 와일드
만 플라스크법으로 시험하고 침전물이 있으면 수분을 제거한 후 5.4의 침
강법에 따라 시험한다.
6.4.7. 원료육 및 포장육의 경우, 전량을 금속 탐지기로 검사 한다.
6.5. 아이스크림류
6.5.1. 검사시료 50 g에 물을 가하여 100 mL로 한다
6.5.2. 이에 4 % EDTA용액을 가한다.
6.5.3. 이하 6.3의 아이스크림분말 시험법을 따른다.
6.6. 통조림
6.6.1. 시료 350 g을 비이커에 옮기고 관 내면을 물로 잘 씻고, (내용물이 부서지
지 않게 함) 그 액을 흡인 여과하여 여과지상의 이물을 검사한다.
6.6.2. 만약 작은 조직이 많을 때는 씻은 액을 와일드만 플라스크에 옮겨
휘발유를 가해 6.3.의 와일드만 플라스크법으로 시험하고 무거운 이물은
6.4.의 침강법에 따라 시험한다.
6.7. 조제분유의 이물검사법
Ⅰ-1. 유가공품 검사법
11. 조제분유 중 이물 및 탄화물 검사법 참고
7. 참고문헌
7.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
7.2. Food analysis. 2nd edition. S.Suzanne Nielsen.
정밀검사발전연구회
263
V. 공 통 시험법
7
성상
1. 분석원리
관능시험방법으로 축산물고유의 색깔, 풍미, 조직감 및 외관을 성상 채점
기준에 따라 채점한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
2.1.1. 유가공품 : 우유류, 저지방우유류, 유당분해우유, 가공유류, 산양유,
발효유류, 버터유류, 농축유류, 유크림류, 버터류, 치즈류,
분유류, 유청류, 유당, 유단백가수분해식품, 조제유류,
아이스크림류, 아이스크림분말유, 아이스크림믹스류 등의 제품
2.1.2. 식육가공품 및 포장육 : 햄류, 소시지류, 베이컨류, 건조저장육류, 양념육류,
분쇄가공육제품, 갈비가공품, 식육추출가공품,
식용우지, 식용돈지
2.1.3. 알가공품 : 난황액, 난백액, 전란분, 전란액, 난황분, 난백분,
알가열성형제품, 염지란, 피단
2.2. 기준
2.2.1. 우유류, 저지방우유류
유백색~황색의 액체로서 이미, 이취가 없어야 한다.
2.2.2. 유당분해우유, 산양, 농축우유, 탈지농축우유
유백색~황색의 균질한 액체로서 이미, 이취가 없어야 한다.
2.2.3. 가공유류, 발효유류(발효유분말 제외), 버터오일
고유의 색택과 향미를 가진 액상으로서 이미, 이취가 없어야 한다.
2.2.4. 발효유분말, 버터유류, 가공유크림, 버터류(버터오일제외), 자연치즈,
가공치즈, 혼합분유, 유단백가수분해식품, 조제유류
고유의 색택과 향미를 가지고 이미, 이취가 없어야 한다.
2.2.5. 가당연유, 가당탈지연유
유백색~황색으로 균질하고 감미가 있는 액체로서 이미, 이취가 없어야 한다.
264
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
2.2.6. 가공연유
고유의 색택을 가지고 균질하고 감미가 있는 액체로서 이미, 이취가
없어야 한다.
2.2.7. 유크림
유백색~황색의 균질한 유동성 액체 또는 반고형체로서 이미, 이취가
없어야 한다.
2.2.8. 분말유크림, 유청단백분말, 유청분말, 유당
고유의 색택과 향미를 가진 분말로서 이미, 이취가 없어야 한다.
2.2.9. 분유류(혼합분유 제외)
담황색의 고운 분말로서 이미, 이취가 없어야 한다.
2.2.10. 유청, 농축유청
고유의 색택과 향미를 가진 액체로서 이미, 이취가 없어야 한다.
2.2.11. 아이스크림류, 아이스크림분말류, 아이스크림믹스류
고유의 향미를 가지고 이미, 이취가 없어야 한다.,
2.2.12. 식육가공품 및 포장육(식육추출가공품, 식용우지, 식용돈지 제외)
고유의 색택을 가지고 이미, 이취가 없어야 한다.
2.2.13. 식육추출가공품, 식용우지, 식용돈지, 알가공품
고유의 색택과 향미를 가지고 이미, 이취가 없어야 한다.
2.2.14. 병, 통조림 축산물
관 또는 병 뚜껑이 팽창 또는 변형되었거나 녹이 슬어서는 아니되며,
내용물은 고유의 색택을 가지고 이미, 이취가 없어야 한다.
2.2.15. 레토르트 축산물
외형이 팽창, 변형되었거나 이물이 부착되어 있어서는 아니되며, 내용
물은 고유의 향미, 색택, 물성을 가지고 이미, 이취가 없어야 한다.
3. 시험방법
시료의 색깔, 풍미, 조직감, 외관을 관찰하여 성상 채점기준에 따라 채점한다.
4. 결과
4.1. 색깔
- 색깔이 양호한 것은 5점으로 한다.
- 색깔이 대체로 양호한 것은 그 정도에 따라 4점 또는 3점으로 한다.
- 색깔이 나쁜 것은 2점으로 한다.
- 색깔이 현저히 나쁜 것은 1점으로 한다.
정밀검사발전연구회
265
V. 공 통 시험법
4.2. 풍미
- 풍미가 양호한 것은 5점으로 한다.
- 풍미가 대체로 양호한 것은 그 정도에 따라 4점 또는 3점으로 한다.
- 풍미가 나쁜 것은 2점으로 한다.
- 풍미가 현저히 나쁘거나 이미, 이취가 있는 것은 1점으로 한다.
4.3. 조직감
- 조직감이 양호한 것은 5점으로 한다.
- 조직감이 대체로 양호한 것은 그 정도에 따라 4점 또는 3점으로 한다.
- 조직감이 나쁜 것은 2점으로 한다.
- 조직감이 현저히 나쁜 것은 1점으로 한다.
4.4. 외관
- 병충해를 입은 흔적 및 불가식부분 제거, 제품의 균질 및 성형상태와
포장상태 등 외형이 양호한 것은 5점으로 한다.
- 제품의 가공상태 및 외형이 비교적 양호한 것은 그 정도에 따라 4점
또는 3점으로 한다.
- 제품의 가공상태 및 외형이 나쁜 것은 2점으로 한다.
- 제품의 가공상태 및 외형이 현저히 나쁜 것은 1점으로 한다.
4.5. 최종판정
성상 채점기준에 따라 채점한 결과가 평균 3점 이상이고 1점 항목이 없으면
적합으로 판정한다.
5. 참고문헌
5.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
266
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
붙임 1. 성상 시험 결과서
성상 시험(관능)시험 결과서
축산물가공품 고유의 색깔, 풍미, 조직감 및 외관을 다음의 성상 채점 기준에
따라 채점한 결과가 3점 이상이고 1점 항목이 없어야 한다.
의뢰번호 :
항 목
검사일자 :
채 점 기 준
평 점
1. 색깔이 양호한 것은 5점으로 한다.
색
깔
2. 색깔이 대체로 양호한 것은 그 정도에 따라
4점 또는 3점으로 한다.
3. 색깔이 나쁜 것은 2점으로 한다.
4. 색깔이 현저히 나쁜 것은 1점으로 한다.
1. 풍미가 양호한 것은 5점으로 한다.
풍
2. 풍미가 대체로 양호한 것은 그 정도에 따라
4점 또는 3점으로 한다.
미
3. 풍미가 나쁜 것은 2점으로 한다.
4. 풍미가 현저히 나쁜 것은 1점으로 한다.
1. 조직감이 양호한 것은 5점으로 한다.
직
2. 조직감이 대체로 양호한 것은 그 정도에 따라
4점 또는 3점으로 한다.
감
3. 조직감이 나쁜 것은 2점으로 한다.
조
4. 조직감이 현저히 나쁜 것은 1점으로 한다.
외
1. 병충해를 입은 흔적 및 불가식 부분 제거, 제품의 균질 및
성형상태와 포장상태 등 외형이 양호한 것은 5점으로 한다.
2. 제품의 가공상태 및 외형이 비교적 양호한 것은
그 정도에 따라 4점 또는 3점으로 한다.
관
3. 제품의 가공상태 및 외형이 나쁜 것은 2점으로 한다.
4. 제품의 가공상태 및 외형이 현저히 나쁜 것은
1점으로 한다.
검사결과
평균
검사자
정밀검사발전연구회
(서명)
267
V. 공 통 시험법
8
진공도
1. 분석원리
진공계를 이용하여 병조림식품이나 통조림식품의 진공도를 측정한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
병․통조림 축산물 (알루미늄 재질로 원터치 캔의 경우는 제외한다)
2.2. 기준 : 적당한 진공도(cmHg)를 가져야 한다.
3. 장치
진공계
4. 시험방법
4.1. 3개 이상의 시료를 실험한다.
4.2. 오른손의 엄지와 인지 사이에 진공계를 잡고 진공계의 침(고무가 부착된
부분)을 관 뚜껑 역륜 (Expansion Ring)의 볼록한 부분에 밀착 삽입시켜 진
공도를 측정한다.
4.3. 진공계의 끝이 관 뚜껑에 밀착하도록 주의하고 측정시의 통조림의 온도는
15 ℃에서 한다.
4.4. 타원형 혹은 사각형의 통조림에 있어서는 관 내용물이 진공계의 침공을
폐쇄시킬 수 있으므로 이 때는 관을 세워 그 타원의 한쪽을 위로해서 그
중심부에 진공계의 침을 밀착 삽입시켜서 진공도를 측정한다.
5. 참고문헌
5.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2010-2호).
268
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
9
산가
1. 분석원리
산가란 유지 1 g 중에 함유되어 있는 유리지방산을 중화하는데 필요한 KOH
의 mg 수이다. 즉 산가는 지방산이 glyceride로서 결합형태로 있지 않은 유리지
방산의 양을 측정하는 것이다. 산가는 유지의 보존, 가열 등에 의하여 변하며,
유지 및 유지를 함유한 식품의 품질판정에 필요한 요소로 특히, 유지의 산패
정도를 나타내는 기준이 되는 값이다. 유지가 산패 또는 가열․분해 중에 식용유지의
향미에 직접 영향을 미쳐 자동산화 촉진, 발연점 저하 등 부수적인 품질변화
요인인 유리지방산 함량 증가를 산가의 측정을 통해 확인할 수 있다. 시험의
원리는 유기용매에 용해된 시료에 지시약인 페놀프탈레인을 이용하여 KOH와
반응하여 변색 종말점을 확인하는 적정법이 전형적인 시험법으로 활용되고 있다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
버터류, 식용돈지, 식용우지
2.2. 기준
2.2.1. 버터류 : 2.8 이하
2.2.2. 식용우지 : 0.3 이하 (원료우지일 경우 4.0 이하)
2.2.3. 식용돈지 : 0.3 이하 (원료돈지일 경우 4.0 이하)
3. 초자 및 기구
3.1. 250 ml 삼각플라스크
3.2. 자동뷰렛 또는 이와 동등한 것
4. 시약 및 시액
4.1. EtOH : Diethyl ether (1:2, v/v)
4.2. phenolphthalein 1 %
4.3. 0.1 N KOH/EtOH 용액
정밀검사발전연구회
269
V. 공 통 시험법
5. 시험방법
5.1. 검체 5~10 g을 준비한다. (버터의 경우 45 ℃의 온수에서 녹여 상층을 취함)
5.2. EtOH : Diethyl ether (1:2, v/v) 100 mL를 첨가하여 시료를 완전히 용해
한다.
5.3. phenolphthalein 1 mL를 첨가한다.
5.4. 0.1 N KOH / EtOH 용액으로 적정한다.
- 엷은 홍색이 30초 이상 진행될 때까지 적정
6. 결과
6.1. 계산
산가 = 5.611 × a × f
검체g수
a : 0.1 N KOH/EtOH 용액 소비량 (ml)
f : 0.1 N KOH/EtOH 용액의 역가
7. 참고문헌
7.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2008-27호)
270
정밀검사발전연구회
V. 공 통 시험법
붙임 1.
검사흐름도
시료 5～10 g
↓
100 mL EtOH : Diethyl ether
(1:2, v/v) 첨가
↓
phenolphthalein (1 %) 1 mL 첨가
↓
0.1 N KOH로 적정
무색 → 엷은 홍색
↓
계산 및 결과판정
정밀검사발전연구회
271
VI. 영양성분 표시사항 시험법
VI. 영양성분 표시사항 시험법
1
열 량
1. 분석원리
축산물의 에너지는 에트워터 계수를 사용하여 검사시료 100 g중의 조단백
질, 조지방 및 탄수화물 또는 당질의 함량에 단백질 4, 지방 9, 당질 4의 계수를
곱하여 각각의 에너지를 킬로칼로리(kcal) 단위로 산출하고 그 총계로 나타낸다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상 : 열량 표시가 되어 있는 축산물가공품
2.2. 기준 : 축산물의 표시기준
3 검사방법
3.1. 검사시료 100 g 중의 조단백, 조지방, 탄수화물 시험 결과에 에트워터 계수
(Atwater factor)를 곱하여 계산한다.
예) 시험결과가 조단백 13 %, 조지방 31 %, 탄수화물 50 %인 경우,
조단백 4, 조지방, 9, 탄수화물 4 계수를 곱하여 kcal 로 한다.
(13 × 4) + (31 × 9) + (50 × 4) = 531 kcal/100 g
참고) 단위는 킬로칼로리 또는 킬로주울(KJ)로 하고 킬로칼로리 단위에서 킬
주울 단위로의 환산은 다음 식에 따른다.
1 kcal = 4,184 KJ
3.2. 세계식량농업기구(FAO)를 중심으로 한 국제적 경향은 식품군을 군별로하
여 그 군에 특유한 에너지 환산계수를 채용하고 있으므로, 다음 표에 있는 축산
물에 대해서는 FAO의 에너지 환산계수를 사용한다(단, 아래표의 (
)를 붙인
것은 다른 식품군 계수에서 전용 또는 그것에서 추정해서 얻은 것임).
정밀검사발전연구회
275
VI. 영향성분 표시사항 시험법
표. FAO의 축산물군별 에너지 환산계수(kcal/g)
구분
축산물군
유지류
FAO의 에너지 환산계수
FAO에 의한 축산물군명
조단백질
조지방
탄수화물
4.27
8.79
3.87
(4.27)
9.02
-
우지‧돈지
식육
버터
육
류
4.27
9.02
a)
난
류
4.36
9.02
3.68
난
유
류
4.27
8.79
3.87
유가공품
a) 뇌, 심장, 신장, 간장(및 조미료를 가한 가공품)의 탄수화물에 대한 계수는 3.87, 혀, 근육 의
탄수화물에 대한 계수는 4.11
8. 참고문헌
8.1. 축산물의 가공기준 및 성분규격(국립수의과학검역원 고시 제2007-20호)
8.2. 세계식량농업기구(FAO)
276
정밀검사발전연구회
VI. 영양성분 표시사항 시험법
2
탄수화물 (당류)
II. 유가공품 시험법 4. 당분 시험법을 적용한다 .
3
단백질
II. 유가공품 시험법 2. 질소화합물 2.1 조단백 시험법을 적용한다 .
4
지방
II. 유가공품 시험법 3. 지질 검사법 3.1 조지방 (뢰제 , 곳트리브법 )
시험법을 적용한다 .
정밀검사발전연구회
277
VI. 영향성분 표시사항 시험법
5
포화지방
1. 분석원리
축산식품에서 지방을 가수분해를 통해 추출한다. 대부분의 유형은 산가수분
해를 하고, 유가공품은 알칼리 가수분해, 치즈는 두가지를 혼합하여 적용한다.
추출한 지방을 메탄올성 수산화나트륨용액으로 처리하여 알칼리염을 만든
후 트리폴루오로보란메탄올을 가하고 가열하여 에스테르화 한다. 생성된 지
방산에스테르를 이소옥탄에 녹여 분석을 행한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상 : 포화지방 표시가 되어 있는 축산물가공품
2.2. 기준 : 축산물의 표시기준
3. 장치
3.1. 기체크로마토그래프：불꽃이온화검출기(FID)
4. 시약 및 시액
4.1. 14% 트리플루오로보란메탄올(125 g BF3/L MeOH)
4.2. 메탄올성 수산화나트륨용액(0.5N) :
수산화나트륨 2 g을 메탄올 100 mL에 녹인다. 장시간 방치하는 경우 흰 침전
(Na2CO3)이 생길 수 있으나 이는 무시하여도 된다.
4.3. 이소옥탄：기체크로마토그래피용
4.4. 내부표준용액：C11:0 triundecanoin 0.01 g을 이소옥탄용액에 녹여 10 mL가 되게 한다
(1000 μg/mL).
4.5. 표준용액 : 지방산 표준물질 0.01 g을 이소옥탄에 녹여 1,000 μg/mL가 되게한
다. 내부표준물질 triundecanoic acid methyl ester 0.01 g을 이소옥탄에 녹여
1,000 μg/mL가 되게 한후 이를 각각 혼합하여 (1:1) 각각이 500 μg/mL가 되게
하여 표준용액으로 한다.
5. 시험방법
5.1. 지방 및 유지
5.1.1. 검체 약 25 mg을 유리 튜브에 정밀히 취하고 내부표준용액 1 mL를 첨가한다
278
정밀검사발전연구회
VI. 영양성분 표시사항 시험법
5.1.2. 이어 0.5 N 메탄올성 수산화나트륨용액 1.5 mL를 가하고 질소를 불어넣은 후
즉시 뚜껑을 덮고 혼합한다.
5.1.3. 이어 100 ℃ heating block에서 약 5분간 가온한다
5.1.4. 이를 냉각한 후 14% 트리플루오르보란메탄올용액 2 mL를 가하고 다시 질소
를 불어넣은 후 즉시 뚜껑을 덮고 혼합하고 100 ℃에서 30분간 가온한다.
5.1.5. 이어 30～40 ℃로 냉각하여 이소옥탄용액 1 mL를 가하여 질소를 불어넣은 후
뚜껑을 덮고 이 온도에서 30초간 격렬히 진탕한다
5.1.6. 다음 즉시 포화 염화나트륨용액 5 mL를 가하고 질소를 불어넣은 후 뚜껑을
덮고 진탕한다.
5.1.7. 상온으로 냉각한 후 수층으로부터 분리된 이소옥탄층을 새 유리 튜브에 넣고
질소를 불어넣은 후 즉시 뚜껑을 덮는다.
5.1.8. 수층에 이소옥탄 1 mL를 추가로 넣고 위와 같은 방법으로 추출한 후 이소옥
탄층을 전의 이소옥탄액과 합한다.
5.1.9. 이 액을 무수황산나트륨으로 탈수하고 질소를 불어넣은 후 분석전까지 밀봉
한다.
6. 기기분석조건
6.1. 기체크로마토그래피 조건
6.1.1. 칼럼：SP-Omegawax 320(Capillary column; polyethyleneglycol 100 %; 30 m ×
0.32 mm × 0.52 μm)
6.1.2. 주입부온도：250 ℃
6.1.3. 칼럼온도：200 ℃
6.1.4. 검출기온도：260 ℃
6.1.5. 유량：1.0 mL/분
6.1.6. split ratio ; 10：1
7. 결과
7.1. 정성시험
시험용액 및 지방산표준용액을 각각 1～2 μL를 주입하여 RRT(Relative Retention
Time; 내부표준물질에 대한 각 지방산들의 머무름 시간의 비)를 사용하여 각각
의 지방산을 확인한다.
7.2. 정량시험
정성시험법에 의해 얻은 각 지방산의 피크면적, 내부표준물질의 피크면적으로
부터 다음과 같이 정량을 한다.
정밀검사발전연구회
279
VI. 영향성분 표시사항 시험법
계산식：
지방산(㎎/100 g)＝ STc×(SAfa/STfa)×fFAi ×(STis/SAis)×
(최종희석용액(mL)/SA취한 량(g))×1.0067×(100/1,000)
STc
: 표준물질용액의 농도
fFAi
: 지방산 메틸에스테르로부터 지방산으로의 전환계수(표1)
1.0067：내부표준물질(C11:0) 트리글리세라이드로부터 지방산으로의 전환계수
STfa : 표준물질의 피크면적
SAfa : 시험용액내 표준물질의 피크면적
STis : 표준물질용액내 내부표준물질 피크면적
SAis : 시험용액내 내부표준물질 표준면적
표 1
지방산명
12：0
14：0
14：1
16：0
16：1
18：0
18：1
18：2
18：3
18：4
20：5
22：5
22：6
fFAi
0.9346
0.9421
0.9417
0.9481
0.9477
0.9530
0.9527
0.9524
0.9520
0.9517
0.9557
0.9593
0.9590
8. 참고문헌
8.1. 식품공전(식품의약품안전청 고시, 2010년)
280
정밀검사발전연구회
VI. 영양성분 표시사항 시험법
6
트랜스지방
1. 분석원리
트랜스지방은 트랜스 구조를 1개 이상 가지고 있는 비공액형의 모든 불포화지방을
말한다. 검체 중의 유지를 추출, 가수분해하고 생성된 지방산을 메틸에스테르로 유
도체화한 후 기체크로마토그래피/불꽃이온화검출기로 분석한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상 : 트랜스지방이 표시된 축산물가공품
2.2. 기준 : 축산물의 표시기준
3. 장치
3.1. 기체크로마토그래피/불꽃이온화검출기
4. 시약 및 시액
4.1. 14% 트리플루오로보란메탄올
4.2. 메탄올성 수산화나트륨용액(0.5N) : 수산화나트륨 2g을 메탄올 100 mL에 녹인다.
장시간 방치하는 경우 흰 침전(Na2CO3)이 생길 수 있으나 이는 무시하여도 된다.
4.3. 이소옥탄: 기체크로마토그래피용
4.4. 지방산 표준물질
4.4.1. 지방산메틸에스테르(37종) 혼합 표준물(Supelco, 미국)
4.4.2. 18:2, 18:3의 시스, 트랜스 이성체 표준물질(Sigma, 미국)
4.5. 표준용액 : 지방산 혼합 표준물 약 0.1g을 이소옥탄에 녹여 100 mg/mL가 되도록
제조한다.
5. 시험방법
5.1. 조지방 추출
5.1.1. 조지방 추출은 검체에 따라 조지방의 방법을 이용한다.
5.2. 지방의 가수분해
에테르 등의 용매를 이용하여 식품에서 추출한 유지는 에스테르 결합하고 있는
형태이므로 가수분해하는 과정이 우선 필요하다. 지방의 가수분해는 다음과 같이
행한다.
정밀검사발전연구회
281
VI. 영향성분 표시사항 시험법
5.2.1. 지방 및 유지 검체 약 25㎎를 유리 튜브에 취한다.
5.2.2. 0.5N 메탄올성 수산화나트륨용액 1.5 mL를 가하고 질소를 불어넣은 후 즉시
뚜껑을 덮고 혼합한다.
5.2.3. 100℃ heating block에서 약 5분간 가온한다.
5.2.4. 30～40℃로 냉각한다.
5.3. 지방산 유도체화
지방산을 메틸에스테르로 유도체화시키는 방법으로 1)의 방법으로 가수분해 시
킨 후 혹은 산분해법으로 추출한 검체의 경우 적용한다.
5.3.1. 14% 트리플루오르보란 메탄올용액 2 mL를 가하고 다시 질소를 불어 넣은 후
즉시 뚜껑을 덮고 혼합한다.
5.3.2. 100℃에서 2분간 가온한다.
5.3.3. 30∼40℃ 로 냉각하여 이소옥탄용액 1 mL를 가하여 질소를 불어넣은 후 뚜껑
을 덮고 이 온도에서 30초간 격렬히 교반한다.
5.3.4. 포화 염화나트륨용액 5 mL를 가하고 질소를 불어넣은 다음 뚜껑을 덮고 격
렬히 교반한다.
5.3.5. 상이 분리되도록 상온에서 방치한다.
5.3.6. 상층인 이소옥탄층을 무수황산나트륨이 있는 새 유리 튜브에 넣고 질소를 불
어넣은 후 즉시 뚜껑을 덮고 수분을 제거한다.
5.3.7. 수분을 제거한 메틸에스테르용액을 GC에 주입하여 기기분석을 시행한다.
6. 기기분석조건
지방산 분석시 기기 조건은 다음과 같다. C18:1과 C18:2, C18:3의 시스, 트랜스지
방의 이성체의 분리는 180℃의 등온조건에서 진행하며, 이후에는 승온조건을 사
용할 수 있다. 만일 20:1과 ccc-18:3가 제대로 분리되지 않으면 칼럼온도를 다시
조정 할 수 있다.
6.1. 기체크로마토그래피 조건
6.1.1. 칼럼 : SP-2560 (100m x 0.25mm x 0.2㎛) 혹은 이와 동등한 것
6.1.2. 주입부온도 : 250℃
6.1.3. 칼럼온도 : 180℃에서 40분간 유지한 후 3℃/min의 비율로 230℃까지 온도를
상승시키고 이후 10분이상 유지한다.
6.1.4. 검출기온도 : 280℃
6.1.5. 유량 : 헬륨 혹은 질소 1.0 mL/min
6.1.6. split ratio : 50 : 1
282
정밀검사발전연구회
VI. 영양성분 표시사항 시험법
7. 결과
7.1. 지방산 표준물질의 크로마토그램
37종의 지방산 표준물질 및 18:2와 18:3의 시스, 트랜스 이성체의 표준물질의 크
로마토그램은 그림 1-1, 1-2와 같다. 통상적으로 트랜스형의 이성체는 시스형보
다 먼저 분리된다. ccc 18:3과 20:1의 피크 순서는 칼럼의 종류 및 분석온도에
따라 상이하며 트랜스지방산의 분리조건을 최적화 시키는 데에는 20:1의 피크가
ccc 18:3 바로 앞에 나오는 것이 좋다(SP-2560의 경우, 그림 1-3).
일부 18:3의 트랜스형의 이성체는 γ-linoleic acid의 피크와 겹치므로 먼저 지방
산을 분석하여 이를 우선 확인하거나 GC-mass나 기타 방법을 이용하여 피크를
재확인하는 것이 필요하다.
8:0
10:0
6:0
12:0
14:0
16:0
11:0
13:0
4:0
14:1,
15:0
18:0
15:1
17:0
10
18:1
18:3 w-3
16:1
17:1
20:1
18:2,tt 18:2 20:0
18:3 w-6
18:1,t
20
30
40
그림 1-1. 지방산 표준물질의 크로마토그램
18:3 isomer
ttt
CLA
ttc,tct,ctt
18:2 isomer
tt
cct,ctc
tcc
ct,tc
cc
ccc
그림 1-2. 18:2 및 18:3 트랜스, 시스 이성체 표준물질 및
CLA의 크로마토그램
정밀검사발전연구회
283
VI. 영향성분 표시사항 시험법
18:1 isomer
18:0
18:1
w-9
18:2 isomer
18:3 isomer
17:1
18:1,t
18:2,tt
18:3 w-3
20:0
18:2 cc
18:3 w-6
trans
trans
cis
20:1
trans
그림 1-3. 시스형 및 트랜스형 지방산의 판별
7.2. FID conversion factor
지방산 함량 계산에 필요한 FID 전환계수(FID conversion factor, Ri)는 표준물질의
피크면적 및 함량을 이용하여 다음과 같이 계산한다. 18:1, 18:2, 18:3 지방산의
트랜스 이성체들은 각각 올레인산, 리놀레산, 리놀렌산의 FID 전환계수를 사용한다.
Ri =
Psi
PC11:0
×
WC11:0
Wsi
Ri : 각 지방산별 검출기 상대반응계수
Psi : 각 지방산 표준물의 피크면적
PC11:0 : C11:0의 면적
WC11:0 : C11:0의 함량
Wsi : 각 지방산 표준물질의 함량
i : 지방산의 종류
7.3. 지방산 전환계수
GC-FID상에서의 분석은 각 지방산의 메틸에스테르이므로 해당 지방산으로 전환
해야 한다. 각 지방산 별 전환계수는 표 1-1에 제시되어 있다. 트랜스형의 지방
산인 경우 시스형의 경우와 동일한 전환계수를 사용한다.
284
정밀검사발전연구회
VI. 영양성분 표시사항 시험법
표 1-1. 메틸에스테르에서 해당 지방산으로의 전환계수
지방산 명
4:0
6:0
8:0
10:0
11:0
12:0
13:0
14:0
14:1
15:0
15:1
16:0
16:1
17:0
17:1
18:0
18:1
18:2
20:0
18:3 n-6
18:3 n-3
21:0
20:1 n-9
20:2
20:3, n-6
20:3 n-3
20:4 n-6
20:5 n-3
22:0
22:1 n-9
22:2
22:6 n-3
23:0
24:0
24:1
fi
0.8431
0.8923
0.9114
0.9247
0.9300
0.9346
0.9386
0.9421
0.9417
0.9453
0.9449
0.9481
0.9477
0.9507
0.9503
0.9530
0.9527
0.9524
0.9570
0.9520
0.9520
0.9588
0.9568
0.9565
0.9562
0.9562
0.9560
0.9560
0.9604
0.9602
0.9600
0.9591
0.9620
0.9630
0.9632
7.4. 계산법
검체의 구성 지방산 별로 지방산 100g 당 g 함량을 계산한다. 이 분석법은 식물
성 정제유지 또는 가공유지의 트랜스 지방산을 측정하는 방법으로 트랜스 지방
산의 함량은 (t 18:1)과 [(tt+ct+tc) 18:2], [(ttt+ttc+tct+ctt+cct+ctc+tcc)18:3]의 합으
로 나타낸다.
정밀검사발전연구회
285
VI. 영향성분 표시사항 시험법
FAi (g/100g 지방산)
=
Pi × fi
Ri
×
100
∑ (Pj × fj / Rj )
Pi, Pj : 지방산 피크면적
Ri, Rj : 각 지방산 표준물질에서 구한 FID 전환계수
fi, fj : 각 지방산 메틸에스테르로부터 지방산으로의 전환계수(표 1-1)
7.5. 트랜스지방 함량 계산
트랜스지방 함량은 조지방 함량에 구성 지방산 중 트랜스지방산 총량을 곱한 것을
트랜스지방 함량으로 한다.
트랜스지방
(g/100g 식품)
조지방함량(g/100g 식품)×트랜스지방산 함량(g/100g
=
지방산)
100
8. 참고문헌
8.1. 식품공전(식품의약품안전청 고시, 2010년)
286
정밀검사발전연구회
VI. 영양성분 표시사항 시험법
7
콜레스테롤
1. 분석원리
검체를 클로로포름：메탄올(2：1, v/v) 혼합용액으로 진탕, 혼합 추출하고, 0.5 % 수
산화나트륨용액으로 세척하고 무수황산나트륨으로 탈수한 후 여과하여 40 ℃ 이하
에서 클로로포름층을 감압 농축한다. 잔류물에 2 N 수산화칼륨 에탄올 용액을 가
하여 환류냉각기를 붙여 85 ℃에서 1시간 비누화한 후 냉각하여 에테르로 추출한
다. 에테르층을 무수황산나트륨으로 탈수한 후 여과하여 감압 농축하고, 잔류물을
헥산에 녹여 기체크로마토그래피로 측정한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상 : 콜레스테롤 표시가 되어 있는 축산물가공품
2.2. 기준 : 축산물의 표시기준
3. 장치
3.1. 기체크로마토그래프/불꽃이온화검출기(GC-FID)
4. 시약 및 시액
4.1. 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것
4.2. 물 : 증류수 또는 이와 동등한 것
4.3. 2N 수산화칼륨 에탄올용액 : 수산화칼륨 13.2 g을 소량의 물로 녹이고 에탄올을
가하여 100 mL로 한다.
4.4. 콜레스테롤 표준용액 : 콜레스테롤 20 mg을 헥산에 녹여 10 mL로 한다.
4.5. 5α콜레스탄 내부표준물질용액 : 5α콜레스탄 20 mg을 헥산에 녹여 10 mL로 한다.
4.6. 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급
5. 시험방법
5.1. 검체 약 1～10 g(콜레스테롤함량 20～1,000 mg/100 g)에 물 약 30 mL와 5α 콜
레스탄 1 mL를 가하여 혼합, 균질화 한다.
5.2. 이것을 분액여두에 옮겨 클로로포름 : 메탄올(2:1) 200 mL를 가하여 약 5분간 진
탕혼합 추출하여 방치한 후 클로로포름 층을 취하고 검액 잔류물에 다시 클로로
포름 : 메탄올(2:1) 100 mL씩 2회 추출을 반복한다.
정밀검사발전연구회
287
VI. 영향성분 표시사항 시험법
5.3. 추출한 클로로포름 층을 합하여 0.5 % 수산화나트륨용액 100 mL로 세척하고 무
수황산나트륨으로 탈수한 후 여과하여 40 ℃이하에서 클로로포름 층을 감압 농
축한다.
5.4. 감압 농축한 잔류물에 2 N 수산화칼륨 에탄올용액 20 mL를 가하여 환류냉각기
를 붙여 85 ℃에서 1시간 비누화한 후 냉각하여 물 약 20 mL를 분액여두에 옮
기고 에테르 약 20 mL씩 4회 추출한다.
5.5. 에테르추출액을 모두 합하여 물 20 mL씩으로 세척하여 페놀프탈레인 지시약으
로 홍색이 나타나지 않을 때까지 세척한다. 에테르 층을 무수황산나트륨으로 탈
수한 후 여과하여 감압 농축한다.
5.6. 건고물을 헥산 2 mL에 녹여 시험용액으로 한다.
6. 기기분석조건
6.1. 기체크로마토그래프의 측정조건
6.1.1. 칼럼 : HP-5 (30 m×0.32 mm×0.25 μm) 또는 이와 동등 제품(5 %-phenylmethylpolysiloxane)
6.1.2. 검출기 : FID(불꽃이온화 검출기)
6.1.3. 시험용액 주입부 및 검출기의 온도 ： 290～300 ℃
6.1.4 칼럼오븐온도 : 초기의 온도 270℃에서 시험용액을 주입한 후 5분간 유지하고
4 ℃/min의 비율로 온도를 상승시켜 290 ℃에서 5분간 유지한다.
6.1.5 캐리어 가스 및 유량 : 1.0 mL/min(splitless)
6.2. 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어
진 크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.
7. 결과
7.1. 표준품의 크로마토그램
기체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 : 콜레스테롤
288
정밀검사발전연구회
VI. 영양성분 표시사항 시험법
7.2. 정성시험
위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액
피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.
7.3. 정량시험
정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 결과에 의해 피이크높이법 또는 피이크면적법
에 따라 정량한다.
7.3.1. 환산계수 작성
콜레스테롤 표준물질 및 내부표준물질을 각각 20 mg을 취하여 헥산에 녹인 후
최종 부피를 20 mL로 한다. 가스크로마토그래프 내에 각각 주입한다. 콜레스테롤
과 내부표준물질의 면적 비를 이용하여 환산계수(f)를 구한다.
AIS × Wstd
f=
Astd × WIS
AIS : 내부표준물질의 피크면적 또는 높이
Astd : 콜레스테롤 표준물질의 피크면적 또는 높이
WIS : 내부표준물질의 농도(mg/mL)
Wstd : 콜레스테롤 표준물질의 농도(mg/mL)
7.3.2. 계산
검체 중 콜레스테롤(mg/100 g)
=
f× Aspl × CIS × 최종희석배수(mL) × 100
AIS × 검체채취량(g)
f : 환산계수
Aspl : 검체내 함유된 콜레스테롤의 피크면적 또는 높이
AIS : 검체내 함유된 내부표준물질의 피크면적 또는 높이
CIS : 검체내 함유된 내부표준물질의 농도(mg/mL)
8. 참고문헌
8.1. 식품공전(식품의약품안전청 고시 제2000-00호).
정밀검사발전연구회
289
VI. 영향성분 표시사항 시험법
8
나트륨
Ⅰ-1. 유가공품 검사법 9. 조제유류 중 무기물 검사법
II. 유가공품 시험법 9. 조제유류 중 무기물 시험법 9.1 무기물 9종
시험법을 적용한다 .
290
정밀검사발전연구회
VII. 식품첨가물 시험법
VII. 식품첨가물 시험법
1
수단색소
1. 분석원리
검체 중 수단색소를 메탄올-클로로포픔(6:4)으로 추출한 후 고속액체크로마토그래프/DAD
검출기로 분석한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
2.1.1. 알가공품(전란액, 난황액, 난백액, 전란분, 난황분, 난백분, 알가열성형제
품, 여지란, 피단)
3. 장치
3.1. 장비
3.1.1. Shaker
3.1.2. Centrifuge
3.1.3. Sonicator
3.1.4. Vortex
3.1.5. Balance
3.1.6. HPLC (DAD detector)
3.2. 기구
3.2.1. Syringe filter 0.45 μm
3.2.2. Volumetric flask
3.2.3. Centrifuge tube
3.2.4. Conical tube
3.2.5. Filtration apparatus(Wheaton)
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. 수단 표준품 : 수단Ⅰ, 수단Ⅱ, 수단Ⅲ, 수단Ⅳ
정밀검사발전연구회
293
VII. 식품첨가물 시험법
4.1.2. 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것
4.1.3. Methanol (HPLC 급)
4.1.4. tetra-butylammonium bromide
4.2. 시액
4.2.1. 추출용매 메탄올-클로로포름(6:4) : 메탄올 600 mL와 클로로포름 400
mL를 혼합하여 사용한다.
4.2.2. 이동상A 0.005 M tetra-butylammonium bromide, 1 % acetic acid :
tetra-butylammonium bromide 1.6 g 및 acetic acid 10 mL를 1L vol. flask 에 넣고
증류수로 채운다.
4.3. 표준용액
4.3.1. Stock standard solution(1,000 μg/mL)
수단Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ 표준품을 정밀하게 100 mg을 달아 메탄올-아세토니
트릴 용액(1:1)에 녹여 100 mL로 정용한다. (1000 μg/mL)
4.3.2. Working standard solution(0.1, 0.5, 1.0, 5.0 μg/mL)
4.3.1.항의 표준용액을 희석하여 0.1, 0.5, 1.0, 5.0 μg/mL 농도로 희석하
여 사용한다.
5. 시험방법
5.1. 검체 3 g을 취하고 메탄올-클로로포름(6:4) 혼합액 30 mL을 가하고 10분
간 진탕한다.
5.2. 이를 15분간 초음파 추출하고, 원심분리 한다(3000 r/min, 10분).
5.3. 상층액을 0.2 μm 주사기 필터를 사용하여 여과하고 시험용액으로 한다.
6. 기기분석조건
6.1. Detector : 자외부검출기(UV), 520 nm
6.2. Column : Capcell Pak C18 (4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것
6.3. Column temp. : 35 ℃
6.4. Mobile phase :
6.4.1. 이동상 A : 0.005 M tetra-butylammonium bromide, 1 % acetic acid
6.4.2. 이동상 B : Methanol
294
정밀검사발전연구회
VII. 식품첨가물 시험법
6.4.3. 이동상 기울기 조건
시간(분)
0
10
15
20
38
이동상A(%)
60
20
10
5
5
이동상B(%)
40
80
90
95
95
6.5. Flow rate : 1.0 mL/min
6.6. Injection volume : 30 μL
6.7. Run-time : 40 min.
7. 결과
7.1. 검사기준
불검출
7.2. 검량선의 작성
표준용액 30 μL를 상기의 조건에 따라 고속액체크로마토그래프에 주입하여
얻어진 피크의 높이와 면적으로부터 검량선을 작성한다.
7.3. 정성
위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준
용액 피크의 머무름시간과 일치하여야 한다.
7.4. 정량
검량곡선에서 얻어진 표준물질의 면적을 Y축으로 하고 표준물질의 농도를
X축으로 하여 검량곡선을 작성하고 시험용액의 면적을 Y축에 대입하여 시
험용액의 과산화벤조일 및 안식향산의 농도(μg/mL)를 구하고, 다음 식에
의해 검사시료 중 과산화벤조일 및 안식향산의 함량을 구한 후, 둘을 합산
하여 검사 시료 내 과산화벤조일 농도로 산출한다.
a × b
수단색소 함량(㎎/kg) = S × --------------------------------검사시료채취량(g)
정밀검사발전연구회
295
VII. 식품첨가물 시험법
S = 시험용액중의 수단색소 농도(μg/mL)
a = 시험용액의 전량 (mL)
b = 시험용액의 희석배수
8. 참고문헌
8.1. 식품 중 식품첨가물 분석법 식품의약품안전청 2003
8.2. 김천회 등, HPLC를 이용한 식품 중 허용외 색소의 동시분석에 관한 연구,
한국식품과학회지, 2008, 40, 375-381
8.3. Limin He et al, Determination of Sudan dye residues in eggs by liquid
chromatography and gas chromatography-mass spectrometry, Analytica
Chimica Acta, 2007, 594, 139-146
296
정밀검사발전연구회
VII. 식품첨가물 시험법
붙임1. Standard 및 sample chromatogram
1-1. 엑시드 오렌지, 수단 Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ 표준품 0.5 μg/mL 크로마토그램
1-2. 난황액 공시료 분석 크로마토그램
1-3. 엑시드 오렌지 , 수단색소 2 μg/mL 첨가 난황액 시료의 크로마토그램
정밀검사발전연구회
297
VII. 식품첨가물 시험법
붙임2. 검사흐름도
시료 3 g에 메탄올:클로로포름(6:4)
혼합액 30 mL를 넣은후 진탕(10
min.)
↓
초음파 추출(15 min.)
↓
원심분리(3,000 r/min, 15 min)
↓
상등액을 채취하여 필터(0.2 μm),
시험용액으로 사용
↓
HPLC 분석
↓
계산 및 결과판정
298
정밀검사발전연구회
VII. 식품첨가물 시험법
2
엑시드 오렌지( Acid orange, Orange II ) 색소
1. 분석원리
□ 수단색소(Sudan) 시험법에 따라 분석한다. (정량한계는 1.0 mg/kg)
․ 검체 중 수단색소를 메탄올-클로로포픔(6:4)으로 추출한 후 고속액체크로마토
그래프/DAD 검출기로 분석한다.
□ 축산물의 가공기준 및 성분규격 제3. 축산물 시험방법 6. 착색료 시험법
가. 타르색소(산성색소) (1) 모사염색법에 의한 분리․정성법에 따른다.
※ 아래는 수단색소 시험법에 따라 정리해 놓은 것임
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
2.1.1. 알가공품(전란액, 난황액, 난백액, 전란분, 난황분, 난백분, 알가열성형제품,
여지란, 피단) 등
3. 장치
3.1. 장비
3.1.1. Shaker
3.1.2. Centrifuge
3.1.3. Sonicator
3.1.4. Vortex
3.1.5. Balance
3.1.6. HPLC (DAD detector)
3.2. 기구
3.2.1. Syringe filter 0.45 μm
3.2.2. Volumetric flask
3.2.3. Centrifuge tube
3.2.4. Conical tube
3.2.5. Filtration apparatus(Wheaton)
정밀검사발전연구회
299
VII. 식품첨가물 시험법
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. 엑시드 오렌지 표준품
4.1.2. 물 : 3차 증류수 또는 이와 동등한 것
4.1.3. Methanol (HPLC 급)
4.1.4. tetra-butylammonium bromide
4.2. 시액
4.2.1. 추출용매 메탄올-클로로포름(6:4) : 메탄올 600 mL와 클로로포름 400
mL를 혼합하여 사용한다.
4.2.2. 이동상A 0.005 M tetra-butylammonium bromide, 1 % acetic acid :
tetra-butylammonium bromide 1.6 g 및 acetic acid 10 mL를 1L vol. flask 에
넣고 증류수로 채운다.
4.3. 표준용액
4.3.1. Stock standard solution(1,000 μg/mL)
엑시드 오렌지 표준품을 정밀하게 100 mg을 달아 메탄올-아세토니트릴
용액(1:1)에 녹여 100 mL로 정용한다. (1000 μg/mL)
4.3.2. Working standard solution(0.1, 0.5, 1.0, 5.0 μg/mL)
4.3.1.항의 표준용액을 희석하여 0.1, 0.5, 1.0, 5.0 μg/mL 농도로 희석하
여 사용한다.
5. 시험방법
5.1. 검체 3 g을 취하고 메탄올-클로로포름(6:4) 혼합액 30 mL을 가하고 10분간
진탕한다.
5.2. 이를 15분간 초음파 추출하고, 원심분리 한다(3000 r/min, 10분).
5.3. 상층액을 0.2 μm 주사기 필터를 사용하여 여과하고 시험용액으로 한다.
6. 기기분석조건
6.1. Detector : 자외부검출기(UV), 520 nm
6.2. Column : Capcell Pak C18 (4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것
300
정밀검사발전연구회
VII. 식품첨가물 시험법
6.3. Column temp. : 35 ℃
6.4. Mobile phase :
6.4.1. 이동상 A : 0.005 M tetra-butylammonium bromide, 1 % acetic acid
6.4.2. 이동상 B : Methanol
6.4.3. 이동상 기울기 조건
시간(분)
0
10
15
20
38
이동상A(%)
60
20
10
5
5
이동상B(%)
40
80
90
95
95
6.5. Flow rate : 1.0 mL/min
6.6. Injection volume : 30 μL
6.7. Run-time : 40 min.
7. 결과
7.1. 검사기준
불검출
7.2. 검량선의 작성
표준용액 30 μL를 상기의 조건에 따라 고속액체크로마토그래프에 주입하여
얻어진 피크의 높이와 면적으로부터 검량선을 작성한다.
7.3. 정성
위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준
용액 피크의 머무름시간과 일치하여야 한다.
7.4. 정량
검량곡선에서 얻어진 표준물질의 면적을 Y축으로 하고 표준물질의 농도를
X축으로 하여 검량곡선을 작성하고 시험용액의 면적을 Y축에 대입하여 시
험용액의 과산화벤조일 및 안식향산의 농도(μg/mL)를 구하고, 다음 식에
의해 검사시료 중 과산화벤조일 및 안식향산의 함량을 구한 후, 둘을 합산
하여 검사 시료 내 과산화벤조일 농도로 산출한다.
정밀검사발전연구회
301
VII. 식품첨가물 시험법
a × b
수단색소 함량(㎎/kg) = S × --------------------------------검사시료채취량(g)
S = 시험용액중의 수단색소 농도(μg/mL)
a = 시험용액의 전량 (mL)
b = 시험용액의 희석배수
8. 참고문헌
8.1. 식품 중 식품첨가물 분석법 식품의약품안전청 2003
8.2. 김천회 등, HPLC를 이용한 식품 중 허용외 색소의 동시분석에 관한 연구,
한국식품과학회지, 2008, 40, 375-381
8.3. Limin He et al, Determination of Sudan dye residues in eggs by liquid
chromatography and gas chromatography-mass spectrometry, Analytica
Chimica Acta, 2007, 594, 139-146
302
정밀검사발전연구회
VII. 식품첨가물 시험법
붙임1. Standard 및 sample chromatogram
1-1. 엑시드 오렌지, 수단 Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ 표준품 0.5 μg/mL 크로마토그램
1-2. 난황액 공시료 분석 크로마토그램
1-3. 엑시드 오렌지 , 수단색소 2 μg/mL 첨가 난황액 시료의 크로마토그램
정밀검사발전연구회
303
VII. 식품첨가물 시험법
붙임2. 검사흐름도
시료 3 g에 메탄올:클로로포름(6:4)
혼합액 30 mL를 넣은후 진탕(10 min.)
↓
초음파 추출(15 min.)
↓
원심분리(3,000 r/min, 15 min)
↓
상등액을 채취하여 필터(0.2 μm),
시험용액으로 사용
↓
HPLC 분석
↓
계산 및 결과판정
304
정밀검사발전연구회
VII. 식품첨가물 시험법
3
붕산(Boric acid)
1. 분석원리
검체 중 존재하는 붕산을 물로 끓여 추출하고 그 추출액을 터메릭(Turmeric)
종이의 색깔 변화로 반정량적(Semiquantitative)으로 검출 한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
2.1.1. 알가공품(전란액, 난황액, 난백액, 전란분, 난황분, 난백분, 알가열성형제품,
여지란, 피단) 등
3. 장치
3.1. 장비
3.1.1. Shaker
3.1.2. Vortex
3.1.3. Balance
3.1.4. Hot plate
3.1.5. Refrigerator
3.2. 기구
3.2.1. Volumetric flask
3.2.2. 깔대기
3.2.3. 삼각플라스크
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. 커크민(Curcumin)
4.1.2. Whatman No 2 paper
4.1.3. Petridish
4.1.4. Boric acid, H3BO3
4.1.5. 에탄올(HPLC 등급)
4.1.6. HCl(GR 등급)
정밀검사발전연구회
305
VII. 식품첨가물 시험법
4.2. 시액
4.2.1. 터메릭 시험종이(Turmeric paper) : 2.0 g의 Turmeric powder(Curcumin)를
80 % 에탄올 100 mL를 가하여 녹이고 5분간 진탕한 후 여과지로 여과
한 맑은 액을 사용한다.. 이 액을 petri dish에 넣고, Whatman No 2
paper를 침지시켜 염색한 후 건조시킨다. 건조된 여과지를 6×1 cm 크
기로 잘라 사용한다. 반드시 차광용기에 보관하여야 한다.
4.2.2. 80 % 에탄올 : 에탄올 80 mL와 증류수 20 mL를 혼합한다.
4.3. 표준용액
4.3.1. Stock standard solution(1,000 mg/mL)
붕산 표준품 1.0 g을 달아 증류수에 녹여 100 mL로 정용한다. (10
mg/mL)
4.3.2. Working standard solution (0.00, 0.02, 0.04, 0.10, 0.15, 0.20, 0.50, 1.00 %)
4.3.1.항의 표준용액을 0, 0.10, 0.20, 0.50, 0.75, 1.00, 2.50, 5.00 mL 를
15 mL 시험관에 넣고 증류수로 10 mL로 정용한 후, 0.7 mL HCl을 넣
고 증발되지 않도록 밀봉하여 사용한다.
이들은 각각 0.00, 0.02, 0.04, 0.10, 0.15, 0.20, 0.50, 1.00 % 붕산 함량
을 의미한다.(시료량 25 g, 추출용액 증류수 50 mL이고 이 중 10 mL
를 시험용액으로 하는 경우)
※ 표준용액은 제조 후, 6 개월 동안 사용 가능함
5. 시험방법
5.1. 검체 25 g을 취하고 증류수 50 mL을 가하고 삼각플라스크에 넣고 마개를
한 후 10분간 가열하여 끓인다.
5.2. 냉장고에서 30분간 정치시켜 냉각시킨다.
5.3. 거즈로 여과한 시험용액 10 mL를 15 mL 시험관에 옮기고 0.7 mL HCl을
첨가한 후 잘 흔들어 시험용액으로 한다.
6. 기기분석조건
해당없음
306
정밀검사발전연구회
VII. 식품첨가물 시험법
7. 결과
7.1. 검사기준
불검출
7.2. 정성 및 반정량 시험
7.2.1. 터메릭 시험종이 발색시험
단계별 표준용액 및 시험용액에 터메릭 종이를 중간 길이 정도 침지시
킨 후, 30분간 전조시켜 적색으로 발색되면 검출로 판정 한다
7.2.2. 발색정도를 표준용액의 발색정도와 비교하여 정량한다. 발색정도가 표
준용액 발색 범위를 초과한 경우 시험용액을 희석하여 동일하게 시험
한 후 발색 정도를 비교한다.
7.3. 정량시험
7.3.1. 정성적으로 검출이 되는 경우 붙임1.시험법에 따라 정량시험을 실시
한다.
8. 참고문헌
8.1. AOAC Official Method 959.09 Boric acid in meat, Semiquantitative Method
8.2. 식품공전, 식품의약품안전청, 2007
정밀검사발전연구회
307
VII. 식품첨가물 시험법
<붙임 1. 식품공전 붕산시험법>
원리 :
커크민(Curcumin)에 의한 비색정량법에 의한다.
4. 시약 및 시액
4.1. 수산-아세톤 용액：수산 50 g을 아세톤 500 mL에 녹인 후 여과한다.
4.2. 커크민용액：커크민(특급) 0.1 g을 에탄올 400 mL에 녹인다.
4.3. 붕산표준용액：붕산(H3BO3, 특급)을 데시케이터에서 5시간 건조한 후 500 mg
을 정확히 취하고 물에 녹여 1 L로 하여 표준원액으로 한다. 이 용액 1 mL는 10
μg 붕산에 상당한다.
5. 시험방법
5.1. 검체 1~2 g(붕산으로 0.3～0.8 mg 에 대응하는 양)을 자제도가니에 취하고
1 % 탄산나트륨용액을 가하여 알칼리성으로 하여 잘 혼합한 후 수욕상에
서 증발건조하고 500 ℃ 전기로에서 회화한다.
5.2. 회화한 것을 소량의 염산(1∶9)으로 산성으로 하여 녹이고 물을 가하여 정
확히 100 mL로 한다.
5.3. 그 2.0 mL를 자제도가니에 취하고 1 % 탄산나트륨용액을 가하여 알칼리성
으로 한 후 수욕상에서 증발 건조한다.
5.4. 잔류물을 방냉한 후 염산(1∶4) 1mL, 수산-아세톤용액 5 mL및 커크민용
액 2 mL를 가하여 55±2 ℃의 항온수조에서 2시간 30분 가온한다.
5.5. 이것을 방냉한 후 잔류물을 아세톤 20～30 mL를 가하여 녹여 메스플라스
크(100 mL)에 옮기고 아세톤으로 잔류물을 수회 씻어 합하여 100 mL로 하
고 540 nm에서 흡광도를 측정한다.
5.6. 별도로 붕산표준용액 0.5～4 mL를 수단계로 취하여 같은 조작으로 흡광도를
측정하여 검량선을 작성하고 동시에 공시험을 실시하여 보정한다.
7. 결과
7.1. 정성 및 정량
1
붕산(%) ＝ A ×V×
S
10, 000
S：검체채취량(g)
A：검량선에서 구해진 시험용액의 해당농도(μg)
V：희석배수
308
정밀검사발전연구회
VII. 식품첨가물 시험법
붙임2. 붕산 표준용액 농도별 터메릭 시험종이 발색정도 및 공시료와 첨가시료의 발색 정도
정밀검사발전연구회
309
VII. 식품첨가물 시험법
붙임3. 검사흐름도
시료 25 g에 D.W. 50 mL를 넣은후
10분간 가열하여 끓임
↓
냉장고에서 30분간 정치, 냉각
↓
거즈로 여과한 시험용액 10 mL +
0.7 mL HCl을 첨가, 혼합(시험용액)
↓
단계별 표준용액 및 시험용액에 터메릭
종이 침지, 30분 건조 후 판정
↓
표준용액의 발색정도와 비교하여 정량
(반정량)
↓
정성 검출시 붙임1. 시험법에 의해
정량시험
310
정밀검사발전연구회
VII. 식품첨가물 시험법
4
티오시안산나트륨
1. 분석원리
시험용액 중의 단백질을 TCA(trichloroacetic acid)용액으로 응집시키고 여과
한 다음, 여액 일정량에 질산제이철 용액을 가하여 생성된 티오시안산이온과
제이철이온의 착화합물(붉은색)의 흡광도를 460 nm에서 측정 하여 티오시안산
이온의 함량을 분석한다.
nSCN⁻
+
3
Fe⁺
→
Fe(SCN)n⁺
(3-n)
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
우유 및 치즈, 전지분유 등 착색되어 있지 않은 유가공품(단, 우유 및 유가공
품에는 티오시안산이온이 천연적으로 함유되어 있을 수 있음.)
2.2. 기준
불검출
3. 장치
3.1 자외/가시광선 분광광도계(UV/Vis Spectrophotometer)
3.2 용량플라스크 100 mL, 1 L
3.3 Centrifuge tube 50 mL
3.4 Balance, 소수점4자리 칭량 가능할 것
3.5 여과지 : Watman No.40 또는 Advantec No.5B
4. 시약 및 시액
4.1 시약
4.1.1 Sodium thiocyanate, Sigma 217263
4.1.2 Trichloroacetic acid, Sigma 402869
정밀검사발전연구회
311
VII. 식품첨가물 시험법
4.1.3 질산제이철․9수화물, Sigma 216826
4.1.4 Distilled water
4.1.5 질산(nitric acid, HNO3, 65～70 %)
※ 질산은 착색되지 않은 것을 사용한다.
4.2 시액
4.2.1 20 %(w/v) TCA용액: 20 g의 TCA를 물에 용해하여 100 mL로 한다. 침
전물이 있을 경우 여과하여 사용한다.
4.2.2 2 N 질산용액: 질산 13 mL를 물에 녹여 100 mL로 한다.
4.2.3 질산제이철 용액: 질산제이철 9수화물 16.0 g을 2 N 질산용액 50 mL에
녹이고 물로 희석하여 100 mL로 한다. 이 용액은 냉암소에 보관한다.
4.3 표준용액 제조
4.3.1 Stock standard solution (1 000 mg/L)
105 ℃에서 건조한 티오시안산나트륨 0.1396 g을 달아 물에 녹여 100 mL로 한다.
※ 티오시안산나트륨 대신 티오시안산칼륨을 사용할 수 있으며, 이 경
우에는 건조한 티오시안산칼륨 0.167 3 g을 취한다.
4.3.2 working standard solution
표준원액을 물로 희석하여 2, 5, 10, 20, 50 mg/L의 표준용액을 제조한다.
5. 시험방법
5.1 추출
5.1.1 우유는 그대로를 시험용액으로 한다
5.1.2 유가공품(전지분유, 치즈)은 검체 약 6 g을 정밀히 달아 물로 분산․균질
화하여 50 mL로 한 액을 시험용액으로 한다.
5.2 정제
5.2.1 시험용액 4 mL에 20 % TCA용액 2 mL를 가하고 잘 섞은 다음 30분간
실온에서 방치한 후 여과지 Watman No.40 또는 Advantec No.5B를 사용
하여 여과한다.
312
정밀검사발전연구회
VII. 식품첨가물 시험법
5.2.2 각 표준용액도 4 mL씩을 취하여, 20 % TCA용액 3 mL 씩을 가하고 잘
섞는다.
5.3 발색
5.3.1 위의 여과액 2.0 mL에 질산제이철 용액 2.0 mL를 가하고 잘 혼합한 다음
460nm에서 흡광도를 측정한다.
5.3.2 각각의 표준용액-TCA혼합액 2 mL 씩을 취하고 시험용액과 같이 처리
한 후 460 nm에서 흡광도를 측정한다.
5.3.3 물 2.0 mL에 질산제이철 용액 2.0 mL를 혼합한 액을 공시험액으로 한다.
6. 기기분석조건
6.1 분석파장 : 460 nm
※ 티오시안산이온-제이철이온의 착화합물은 장시간 보관시 불안정하므로 질
산제이철 용액을 가하고 10분 이내에 측정을 완료한다.
6.2 Sample Cell: 10 mm UV Cell
7. 결과
7.1 검량선작성
표준용액의 농도별로 얻어진 흡광도 값으로부터 검량선을 작성한다.
7.2 측정
UV/Vis Spectrophotometer를 이용하여 460 nm에서 시험용액 및 표준용액의
흡광도를 측정한다. (정량한계 2 mg/L (시험용액 중, 티오시안산이온으로서))
7.3 정량시험
표준용액의 검량선으로부터 시험용액 중에 함유되어 있는 티오시안산 이온의
함유량을 구한다.
7.3.1 우유
우유 중 티오시안산이온의 함량(mg/L) = 시험용액 중 티오시안산이온의 농도(mg/L)
정밀검사발전연구회
313
VII. 식품첨가물 시험법
7.3.2 유가공품
유가공품(치즈, 전지분유) 중 티오시안산이온의 함량(mg/kg) =
시험용액 중 티오시안산이온의 농도(mg/L)
314
×
시험용액전량(mL)
검체의 채취량(g)
정밀검사발전연구회
VII. 식품첨가물 시험법
붙임 1. 검사흐름도
시료 추출
↓
표준용액 및 시료
여과 및 정제
↓
표준용액, 공시험용액, 시험용액
발색
↓
표준용액, 공시험용액, 시험용액
흡광도 측정
↓
계산 및 결과판정
정밀검사발전연구회
315
VII. 식품첨가물 시험법
5
하이드록시프롤린
1. 분석원리
시료 중의 단백질을 산으로 가수분해하여 하이드록시프롤린을 생성시키고 이
를 클로라민T로 산화하여 피롤(pyrrole)환이 함유된 산화물을 형성시킨다. 이에
과염소산을 넣어 과잉의 클로라민 T를 분해하고 산화된 하이드록시프롤린을
P-디메틸아미노벤즈알데히드(발색제)와 반응시켜 생성된 적색 화합물을 558 nm
파장에서 흡광도를 측정하여 하이드록시프롤린을 정량하는 방법이다.
하이드록시프롤린(C5H9NO3) 함량 측정을 통해, 동물성 단백질 가수 분해 물 함유
여부를 판단할 수 있다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
유 및 유제품
2.2. 기준
불검출
3. 장치
3.1 분광광도계 (Spectrophotometer)
3.2 용량플라스크 100 mL, 1 L
3.3 Balance, 소수점4자리 칭량 가능할 것
3.4 여과지
3.5 비이커 100 mL
3.6 pH meter
4. 시약 및 시액
4.1 시약
4.1.1 페놀 : 새로 증류하여 사용한다.
316
정밀검사발전연구회
VII. 식품첨가물 시험법
4.1.2 염산 : 6 mol/L, 12 mol/L 용액
4.1.3 수산화나트륨 : 1 mol/L, 10 mol/L 용액
4.1.4 Citric acid monohydrate, Sigma C1909
4.1.5 Sodium hydroxide, Sigma S8045
4.1.6 Sodium acetate trihydrate, Sigma 236500
4.1.7 n-propyl alcohol
4.1.8 Chloramine-T trihydrate, Sigma 402869
4.1.9 P-dimethylaminobenzaldehyde, Sigma D8904
4.2 시액
4.2.1 완충용액
4.2.1.1 구연산 일수화물 30 g, 수산화나트륨 15 g, 초산나트륨 삼수화물 90 g을
1 L 정용플라스트에 넣는다.
4.2.1.2 약 500 mL 물을 가하여 용해시킨 후 n-프로필알코올 290 mL을 첨가
한다.
4.2.1.3 pH를 6.0으로 조정한 후 물로 채워 1 L가 되도록 조제한다. (4 ℃ 냉암소
보관)
4.2.2 클로라민T 용액 : 클로라민T 1.41 g을 완충용액 100 mL에 용해시켜 조제
한다.(4 ℃ 냉암소 보관)
4.2.3 발색제 : P-디메틸아미노벤즈알데히드 10 g을 과염소산(60%) 35 mL에
용해시키고 혼합하면서 이소프로필알코올 65 mL을 천천히 넣어 조제한다.
4.3 표준용액 제조
4.3.1 Stock standard solution (500 μg/mL)
하이드록시프롤린 50.0 mg를 정확히 달아 소량의 물에 녹이고 6 mol/L
염산을 한 방울 넣은 후, 물로 채워 100 mL가 되도록 한다 (냉장보관 시
6개월 유효).
정밀검사발전연구회
317
VII. 식품첨가물 시험법
4.3.2 working standard solution 1 (5 μg/mL)
stock sol. 1 mL를 100 mL vol. flask에 넣고 물로 정용한다.
5. 시험방법
5.1 시료 0.5 g을 정밀히 달아 가수분해관에 넣고 이에 12 mol/L 염산
10～15
mL을 넣는다.
5.2 여기에 새로 증류시킨 페놀 3～4 방울을 떨어뜨리고, 질소가스를 주입한
다음 마개를 막고 110 ℃의 항온건조기에서 6시간 동안 가수분해하여 실
온에서 냉각한다.
5.3 가수분해물을 잘 흔들어 섞은 후 정성용 여과지로 100 mL 비이커에 여과
한다.
5.4 가수분해관 및 여과지의 잔류물을 물 5 mL씩 3회 세척․여과하여 합친다.
5.5 10 mol/L 및 1 mol/L 수산화나트륨용액을 사용하여 pH 8로 조정한 후 100 mL
용량플라스크에 옮겨 물로 채워 시험용액으로 한다.
6. 기기분석조건
6.1 분석파장 : 558 nm
7. 결과
7.1 검량선작성
7.1.1 하이드록시프롤린 표준용액 10(0.5 μg/mL), 20(1 μg/mL), 30(1.5 μg/mL),
40 mL(2 μg/mL)을 취하여 각각 100 mL 용량플라스크에 넣고 물로 표시
선까지 채운 후 잘 섞는다.
7.1.2 각 농도별로 2 mL씩 취하여 각각 시험관 또는 비색관에 넣고 이에
★1
클
로라민 T 용액 1 mL를 넣어 잘 흔들어 섞은 후 실온에서 20분간 방치한다.
7.1.3 여기에 발색제 1 mL을 넣어 잘 섞고, 마개로 막은 다음 60 ℃의 수욕중
에서 20분간 반응시킨 후 급속 냉각시킨다.
7.1.4 파장 558 nm에서 흡광치를 측정하여★2 얻은 흡광도를 Y-축으로 하고 표
준용액의 하이드록시프롤린 양(1.0, 2.0, 3.0, 4.0 μg)을 X축으로 하여 검
량선을 작성한다.
318
정밀검사발전연구회
VII. 식품첨가물 시험법
7.2 측정
7.2.1 위의 시험용액 2 mL을 취하여 시험관에 넣고 7.1 검량선 작성의
★1
부터
★2
까지 조작하여 흡광치를 얻는다.
7.2.2 시험용액 대신 물 2 mL을 취하여 얻은 공시험의 흡광치를 보정하고 검
량선에 대입하여 시료 중 하이드록시프롤린의 양을 구한다. (정량한계
0.01 g/100 g)
검량선으로 구한
하이드록시프롤린 = 하이드록시프롤린 ×
(g/100 g)
의 양 (μg)
V
1
×
T
1
×
M
6
× 100
10
T : 시험조작에 사용한 시험용액의 부피(2 mL)
V : 시험용액의 최종부피(100 mL)
M : 검체량(g)
정밀검사발전연구회
319
VII. 식품첨가물 시험법
붙임 1. 검사흐름도
시료
여과 및 정제
↓
표준용액 발색 및 흡광도 측정 후
검량선 작성
↓
시험용액 발색 및 흡광도 측정
↓
계산 및 결과판정
320
정밀검사발전연구회
VII. 식품첨가물 시험법
6
과산화벤조일
1. 분석원리
검체 중 과산화벤조일을 아세토니트릴로 추출한 후 고속액체크로마토그래프/UV
검출기로 분석한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
2.1.1. 유청류 (유청분말, 유청단백분말)
3. 장치
3.1. 장비
3.1.1. Shaker
3.1.2. Centrifuge
3.1.3. Sonicator
3.1.4. Vortex
3.1.5. Balance
3.1.6. HPLC (DAD, PDA 또는 UV detector 중 하나 포함)
3.2. 기구
3.2.1. Syringe filter 0.45 μm
3.2.2. Volumetric flask
3.2.3. Centrifuge tube
3.2.4. Conical tube
3.2.5. Filtration apparatus(Wheaton)
4. 시약 및 시액
4.1. 시약
4.1.1. 과산화벤조일(Benzoyl peroxide) 표준품 (Sigma 513474, 75 %, USP grade)
4.1.2. 안식향산 표준품 (Sigma 242381, ACS reagent)
4.1.3. Acetonitrile(HPLC 급)
정밀검사발전연구회
321
VII. 식품첨가물 시험법
4.1.4. 인산(meta-phosphoric acid) (Sigma 239275, chip, ACS reagent)
4.2. 시액
4.2.1. 이동상 A : 0.1 % phosphoric acid : m-phosphoric acid 1 g을 1L vol. flask에
넣고 증류수로 채운다.
4.2.2. 이동상 B : Acetonitrile
4.2.3. 추출용매 : Acetonitrile
4.3. 표준용액
4.3.1. Stock standard solution(1,000 μg/mL)
과산화벤조일 표준품과 안식향산 표준품 각 100 mg을 100 mL vol.
flask에 정밀히 달아 아세토니트릴 100 mL를 가하여 녹인 액을 표준원
액으로 하고, 이를 희석하여 20 μg/mL로 하여 표준용액으로 한다.
4.3.2. Working standard solution(0.1, 0.5, 1.0, 2.0, 5.0 μg/mL)
4.3.1.항의 표준용액을 0.1, 0.5, 1.0, 2.0, 5.0 μg/mL 농도로 희석하여 사
용한다.
5. 시험방법
5.1. 검체 10 g을 취하여 50 mL 메스플라스크에 정밀히 달아 아세토니트릴 30
mL 을 가하여 15분간 균질화한 후 아세토니트릴로 50 mL 까지 채운다.
5.2. 이를 3,000 r/min 15분간 원심분리 한다.
5.3. 상층액의 맑은 층을 0.45 μm syringe filter를 이용하여 여과하고 이를 시
험용액으로 한다.
6. 기기분석조건
6.1. Detector : 자외부검출기(UV), 235 nm
6.2. Column : Capcell Pak C18, UG120 (4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것
6.3. Column temp. : 40 ℃
6.4. Mobile phase :
6.4.1. 이동상 A : 0.1 % m-phosphoric acid
6.4.2. 이동상 B : Acetonitrile
322
정밀검사발전연구회
VII. 식품첨가물 시험법
6.4.3. 이동상 기울기 조건
시간(분)
0
8
16
22
이동상A(%)
80
40
10
80
이동상B(%)
20
60
90
20
6.5. Flow rate : 1.0 mL/min
6.6. Injection volume : 20 μL
6.7. Run-time : 25 min.
7. 결과
7.1. 검사기준
불검출
7.2. 검량선의 작성
표준용액 20 μL를 상기의 조건에 따라 고속액체크로마토그래프에 주입하여
얻어진 피크의 높이와 면적으로부터 검량선을 작성한다.
7.3. 정성
위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 어느 측정조건에서도 표준
용액 피크의 머무름시간과 일치하여야 한다.
7.4. 정량
검량곡선에서 얻어진 표준물질의 면적을 Y축으로 하고 표준물질의 농도를
X축으로 하여 검량곡선을 작성하고 시험용액의 면적을 Y축에 대입하여 시
험용액의 과산화벤조일 및 안식향산의 농도(μg/mL)를 구하고, 다음 식에
의해 검사시료 중 과산화벤조일 및 안식향산의 함량을 구한 후, 둘을 합산
하여 검사 시료 내 과산화벤조일 농도로 산출한다.
a × b
과산화벤조일 또는 안식향산 함량(㎎/kg) = S × ------------검사시료채취량(g)
S = 시험용액중의 과산화벤조일 또는 안식향산 농도(μg/mL)
a = 시험용액의 전량 (mL)
b = 시험용액의 희석배수
정밀검사발전연구회
323
VII. 식품첨가물 시험법
7.5. 참고사항
7.5.1. 회수율 시험시 안식향산을 함께 첨가하지 않고 과산화벤조일만을
첨가하여 하루 동안 상온에서 방치하여 시험하며, 과산화벤조일 추출시
일부가 안식향산으로 전환됨으로 과산화벤조일뿐 아니라 안식향산의
양도 함께 계산해야 한다.
7.5.2. 안식향산과 과산화벤조일 회수율은 평균 89 % 이상 이었다.
시험용액 중 안식향산의 정량한계는 0.05 μg/mL, 과산화벤조일의
정량한계는 0.05 μg/mL수준임 (사용기기의 감도에 따라 변경될 수 있음)
7.5.3. 아래 참고문헌 8.2. 에서 검출한계의 경우 과산화벤조일은 0.03 μg/mL,
안식향산은 0.02 μg/mL으로 제시되었다.
8. 참고문헌
8.1. 식품 중 식품첨가물 분석법 식품의약품안전청 2009
8.2. Abe-Onishi et al, Determination of Benzoyl Peroxide and Benzoic Acid in
wheat
flour
identification
by
by
high-performance
high-performance
liquid
chromatography
liquid
and
its
chromatography-mass
spectrometry. Journal of chromatography A(2004)
붙임1. Standard 및 sample chromatogram
324
정밀검사발전연구회
VII. 식품첨가물 시험법
1-1. 과산화벤조일, 안식향산 표준품 2 μg/mL 크로마토그램
1-2. 유청단백분말 공시료 분석 크로마토그램
1-3. 과산화벤조일 및 안식향산 2 μg/mL 첨가 유청단백분말 시료의
크로마토그램
붙임2. 검사흐름도
정밀검사발전연구회
325
VII. 식품첨가물 시험법
시료 10 g를 정밀히 달아 50 mL vol.
flask에 담음
↓
Acetonitrile 30 mL를 넣고 15 min간
균질화 후, 50 mL까지 채움
↓
원심분리(3,000 r/min, 15 min)
↓
상등액을 채취하여 필터(0.45 μm),
시험용액으로 사용
↓
HPLC 분석
↓
계산 및 결과판정
326
정밀검사발전연구회
VIII. 기타 시험법
VIII. 기타 시험법
1
멜라민(HPLC법)
1. 분석원리
검체 중의 멜라민을 아세토니트릴․물(50:50, v/v) 용액으로 추출하고 이를 양이온
교환수지를 사용하여 정제한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
불검출 기준 적용대상 이외의 식품
2.2. 기준
2.5 mg/kg 이하
3. 장치
3.1 액체크로마토그래프 : 자외부흡수검출기(UV detector)를 사용한다.
3.2 정제용 카트리지 : 설폰산기(-SO3H)를 갖는 강산성 양이온교환수지 카트리지로서
Oasis MCX(150 mg 함유, 6 mL용) 또는 이와 동등한 것
4. 시약 및 시액
4.1 시약
4.1.1 Acetonitrile, B&J AH015-4
4.1.2 Formic acid, Fluka 06460
4.1.3 Diethylamine, Fluka 31730
4.1.4 Citric acid(anhydros), Sigma C0757
4.1.5 Sodium octane-1-sulphonate(monohydrate), Fluka 74882-10G-F
4.1.6 1M Sodium hydroxide solution
4.1.7 Melamine, Aldrich M2659
4.1.8 Distilled water
4.2 시액
4.2.1 4 % 개미산용액 : 개미산 4 mL에 물을 가하여 100 mL로 한다.
4.2.2 0.2 % 디에틸아민 함유 아세토니트릴 용액 : 디에틸아민 0.2 mL에 아세토니
트릴을 가하여 100 mL로 한다.
정밀검사발전연구회
329
VIII. 기타 시험법
4.2.3 2 % 디에틸아민 함유 아세토니트릴 용액 : 디에틸아민 2 mL에 아세토니트
릴을 가하여 100 mL로 한다.
4.2.4 기타시약 : 특급
4.3 표준용액 제조
4.3.1 Stock standard solution(500 mg/L)
멜라민 표준품 100 mg을 취하여 물에 녹여 정확히 200 mL로 한다.
4.3.2 working standard solution
표준원액을 0.1, 0.5, 1.0, 2.0 및 5.0 μg/mL의 농도가 되도록 물에 녹여 희
석하여 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다.
5. 검사방법
5.1 추출
5.1.1 검체를 분쇄한 후 시료 1 g을 정밀히 달아 15 mL 폴리프로필렌 원심분리관에
넣는다.
5.1.2 여기에 물 5 mL을 넣어 검체를 습윤시킨 후 아세토니트릴 5 mL을 가한다.
5.1.3 심하게 흔들어 섞거나 Shaker에서 10분간 교반한다.
5.1.4 30분간 초음파 진탕한 다음 원심분리(2,600 × G , 10분)한다.
5.1.5 상등액을 취하여 0.45 μm Syringe filter로 여과한 것을 추출액으로 한다(상
등액의 층이 분리되어 있을 경우 서로 혼화시킨 후 여과한다).
5.2 정제
5.2.1 정제용 카트리지에 아세토니트릴 5 mL, 4 % 개미산용액 5 mL를 차례로 흘려
활성화시킨다.
5.2.2 4 % 개미산용액 3 mL 및 추출액 2 mL를 함께 주입하고 이를 중력을 이용
하여 유출시킨다.
5.2.3 아세토니트릴 5 mL, 0.2 % 디에틸아민 함유 아세토니트릴용액 5 mL를 차
례로 흘린다.
5.2.4 카트리지 내에 남아있는 용액을 감압펌프를 이용하여 제거한다.
5.2.5 2 % 디에틸아민 함유 아세토니트릴용액 4 mL로 용출시킨다.
5.2.6 카트리지 내에 남아있는 용액은 감압펌프를 이용하여 완전히 용출시켜 용
출액에 합한다.
5.2.7 용출액 2 mL를 4 mL 바이알에 취하여 50 ℃에서 질소로 건고한다.
5.2.8 잔류물에 물 1 mL를 가하여 녹인 것을 시험용액으로 한다.
330
정밀검사발전연구회
VIII. 기타 시험법
6. 기기분석조건
6.1 칼럼 : 칼럼 : C18 (4.6 × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것
6.2 이동상 : 완충용액․아세토니트릴 (85:15, v/v)
6.2.1 완충용액 : 무수구연산 1.92 g과 옥탄설폰산나트륨 [C8H17O3SNa] 2.16 g을 950
mL의 물에 녹이고 1 M 수산화나트륨을 사용하여 pH 3.0으로 한 후 물을 가하여
전량을 1 L로 한다.
6.3 검출파장 : 240 nm
6.4 유속 : 1.0 mL/분
6.5 주입량 : 10 μL
7. 시험결과
7.1 검량선 작성
표준용액을 액체크로마토그래프에 주입한 후 얻어진 크로마토그램상의 피크
높이 또는 면적을 이용하여 검량선을 작성한다.
7.2 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과
일치하여야 한다.
7.3 정량시험
정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험용액의 크로마토그램으로부터 멜라민의
피크높이 또는 피크면적을 검량선에 대입하여 정량한다.
멜라민의 함량(mg/kg) = C × V/S × D
C : 검량선에서 구한 멜라민의 농도 (μg/mL)
V : 시험용액의 최종 부피(mL)
S : 시료 채취량(g)
D : 시험용액의 희석배수
8. 참고문헌
8.1 식품공전, 식품의약품안전청(2009)
정밀검사발전연구회
331
VIII. 기타 시험법
붙임 1. 검사흐름도
시료 채취(1 g)
↓
물 5 mL을 넣어 검체를 습윤
아세토니트릴 5 mL
↓
Vortex & shaking(10 min)
Sonication(30 min)
↓
Centrifuge(2,600 g, 10 min)
Filter(0.45 μm nylon)
↓
정제 및 추출
(Oasis MCX(150 mg 함유, 6 mL용))
↓
표준물질 희석
↓
HPLC 분석
↓
계산 및 결과판정
332
정밀검사발전연구회
VIII. 기타 시험법
2
멜라민(LC/MS/MS법)
1. 분석원리
검체 중의 멜라민을 아세토니트릴․물(50:50, v/v) 용액으로 추출, 여과하고 이를 양
이온교환수지를 사용하여 정제한 후 액체크로마토그래프/질량분석기/ 질량분석기로
분석한다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
조제분유, 조제우유, 성장기용 조제분유, 성장기용 조제우유, 기타조제분유,
기타조제우유
2.2. 기준
불검출
3. 장치
3.1 액체크로마토그래프/질량분석기/질량분석기(LC/MS/MS)
3.2 정제용 카트리지 : 설폰산기(-SO3H)를 갖는 강산성 양이온교환수지 카트리지로서
Oasis MCX(150 mg 함유, 6 mL용) 또는 이와 동등한 것
4. 시약 및 시액
4.1 시약
4.1.1 Acetonitrile, B&J AH015-4
4.1.2 Formic acid, Fluka 06460
4.1.3 Diethylamine, Fluka 31730
4.1.4 Ammonium formate, Sigma 156264
4.1.5 Melamine, Aldrich M2659
4.1.6 Distilled water
4.2 시액
4.2.1 0.1 % 개미산용액 : 개미산(Formic acid) 0.1 mL에 물을 가하여 100 mL로 한다.
4.2.2 4 % 개미산용액 : 개미산 4 mL에 물을 가하여 100 mL로 한다.
정밀검사발전연구회
333
VIII. 기타 시험법
4.2.3 0.1 % 개미산․아세토니트릴(5:95, v/v) 혼합용액 : 0.1 % 개미산 용액 5mL에 아
세토니트릴 95 mL를 가하여 100 mL로 한다.
4.2.4 0.2 % 디에틸아민 함유 아세토니트릴 용액 : 디에틸아민(Diethylamine) 0.2 mL에
아세토니트릴을 가하여 100 mL로 한다.
4.2.5 2 % 디에틸아민 함유 아세토니트릴 용액 : 디에틸아민 2 mL에 아세토니트
릴을 가하여 100 mL로 한다.
4.2.6 20 mM 개미산암모늄 용액 : 개미산암모늄(Ammonium formate) 1.26 g을 물에
녹여 1,000 mL로 한다.
4.2.7 기타시약 : 특급
4.3 표준용액 제조
4.3.1 Stock standard solution (100 mg/L)
멜라민 표준품 10 mg을 취하여 0.1 % 개미산․아세토니트릴(5:95, v/v) 혼합
용액으로 녹여 정확히 100 mL로 한다.
4.3.2 working standard solution
표준원액을 0.01, 0.02, 0.05, 0.10 및 0.20 μg/mL 농도가 되도록 0.1 % 개미
산․아세토니트릴(5:95, v/v) 혼합용액으로 희석하여 검량선 작성을 위한 표준
용액으로 한다(사용 시 조제한다).
5. 검사방법
5.1 추출
5.1.1 검체를 분쇄한 후 시료 1 g을 정밀히 달아 폴리프로필렌 원심분리관에 넣는다.
5.1.2 여기에 물 5 mL을 넣어 검체를 습윤시킨 후 아세토니트릴 5 mL을 가한다.
5.1.3 심하게 흔들어 섞거나 Shaker에서 10분간 교반한다.
5.1.4 30분간 초음파 진탕한 다음 원심분리(2,600 × G , 10분)한다.
5.1.5 상등액을 취하여 0.45 μm 멤브레인필터로 여과한 것을 추출액으로 한다(상
등액의 층이 분리되어 있을 경우 서로 혼화시킨 후 여과한다).
5.2 정제
5.2.1 정제용 카트리지에 아세토니트릴 5 mL, 4 % 개미산용액 5 mL를 차례로 흘려
활성화시킨다.
334
정밀검사발전연구회
VIII. 기타 시험법
5.2.2 4 % 개미산용액 3 mL 및 추출액 2 mL를 함께 주입하고 이를 중력을 이용
하여 유출시킨다.
5.2.3 아세토니트릴 5 mL, 0.2 % 디에틸아민 함유 아세토니트릴용액 5 mL를 차
례로 흘린다.
5.2.4 카트리지 내에 남아있는 용액을 감압펌프를 이용하여 제거한다.
5.2.5 2 % 디에틸아민 함유 아세토니트릴용액 4 mL로 용출시킨다.
5.2.6 카트리지 내에 남아있는 용액은 감압펌프를 이용하여 완전히 용출시켜 용
출액에 합한다.
5.2.7 용출액 1 mL를 4 mL 바이알에 취하여 50 ℃에서 질소로 건고한다.
5.2.8 잔류물에 0.1 % 개미산․아세토니트릴(5:95, v/v) 혼합용액 1 mL를 가하여 녹인
것을 시험용액으로 한다.
6. 기기분석조건
6.1 칼럼 : HILIC Silica(2.1 × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것
6.2 이동상 : 이동상은 A 및 B 용액의 농도 구배조건에 따라 사용한다.
6.2.1 이동상 A : 0.1 % 개미산․아세토니트릴(5:95, v/v)
6.2.2 이동상 B : 20 mM 개미산암모늄․아세토니트릴(50:50, v/v)
시간(분)
0.0
5.0
10.0
11.0
13.0
15.0
이동상 A
100
100
25
25
100
100
이동상 B
0
0
75
75
0
0
6.3 유속 : 0.25 mL/분
6.4 주입량 : 10 μL
6.5 칼럼온도 : 35 ℃
6.6 질량분석기/질량분석기의 조건
6.6.1 Ionization : ESI (Positive)
6.6.2 Source voltage : 4.8 kV
6.6.3 Capillary Temp. : 350 ℃
6.6.4 Auxiliary gas : 질소
정밀검사발전연구회
335
VIII. 기타 시험법
6.6.5 Collision gas : 아르곤 또는 질소
6.6.6 Source collision energy : 15～30 V
7. 시험결과
7.1 검량선 작성
표준용액을 액체크로마토그래프/질량분석기/질량분석기에 주입한 후 얻어진 크
로마토그램 상의 m/z 85 이온의 피크 높이 또는 면적을 이용하여 검량선을 작
성한다.
7.2 정성시험
7.2.1 위의 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름
시간과 비교하여 일치 여부를 확인한다.
7.2.2 시험용액의 특성이온이 아래 표와 같이 확인되어야 하고 표준용액과 시험
용액 이온간 반응세기의 비(m/z 85 이온에 대한 m/z 68 이온의 백분율,
response ratio)를 비교하여 그 비가 ± 10 % 이내에서 일치하여야 한다.
물
질
멜 라 민
Precursor ion
(m/z)
Fragment ion
(m/z)
127
85
68
7.3 정량시험
정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험용액의 크로마토그램으로부터 m/z 85
이온의 피크높이 또는 피크면적을 검량선에 대입하여 정량한다.(정량한계 : 0.5 mg/kg)
멜라민의 함량(mg/kg) = C × V/S × D
C : 검량선에서 구한 멜라민의 농도 (μg/mL)
V : 시험용액의 최종 부피 (mL)
S : 시료 채취량 (g)
D : 시험용액의 희석배수
8. 참고문헌
8.1 식품공전, 식품의약품안전청(2009)
336
정밀검사발전연구회
VIII. 기타 시험법
붙임 1. 검사흐름도
시료 채취(1 g)
↓
물 5 mL을 넣어 검체를 습윤
아세토니트릴 5 mL
↓
Vortex & shaking(10 min)
Sonication(30 min)
↓
Centrifuge(2,600 g, 10 min)
Filter(0.45 μm nylon)
↓
정제 및 추출
(Oasis MCX(150 mg 함유, 6 mL용))
↓
표준물질 희석
↓
LC/MS/MS 분석
↓
계산 및 결과판정
정밀검사발전연구회
337
VIII. 기타 시험법
3
방사능
1. 분석원리
고순도 게르마늄 검출기로 측정한 표준선원의 방사능 에너지피크에 대응하는
동위원소를 검체의 방사능 피크에너지와 대조하여 동위원소표로부터 방사성 핵종을
확인한 후 각 핵종에 대한 방사능을 측정하는 방법이다.
2. 검사대상 및 기준
2.1. 검사대상
유가공품 및 식육추출가공품
2.2. 기준
검사항목
131
134
Cs +
기준
유 및 유가공품 150 Bq/kg
I
137
Cs
기타식품
300 Bq/kg
모든식품
370 Bq/kg
3. 장치
3.1 고순도 게르마늄 검출기
주기적으로 에너지 및 효율 교정을 실시한다.(부록 참조)
3.2 방사능 측정용 Marinelli beaker 450 mL 또는 1000 mL
3.3 Balance
4. 검체조제
4.1 검체가 분말인 경우 상면이 수평이 되도록 측정 용기에 압축하여 충진한 후 측
정한다.
4.2 검체가 액체인 경우 그대로 측정용기에 넣은 후 무게를 정밀히 달고 밀봉하여 측
정하거나 적당량으로 농축해 측정용기에 넣고 무게를 정밀히 달아 밀봉하여 측정
한다. 단, 원유인 경우 측정 중 부패로 인한 유정의 분리를 방지할 필요가 있을
때 포르마린(포름알데하이드 37 %용액)을 10 mL/L 비율로 첨가하여 측정한다.
338
정밀검사발전연구회
VIII. 기타 시험법
4.2.1 측정 중 부패의 우려가 있는 경우 포르마린(포름알데하이드 37 %용액)을
2 mL/kg, L 비율로 첨가하여 측정한다.
4.2.2 검체의 무게는 측정용기의 무게를 뺀 값을 사용한다.
5. 검사방법
5.1 방사능 핵종시험
5.1.1 측정장치의 전원을 가하고 기저방사능을 측정한다.
5.1.2 검체의 최소 측정시간은 10,000초로 한다. 측정조건에 따라 측정시간을 증
가시킬 수 있다.
5.1.3 기저방사능을 검체측정 전후로 측정하여 평균치를 취한다.
5.1.4 표준선원의 에너지피크를 구하고 측정에너지 범위가 0～2 MeV가 되도록 증
폭기의 게인을 조정한다. 필요한 경우 측정에너지 범위를 확대 또는 축소하
여도 좋다.
5.1.5 각 채널에 대응하는 에너지를 표준선원을 이용하여 교정한다.
5.1.6 차폐용기내의 검출기에 검체를 올려놓고 일정시간 방사능을 측정하여 스펙
트럼을 얻는다.
5.1.7 나타난 피크에너지에 대응하는 동위원소를 동위원소표의 피크에너지와 대
조하여 핵종을 찾는다.
5.2 방사능시험
5.2.1 5.1의 5.1.1～5.1.6을 행한다.
5.2.2 얻어진 스펙트럼을 참조하여
Ｉ-131[0.0802(2.6 %), 0.284(6.1 %), 0.364(81 %), 0.637(7.3 %) MeV]
Cs-134[0.569(15 %), 0.605(98 %), 0.796(85 %) MeV]
Cs-137[0.662(85 %) MeV]
에서 각 핵종에 대한 감마선 방출비율이 가장 큰 피크에너지(0.364, 0.605,
0.662 MeV)에서의 기저방사능이 제거된 순피크면적(S)을 구한다.
5.2.3 감마계수효율 ε은 측정할 검체와 같은 형상(가능하면 동일조성의 동일 형
상)으로 만들어진 표준선원에 따라 구한다.
5.2.4 이때 5개 이상의 에너지에 대한 효율 ε을 구하여 에너지와 효율과의 관계
그래프로부터 각 핵종에 대한 감마선 방출비율이 가장 큰 피크에너지에 대
한 계수효율을 구한다.
5.2.5 각 핵종에 대한 방사능은 다음식으로 산출한다.
정밀검사발전연구회
339
VIII. 기타 시험법
A(Bq/kg, L) =
S
εpt
×
1
SW(kg,L)
A : 각 핵종에 대한 방사능
S : 각 핵종에 대한 감마선 방출비율이 가장 큰 피크에너지의 기저방사능이
제거된 순피크면적
ε : 동에너지에서의 감마계수효율
p ：동에너지의 감마방출비율
t ：측정시간(초)
SW : 검체의 무게
6. 참고문헌
6.1 식품공전, 식품의약품안전청(2009)
340
정밀검사발전연구회
XI. 부
록
IX. 부
1
록
시약․시액 및 용량 분석용 규정시액
축산물의 가공기준 및 성분규격 제3. 축산물 시험방법 Ⅶ. 시약·시액·표준
용액 및 용량 분석용 규정시액 중 일부를 발췌한 것임
따로 규정이 없는 한 시험에 쓰는 시약․시액․표준용액 및 용량분석용 표준용액은
다음의 규격에 맞는 것을 쓴다.
시약․시액․표준용액 및 용량분석용 표준용액을 보존하는 유리용기는 용해도
및 알칼리도가 매우 낮고 납 및 비소를 될 수 있는대로 함유하지 아니하는 것을
쓴다.
1. 시약
시약은 따로 표시하지 아니한 것은 모두 최순품을 쓴다.
과망간산칼륨 KMnO4
과산화수소 H2O2
구연산
C6H8O7․H2O
구연산암모늄 (NH4)2HC6H5O7
규조토
글리세린 C3H8O3
α-나프틸아민 C10H7․NH2
N-1-나프틸에틸렌디아민염산염 C10H7NH(CH2)2NH2․HCl
뉴트랄레드
C15H17N4Cl
데히드로초산나트륨 C8H7O4Na․H20
둘신
C9H12N2O2
n-디메틸아미노벤즈알데히드 (CH3)2N․C2H4CHO
디아스타아제
디에틸디티오카바민산나트륨
디에틸포름아미드
디티존
(C2H5)2NCS2Na․3H2O
(C2H5)2NCOH
C6H5NHNHCSN․NC6H5
레소르신 C6H6C2
로다민B C28H31CIN2O3
메틸렌블루 C16H18N3CIS
메틸레드 C15H15O2N3
정밀검사발전연구회
343
IX. 부
록
메틸바이오렛 C25H30CIN3
메타인산
HPO3 35%이상
메탄올 CH3OH 95v/v%이상
무수삼산화비소 삼산화비소․무수와 같다.
무비소아연 아연․무비소와 같다.
무비소염산 염산․무비소와 같다.
무수아황산나트륨 아황산나트륨․무수와 같다.
무수에탄올 에탄올․무수와 같다.
무수초산나트륨 초산나트륨․무수와 같다.
무수탄산나트륨 탄산나트륨․무수와 같다.
무수탄산칼륨
탄산칼륨․무수와 같다.
무수황산나트륨 황산나트륨․무수와 같다.
무수황산동 황산동․무수와 같다.
바닐린
벤젠
C6H3CHO(OCH3)OH
C6H6 95 v/v% 이상
n-부탄올 CH3(CH2)2CHOH
붕산
H3BO3 99.5%
브롬티몰블루 C27H28O5Br2S
브롬크레졸그린 C21H14O5Br4S
브롬크레졸퍼플 C21H16O5Br2S
브롬페놀블루 C19H10O4Br4S
브롬화제이수은
브루신
HgBr2
C23H21N2O4
빙초산 CH3COOH 99～100%
사상아연 아연․사상과 같다.
사염화탄소 CCl4
사카린나트륨 C7H4NNaO3S․2H20
산화마그네슘
살리실산
MgO
HOC6H4COOH
삼산화비소․무수 As2O3
삼염화요오드
ICl3
석유벤젠
석유에테르
설파닌산 C6H7NO3S
설파민
344
C6H8O2N2S
정밀검사발전연구회
IX. 부
록
솔빈산나트륨 C6H7O2Na
수산
H2C2O4․2H2O 99.8% 이상
수산나트륨 Na2C2O4(표준시약)110℃에서 3시간 보존한 후 데시케이타(황산)에
서 식힌다.
수산암모늄 (NH4)2C2O4․H2O
수산화나트륨 NaOH
수산화칼륨
KOH
승화요오드 요오드․승화와 같다.
승화황 황․승화와 같다.
시안화칼륨 KCN
식용색소녹색제2호 C37H34O9N2S3Na2
식용색소녹색제3호 C37H34O10N2S3Na2
식용색소자색제1호 C39H40O6N3S2Na
식용색소적색제2호 C20H11O10N2S3Na3
식용색소적색제3호 C20H6O5I4Na2․H2O
식용색소청색제1호 C37H34O2N2S3Na2
식용색소청색제2호 C16H18O2S2Na2
식용색소황색제4호 C16H9O9N4S2Na3
식용색소황색제5호 C16H10O7N2S2Na2
실리카겔G
박층크로마토그래피용
실리콘수지
싸이클라민산나트륨 C6H11NHSO3Na
아밀알코올 C6H11OH
아밀알코올․이소 아밀알코올과 같다.
아세톤 CH3COCH3
아연․분말 Zn
아연․사상 Zn
아연․입상 Zn
아연․무비소 Zn
아질산나트륨 NaNO2
아황산나트륨․무수 Na2SO3
아황산수소나트륨 NaHSO3
안식향산나트륨 C7H5O2Na
알룸
황산알루미늄칼륨과 같다.
암바라이트 IR-120(H)
정밀검사발전연구회
345
IX. 부
록
야자유
에틸렌디아민테트라초산나트륨 C10H14N2Na2O8․2H2O
에틸에테르 C2H5OC2H5
에탄올
C2H5OH 95%이상
에탄올․무수 C2H5OH 99.5% 이상
에스테르 에틸에테르와 같다.
염기성푹신
염산 HCl
염산․희
염산 23.6㎖에 물을 넣어 100㎖로 한다. HCl 9.5 ～ 10.5 w/v %
염화나트륨 NaCl
염화나트륨(표준시약) NaCl 500～650℃에서 40～50분간 가열한 다음 데시케
이타(황산)에서 식힌다.
염화바륨 BaCl2
염화암모늄 NH4Cl
염화제이수은
염화제이철
HgCl2
FeCl3․6H2O
염화제일주석
요오드
SnCl2․2H2O
I2
요오드․승화 I2
요오드산칼륨 KIO3
요오드화나트륨
NaI
요오드화아연
ZnI2
요오드화칼륨
KI
유동파라핀 파라핀․유동과 같다.
이소아밀알코올 아밀알코올과 같다.
이소프로판올
(CH3)2CHOH
이황화탄소 CS2
인산
H3PO4
입상아연 아연․입상과 같다.
전분(약전품)
주석산
C4H6O6
주석산나트륨 Na2C4H4O6․2H2O
주석산칼륨나트륨 KNaC4H4O6․4H2O
질산 HNO3
질산․희
346
질산 10.5㎖에 물을 넣어 100㎖로 한다.
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IX. 부
록
질산납 Pb(NO3)2
질산수은 Hg(NO3)2․H2O
질산알루미늄 Al(NO3)3
질산암모늄 NH4NO3
질산은
AgNO3
질산칼륨 KNO3
철․환원
Fe
초산 CH3COOH 35%
초산․빙
빙초산과 같다.
초산․희 CH3COOH 6%
초산나트륨 CH3COONa․3H2O
초산나트륨․무수 CH3COONa
초산납 Pb(CH3COCO)2․3H2O
초산아연 Zn(CH3COO)2․2H2O
초산암모늄 CH3COONH4
초산에틸 CH3COOC2H5
초산제이동
Cu(CH3C00)2․H2O
티몰블루 C27H30O5S
티오황산나트륨 Na2S2O3․5H2O
카카오지
크로모트로프산 크로모트로산디나트륨과 같다.
크로모트로프산디나트륨
(HO)2C10H4(SO2Na)2
크롬산칼륨 K2CrO4
크리스탈바이오 메틸바이오와 같다.
클로로포름 CHCl3
키실렌
C6H4(CH3)2
탄산나트륨 Na2CO3․10H2O
탄산나트륨
Na2CO3(표준시약) 500～650℃에서 40～50분간 가열한 다음 데
시케이타(황산)에서 식힌다.
탄산나트륨․무수 Na2CO3
탄산수소나트륨 NaHCO3
탄산칼슘
CaCO3
탈지면(약전품)
톨루엔
C6H5CH3
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347
IX. 부
록
1․1․2-트리클로로에탄 CH2ClCHCl2
파라옥시안식향산부틸 C11H14O3
파라핀․유동
판크레아틴
페놀레드 C19H14O5S
페놀프탈레인 C20H14O4
페로시안화칼륨 K4Fe(CN)6
포르말린 HCHO 35.0～37.0을 함유한다.
푹신․염기성 염기성푹신과 같다.
피리딘
C5H5N
HOC6H2(NO2)3
피크린산
헥사민
C6H12N4
활성탄
황․승화
황산
S
H2SO4
황산․희
H2SO4․10%
황산나트륨 Na2SO4․10H2O
황산나트륨․무수 Na2SO4
황산동
CuSO4․5H2O
황산동․무수 CuSO4
황산마그네슘
MgSO4․7H2O
황산알루미늄칼륨
황화제이철
KAl(SO4)2․12H2O
Fe2(SO4)3․3H2O
황산칼륨 K2SO4
황화나트륨 Na2S․9H2O
황화수소 H2S
휘발류
무색투명하고 납이 함유되지 아니한 것
묽은염산 염산․희와 같다.
묽은질산 질산․희와 같다.
묽은초산 초산․희와 같다.
묽은황산 황산․희와 같다.
2. 시액
강암모니아시액 암모니아시액․강과 같다.
뉴트랄레드시액
348
뉴트랄레드 0.1g을 빙초산에 녹여 100㎖로 한다.
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IX. 부
뉴트랄레드․브롬티몰블루혼합시액
록
뉴트랄레드시액 및 브롬티몰블루혼합시액의
같은 양을 섞는다.
레소르신시액
레소르신 1g을 염산에 녹여 100㎖로 한다.
메틸렌블루시액 메틸렌블루 0.1g을 에탄올 100㎖로 녹이고 필요하면 여과한다.
메틸레드시액 메틸레드 0.1g을 에탄올 100㎖로 녹이고 필요하면 여과한다.
메틸바이오렛시액 메틸바이오렛 0.1g을 물 100㎖로 녹이고 필요하면 여과한다.
메틸렌오렌지시액 메틸오렌지 0.1g을 물 100㎖에 녹이고 필요하면 여과한다.
바닐린황산시액
바닐린 0.5g을 황산에 녹여 100㎖로 한다.
벨트란시액A
황산동의 순수한 결정 40g을 물에 녹여 1,000㎖로 한다.
벨트란시액B
주석산칼륨나트륨 200g 및 수산화나트륨 150g을 물에 녹여
1,000㎖로 한다.
벨트란시액C 황산제일철(과망간산칼륨액을 환원하여서는 아니된다) 50g을
적당량의 물에 녹여 황산 200㎖를 가하고 식힌 후 물을 가하여 1,000㎖로 한
다.
벨트란시액D
과망간산칼륨 5g을 물에 녹여 1,000㎖로 한다.
표정
수산화암모늄 0.2500g을 물 100㎖에 녹이고 황산 2㎖를 가하여 60～70℃
로 가열한 후 과망간산칼륨액으로 적정하고 그 적정량을 a ㎖라고 하면 이 액
1㎖는 Cu 0.2238/ag에 대응한다.
브롬티몰블루시액 브롬티몰블루 0.1g을 희에탄올(1+1) 100㎖에 녹이고 필요하
면 여과한다.
브롬크레졸그린시액 브롬크레졸그린 50㎎을 에탄올 100㎖에 녹이고 필요하
면 여과한다.
브롬크레졸그린․메틸레드혼합시액
브롬크레졸그린시액 및 메틸레드시액의
같은 양을 섞는다.
브롬페놀블루시액
브롬페놀블루 0.1g을 희에탄올(1+1) 100㎖에 녹이고 필요하
면 여과한다.
알루미나(Alumina)크림
냉포화명반(Alum)수용액에 리트머스지로 알카리성이
될 때까지 암모니아수를 가하여 침전을 얻고 이 침전을 염화바륨시액으로 황산이
온 반응이 나타나지 않을 때까지 경사법으로 씻고 과량의 물을 버리고 잔류크
림을 밀전하여 보존한다.
알코올성수산화칼륨시액 7.5w/v% 수산화칼륨용액 40㎖를 물 40㎖로 희석하고
에탄올을 가하여 1,000㎖로 한다.
암모니아시액 암모니아시액․강 10㎖에 물을 가하여 30㎖로 한다.
암모니아시액․강 암모니아수(28%이상)
정밀검사발전연구회
349
IX. 부
록
야자유비누액
정제야자유 50g, 에탄올 50㎖ 및 75w/v% 수산화칼륨용액 20㎖를 200㎖의 삼
각플라스크에 넣고 환류냉각기를 달아 조용히 가열하여 투명한 비누액으로
한 후 10분간 끓인다. 다음 에탄올을 날려 보내고 잔류한 비누액을 110℃의 건
조기에서 에탄올 냄새가 없어질 때까지 건조한 후 물에 녹여 500㎖로 한다.
염기성초산납용액
중성초산납 330g을 물 500㎖에 녹이고 산화납 110g을 혼
합하여 저어 섞으면서 30분간 끓인 후 식히고 상징액을 기울여 분리하여 사용
한다.
염화바륨시액
염화바륨 12g을 물에 녹여 100㎖로 한다.
염화제이철시액 염화제이철 5g에 염산 5㎖ 및 물을 넣어 용해하여 100㎖로 한다.
요오드화칼륨시액 요오드화칼륨 16.5g을 물에 녹여 100㎖로 한다. 이 액은 차
광하여 보존한다.
황화나트륨시액 황화나트륨 5g을 물 10㎖ 및 글리세린 30㎖의 혼액에 녹인다.
또는 수산화나트륨 5g을 물 30㎖ 및 글리세린 90㎖의 혼액에 녹여, 그 반용량
에 찰 때 황화수소를 포화시키고 여기에 나머지 반용량을 혼합시킨다.
차광한 병에 거의 가득 채워서 보존하고 만든 다음 3개월 이내에 사용한다.
위스시액
가. 요오드 13g을 빙초산 1ℓ에 녹이고 그 10㎖를 취하여 0.1N 티오황산나트
륨용액으로 적정하여 요오드의 농도를 결정하여 둔 다음 요오드용액에
정제 건조염소가스를 통하여 암갈색에서 담등황색으로 변할 때 이를 중
지하고 이 액 10㎖를 취하여 요오드화칼륨 10㎖ 및 물10㎖를 가하여
잘 섞고 0.1N 티오황산나트륨액으로 적정하여 이 측정치가 정확히 먼저
의 측정치의 2배가 되도록 한다.
측정치가 2배가 되지 않으면 염소가스를 더 통하고 2배가 넘으면 소
량 남겨둔 요오드용액을 가하여 조절한다.
나. 삼염화요오드 7.9g와 요오드 8.7g을 따로 따뜻한 빙초산에 녹인 후 혼합하
여 이에 빙초산을 가하여 1000㎖로 한다.
가. 또는 나.의 어느 방법에 의하여 만들어 사용하여도 좋으나 갈색병에 밀
전하여 어두운 곳에 보존한다.
전분시액
전분 1g를 찬물과 잘 섞고 이를 열탕 200㎖에 저어 섞으면서 천천히 가하고
액이 반투명하게 될 때까지 끓이고 방냉정치한 다음 상징액을 사용한다.
정제에텔
적당량의 에테르를 분액깔때기에 취하여 새로 만든 2%황산제일철용액을
에테르의 약 1/5용량 가하고 잘 흔들어 섞은 후 물층을 버린다. 이 조작을
350
정밀검사발전연구회
IX. 부
록
2%황산제일철용액의 물층이 황갈색을 나타내지 않을 때까지 되풀이 하고
에테르의 약 1/5 용량의 물로 2 ～ 3회 씻은 후 에틸층을 분취하여 무수황
산나트륨을 넣고 탈수한다. 다음 에테르를 증류플라스크에 옮기고, 분류관
을 붙여 증류한다. 초유액 약 10%를 버리고 플라스크내의 에테르가 약 10%
정도 남게 유액을 받아 밀전차광용기에 넣고 황산제일철(결정) 및 수산화
나트륨(입상)을 각각 소량씩 넣어 냉암소에 보관한다. 이액은 사용할 때
만든다.
중성초산납포화용액
중성초산납 250g을 물 500㎖에 녹여 여과한다. 산
또는 알카리를 함유할 때는 수산화나트륨용액 또는 초산으로 중화한다.
질산수은시액
염화제이수은 또는 질산제이수은을 물에 녹이고 이에 수산화나트륨용액을
소량씩 저어 섞으면서 가하여 산화제이수은을 완전히 침전시키고 감압여
과하여 침전물을 물로 여러번 씻은 후 그 1 ～ 2g을 비이커에 취하고 질산
은을 가하여 녹인 다음 30% 수산화나트륨용액을 소량씩 적가하여 과잉의
질산을 중화한다. 이때 새로 생긴 산화제이수은의 침전이 완전히 녹지 않게
될 때까지 물을 가하여 15 ～ 25㎖로 한다. 침전을 가라 앉힌 다음 상징액
을 사용한다. 이 액은 산성이면 아니된다.
초산시액(1N)
빙초산 5.8㎖에 물을 가하여 100㎖로 한다.
티몰블루시액 티몰블루 0.1g을 에탄올 100㎖에 녹이고 필요하면 여과한다.
카레스(Carrez)침전제 제1액 15%페로시안화칼륨용액, 제2액 30%황산아연용액
크롬산칼륨시액 크롬산칼륨 10g에 물을 가하여 100㎖로 한다.
페놀레드시액 페놀레드 0.1g을 에탄올 100㎖에 녹이고 필요하면 여과한다.
페놀프탈레인시액
페놀프탈레인 1g을 에탄올 100㎖에 녹인다.
페링시액A액
황산동(CuSO4․5H2O)34.64g을 물에 녹여 500㎖로 한 다음, 다음과 같이 표
정하여 둔다. A액 10㎖를 350㎖의 삼각플라스크에 취하고 물 40㎖, 30%
초산용액 4㎖ 및 50% 요오드화 칼륨용액 6㎖를 가하고 유리한 요오드를 전
분시액을 지시액으로 하여 0.1N 티오황산나트륨으로 적정한다.
F=
6.354×A×f
󰠏󰠏󰠏󰠏󰠏󰠏󰠏󰠏󰠏󰠏󰠏󰠏󰠏
174.8
F : A액의 역가
A : 0.1N 티오황산나트륨액의 소비량(㎖)
f : 0.1N 티오황산나트륨액의 역가, 이 역가는 1±0.005로 조정한다.
페링시액B액 주석산칼륨나트륨 173g과 수산화나트륨 50g에 물을 가하여 500㎖
로 한다.
정밀검사발전연구회
351
IX. 부
2
록
용액과 농도
용액의 농도
화학실험에서 주로 사용되는 용액의 농도는 몰농도, 퍼센트 농도, ppm, ppb
농도가 주로 사용된다.
몰농도
몰농도는 용액 1L (용매 1L가 아님)속에 포함된 화학종의 몰수이다. 몰농도
(molatity), M은 mol L   의 단위를 갖는다. 몰농도는 또한 용액의 밀리리터당 용
질의 밀리몰수를 나타낸다.
몰농도(M) = 용질의 수 = 용질의 수
용액의 수
용액의 수
(예제)
비타민 K 시험 전처리에 사용되는 0.8 M KH2PO4 완충용액 500 mL (pH
7.9-8.0)를 제조하는 방법은? (단, KH2PO4 MW=136 g/mol)
0.8 M = 0.8 mol / 증류수 1L
그러므로, 500 mL(0.5 L)를 제조하기 위해서는 0.4 mol에 해당하는 KH2PO4를
증류수 0.5L에 녹이면 된다.
0.4 mol × 136 g/mol = 54.4 g을 증류수 350 mL 증류수에 잘 녹이고, 40 %
KOH로 pH를 조정한 후, 500 mL 용량플라스크에 넣고 증류수로 용량을 맞춘다.
352
정밀검사발전연구회
IX. 부
록
퍼센트 농도
퍼센트(백분율)로 사용되는 3가지의 방법은 다음과 같다. 화학실험에서는 무게/
부피 퍼센트가 주료 사용된다.
무게퍼센트 (w/w) = 용질의무게 × 100
용액의무게
부피퍼센트 (v/v) = 용질의부피 × 100
용액의부피
무게 / 부피퍼센트 (w/v) = 용질의무게  × 100
용액의부피 
분모가 용매가 아닌 용액이라는 것에 주의해야 한다. 특징적으로, 무게퍼센트만
이 온도와 무관하다. 무게퍼센트는 시판용 수용액 시약을 나타내는데 자주 사용된
다. 예를 들어, 염산은 38% 용액으로 팔리고 있는데, 그것은 용액 100 g에 38 g의
HCL이 포함된 시약임을 의미 한다.
그림1. 시판되는 염산용액의 라벨 (시약의 라벨에는 분자량, 농도, 비중 등 다양한
정보들이 있다)
정밀검사발전연구회
353
IX. 부
록
부피퍼센트는 순수한 액체를 다른 액체로 묽혀 만든 용액의 농도를 나타내기
위하여 자주 사용된다. 예로서 5 % 메탄올 수용액(v/v)은 순수한 메탄올 5.0 mL를
물을 사용하여 100 mL로 묽혀 만들어진 용액을 말한다.
무게 / 부피퍼센트는 고체시약의 묽은 수용액의 조성을 나타내기 위하여 자주
사용된다. 예를 들면 아질산 이온 시험에 필요한 시액인 12 % zinc sulfate 수용액
은 zinc sulfate 12 g을 증류수에 녹여 100 mL로 묽혀 만들어진 용액이다.
ppm, ppb 농도
매우 묽은 용액에서 백만분율 (parts per million, ppm) 또는 십억분율(parts per
billion, ppb)은 농도를 표현하는 편리한 방법 중의 하나로 분석화학에서 많이 사용
된다.
ppm = 용질의무게 × 10⁶,
용액의무게
ppb = 용질의무게 × 109
용액의무게
밀도가 1.00 g/mL인 묽은 수용액에서 1 ppm = 1.00 μg/mL 또는 1.00 mg/L라는
것을 기억해 두면 계산하는데 많은 도움이 된다.
(예제)
소르빈산칼륨(Sorbic acid potassium salt) 10,000 ppm 농도, 100 mL를 제조하
는 방법 (Sorbic acid potassium salt의 분자량은 150.2 이고, K의 분자량은 39.1
이다)
1 ppm은 소르빈산칼륨 1 μg이 증류수 1mL에 녹아있는 것이다. 그러므로,
10,000 ppm = 10,000 μg/mL = 10 mg/mL = 1000 mg/100mL = 1.0 g/100mL이
다.
K의 영향을 감안하기 위해서 다음과 같이 계산하면,
1 g × Sorbic acid K salt의 분자량 (150.2) / Sorbic acid의 분자량 (111.1) =
1.35 g 즉, 1.35 g sorbic acid K salt를 취해야, 1.00 g sorbic acid에 해당하는
양이 되는 것이다.
요약하면, 소르빈산칼륨 1.35 g을 정밀하게 무게를 잰 후, 증류수 50 mL에 충
분히 녹이고 100 mL 용량플라스크에서 증류수로 채우면 된다.
354
정밀검사발전연구회
IX. 부
록
밀도와 용액의 비중
밀도와 비중은 분석에 관한 문헌에서 자주 사용된다. 물질의 밀도(density)는
단위부피당 질량이고, 반면에 비중(specific gravity)은 4℃에서 같은 부피의 물
의 질량에 대한 그 물질의 질량의 비이다. 미터계에서 밀도는 kg/L 또는 g/mL
단위를 갖는다. 비중은 단위가 없으므로 어떤 특정 단위계에 의존하지 않는다.
이러한 이유로 시판되는 상품에는 비중이 많이 사용된다. 물의 밀도는 대략
1.00 g/mL이며, 일부 진한 산과 염기의 비중이 표 1에 있다.
(예제)
비중이 1.42이고 70.5% HNO₃(w/w)용액에서 HNO₃의 몰농도를 계산하시오.
(HNO₃의 분자량은 63이다)
진한 산 용액의 리터당 g수를 구하면,
 
 
시약
₃
=  시약 ×
×
=
 시약
시약
 시약
 시약
 시약
c  =

 
 
 
×
=
≈ 16 M
시약
시약
 
즉, 70.5% HNO₃ 용액은 16 M 농도의 용액이다.
표 1 시판용 진한산과 염기의 비중
시약
농도,%(w/w)
비중
아세트산
99.7
1.05
암모니아
29.0
0.90
염산
37.2
1.19
플루오린화수소산
49.5
1.15
질산
70.5
1.42
과염소산
71.0
1.67
인산
86.0
1.71
황산
96.5
1.84
정밀검사발전연구회
355
22Ti
4족(4A)
23V
5족(5A)
24Cr
6족(6A)
7족(7A)
25Mn
26Fe
8족(8A)
27Co
9족(8A)
28Ni
10족(8A)
29Cu
11족(1B)
12족(2B)
30Zn
13족(3B)
Tc
Br
H
원자량
C
표
원자번호 원소기호
율
원소명
기
6C
14족(4B)
합성 원소
액체
기체
고체
7N
15족(5B)
8O
16족(6B)
9F
17족(7B)
18족(0)
2He
19K
39.0983
37Rb
5주기 루비듐
85.4678
55Cs
6주기 세슘
132.9054
87Fr
7주기 프란슘
(223)
4주기 칼륨
140.12
90Th
악티늄계열 토륨
232.0381
60Nd
144.24
92U
프로트악티늄 우라늄
231.0359
238.029
140.908
91Pa
프로메튬
(145)
93Np
넵투늄
237.048
61Pm
보륨
(264)
움
(266)
프라세오디뮴 네오디뮴
59Pr
58Ce
란탄계열 세륨
망간
54.9380
43Tc
테크네튬
(98)
75Re
레늄
186.207
107Bh
크롬
51.996
42Mo
몰리브덴
95.94
74W
텅스텐
183.85
106Sg
시보르기
사마륨
150.36
94Pu
플루토늄
(244)
62Sm
하슘
(269)
철
55.847
44Ru
루테늄
101.07
76Os
오스뮴
190.2
108Hs
유로퓸
151.96
95Am
아메리슘
(243)
63Eu
륨
(268)
코발트
58.9332
45Rh
로듐
102.906
77Ir
이리듐
192.22
109Mt
마이트네
가돌리늄
157.25
96Cm
퀴륨
(247)
64Gd
(271)
니켈
58.69
46Pd
팔라듐
106.42
78Pt
백금
195.08
110Uun
테르븀
158.925
97Bk
버클륨
(247)
65Tb
(272)
구리
63.546
47Ag
은
107.868
79Au
금
196.967
111Uuu
디스프로슘
162.50
98Cf
칼리포르늄
(251)
66Dy
(285)
아연
65.39
48Cb
카드뮴
112.41
80Hg
수은
200.59
112Uub
68Er
(289)
게르마늄
72.59
50Sn
주석
118.71
82Pb
납
207.2
114Uuq
32Ge
탄소
12.011
14Si
규소
28.0855
에르븀
167.26
100Fm
아인시타이늄 페르뮴
(252)
(257)
홀뮴
164.930
99Es
67Ho
갈륨
69.72
49In
인듐
114.82
81Tl
탈륨
204.383
113Uut
31Ga
바나듐
50.9415
41Nb
니오브
92.9064
73Ta
탄탈
180.9479
105Db
두브늄
(262)
티탄
47.88
40Zr
지르코늄
91.224
72Hf
하프늄
178.49
104Rf
러더퍼듐
(261)
20Ca
스칸듐
44.9559
39Y
이트륨
88.9059
57La
란탄
138.906
89Ac
악티늄
227.028
붕소
10.81
13Al
알루미늄
26.9815
베릴륨
9.01218
12Mg
마그네슘
24.305
칼슘
40.08
38Sr
스트론튬
87.62
56Ba
바륨
137.33
88Ra
라듐
226.025
5B
4Be
툴륨
168.934
101Md
멘델레븀
(258)
69Tm
비소
74.9216
51Sb
안티몬
121.75
83Bi
비스무트
208.980
115Uup
33As
질소
14.0067
15P
인
30.9738
이테르븀
173.04
102No
노벨륨
(259)
70Yb
?
셀렌
78.96
52Te
텔루르
127.60
84Po
폴로늄
(209)
116Uuh
34Se
산소
15.9994
16S
황
32.06
루테튬
174.967
103Lr
로렌슘
(260)
71Lu
브롬
79.904
53I
요오드
126.905
85At
아스타틴
(210)
117Uus
35Br
플루오르
18.9984
17Cl
염소
35.453
?
크립톤
83.80
54Xe
크세논
131.29
86Rn
라돈
(222)
118Uuo
36Kr
네온
20.1179
18Ar
아르곤
39.948
10Ne
4.00260
21Sc
3족(3A)
란탄계열
악티늄계열
주
d 궤도함수 원자
비금속
0족 기체
알칼리 토금속
전이금속
기타 금속
알칼리 금속
소
헬륨
2족(2A)
원
1.00794
3Li
2주기 리튬
6.941
11Na
3주기 나트륨
22.9898
1족(1A)
고
학
1주기 수소
1H
비
화
일 러 두 기
1. 본 편람은 「축산물의 가공기준 및 성분규격, 검역원고시」의 제3.
축산물 시험법의 참고자료입니다.
2. 본 편람에서 제시하고 있는 특정 시약 및 기기들의 상품명은 실험자
들이 참고할 수 있도록 기재된 것으로, 이와 동등하거나
그 이상의
제품을 사용할 수 있습니다.
축산물 성분규격 시험법 편람 ( 화학분석편 )
￭ 발 행 일 : 2010년 10월
￭ 발
행 : 농림수산식품부 국립수의과학검역원
￭ 발 행 인 : 이주호 (국립수의과학검역원장)
￭ 편집위원 : 위성환, 송성옥, 조수연, 권진욱, 이미순, 박재우,
박지성, 정두경, 김신희, 오동환, 박미영, 조미란,
조시현, 김현정, 곽현정, 서정대, 김효정
￭ 발 행 처 : 국립수의과학검역원 축산물규격과
￭ 주
소 : (우)430-757, 경기 안양시 만안구 안양로 175
☎ 031)467-1992
￭ 홈페이지 : www.nvrqs.go.kr
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