Comments
Description
Transcript
topo mdx - Dipartimento di Farmacia
GIORNATA PUGLIESE su FARMACO E PRODOTTI per la SALUTE II EDIZIONE “IL FARMACO PER DIAGNOSI PRECOCI E MALATTIE RARE” DOTTORATO IN SCIENZE BIOCHIMICHE E FARMACOLOGICHE Sezione di Farmacologia Capogrosso Roberta Francesca Bari, 25 Febbraio 2011 Sezione di Farmacologia Dipartimento Farmaco-Biologico Facoltà di Farmacia DOTTORATO IN SCIENZE BIOCHIMICHE E FARMACOLOGICHE Sezione di Farmacologia Dottorandi Roberta CAPOGROSSO Teresa COSTANZA Valeriana SBLENDORIO Gianluca GRAMEGNA Gianluigi CANNONE Roberta CARBONARA Antonia SCARAMUZZI Sara CALZOLARO Maria CANNONE Dottorato in Scienze Biochimiche e Farmacologiche Sezione di farmacologia Dottorato in Scienze Biochimiche e Farmacologiche Sezione di farmacologia PRINCIPALI METODOLOGIE STUDI IN VIVO in modelli animali -trattamenti farmacologici cronici -modelli animali Æ topo mdx Æ topi transgenici Æ ratto depletato di K+ Æ roditore sospeso -gabbie metaboliche -elettromiografia -Misuratore della forza muscolare degli arti di roditore -traedmill orizzontale Dottorato in Scienze Biochimiche e Farmacologiche Sezione di farmacologia PRINCIPALI METODOLOGIE Ex-vivo – in vitro ELETTROFISIOLOGIA -Microelettrodi intracellulari Æ parametri di cavo Æ potenziale d’azione Æ soglia meccanica di contrazione -"Hille- Campbell" voltage clamp Æ correnti ioniche in fibre muscolari isolati -Patch Clamp Æ correnti ioniche in cellule native e linee cellulari Dottorato in Scienze Biochimiche e Farmacologiche Sezione di farmacologia PRINCIPALI METODOLOGIE CITOFLUORIMETRIA IN IMAGING -Determinazione dell’omeostasi del calcio in cellule native e linee cellulari ORGANO ISOLATO -Contrazione del muscolo scheletrico -Contrazione del muscolo liscio Dottorato in Scienze Biochimiche e Farmacologiche Sezione di farmacologia PRINCIPALI METODOLOGIE BIOLOGIA MOLECOLARE E BIOCHIMICA -Real-time PCR: espressione genica -DNA ricombinante e mutagenesi -colture cellulari e trasfezione di proteine -Spettrometria in cuvette e piastre 96-pozzi - ELISA Dottorato in Scienze Biochimiche e Farmacologiche Sezione di farmacologia MODELLI ANIMALI E STUDI FARMACOLOGICI PRE-CLINICI IN VIVO ED EX VIVO Modelli animali genetici di malattie rare topo mdx topo adr topi transgenici Modelli indotti e/o secondari roditore sospeso ratto ipocalemico miopatie da farmaci (statine) Dottorato in Scienze Biochimiche e Farmacologiche Sezione di farmacologia MODELLO GENETICO TOPO MDX Paziente DMD e topo mdx: stesso difetto genetico e biochimico Totale assenza della proteina distrofina, che conferisce stabilità meccanica alla fibra muscolare durante la contrazione Normale Distrofico Dottorato in Scienze Biochimiche e Farmacologiche Sezione di farmacologia Il topo mdx esercitato mostra i tipici i marcatori molecolari, morfologici e funzionali di danno muscolare che si osservano nei pazienti DMD Farmaci che bersagliano eventi patologici + Approccio multidisciplinare Marcatori della patologia Valutazione effetto terapeutico Meccanismi patogenetici Identificazione di nuovi bersagli ..durante il dottorato ¾ Valutazione dell’efficacia di trattamenti farmacologici: saggi funzionali in vivo, in vitro, ex vivo utilizzo di appropriati strumenti da laboratorio ¾ Ricerca bibliografica ¾ Valutazione critica di lavori scientifici ¾ Seminari e congressi UNIVERSITA’ DEGLI STUDI DI BARI ALDO MORO Dottorato in Scienze Biochimiche e Farmacologiche Sezione di Farmacologia, Dip. Farmaco-Biologico EFFETTO DELL’ESERCIZIO E DI TRATTAMENTI FARMACOLOGICI SULLE PROPRIETA’ CONTRATTILI DEI MUSCOLI DI TOPO DISTROFICO MDX, MODELLO ANIMALE DELLA DISTROFIA MUSCOLARE DI DUCHENNE: CORRELAZIONE CON GLI INDICI FUNZIONALI, BIOCHIMICI E MORFOLOGICI DELLA PATOLOGIA PER LA VALIDAZIONE IN TEST FARMACOLOGICI PRE-CLINICI Docente guida: Prof.ssa Annamaria De Luca Dottoranda: Capogrosso Roberta Francesca Dottorato in Scienze Biochimiche e Farmacologiche Sezione di farmacologia Studi in vivo Studi ex vivo Dottorato in Scienze Biochimiche e Farmacologiche Sezione di farmacologia Nella DISTROFIA MUSCOLARE DI DUCHENNE (DMD) ¾ Parametri Contrattili Alterati Dalla Patologia ¾ Efficacia di trattamenti farmacologici In Vivo su muscoli isolati di topi mdx MDX: modello animale della DMD Dottorato in Scienze Biochimiche e Farmacologiche Sezione di farmacologia MUSCOLO DIAFRAMMA Forza di contrazione tetanica Forza di contrazione singola wt mdx wt mdx wt mdx MUSCOLO EDL wt mdx PARAMETRI CONTRATTILI ALTERATI DALLA PATOLOGIA Dottorato in Scienze Biochimiche e Farmacologiche Sezione di farmacologia CONTRAZIONE ECCENTRICA wt mdx SUSCETTIBILITA’ DELLE FIBRE DISTROFICHE ALLO STRETCH MECCANICO INDOTTO DA CONTRAZIONE ECCENTRICA Dottorato in Scienze Biochimiche e Farmacologiche Sezione di farmacologia DIFFERENZE FUNZIONALI TRA CONDIZIONE PATOLOGICA E CONTROLLO J Appl Physiol 106: 1311-1324, 2009 Multiple pathological events in exercised dystrophic mdx mice are targeted by pentoxifylline: outcome of a large array of in vivo and ex vivo tests Rosa Burdi,1,* Jean-François Rolland,1,* Bodvael Fraysse,1 Karina Litvinova,1 Anna Cozzoli,1 Viviana Giannuzzi,1 Antonella Liantonio,1 Giulia Maria Camerino,1 Valeriana Sblendorio,1,2 Roberta Francesca Capogrosso,1 Beniamino Palmieri,2 Francesca Andreetta,3 Paolo Confalonieri,3 Leonarda De Benedictis,4 Monica Montagnani,4 and Annamaria De Luca1 Forza di contrazione tetanica Forza di contrazione singola wt mdx Mdx + PTX wt mdx Mdx + PTX Dottorato in Scienze Biochimiche e Farmacologiche Sezione di farmacologia Effetti specifici dei farmaci sulle proprietà contrattili … TRATTAMENTO FARMACOLOGICO CON RESVERTAROLO wt mdx Mdx + Resveratrolo wt mdx nessun effetto su parametri contrattili… Mdx + Resveratrolo Dottorato in Scienze Biochimiche e Farmacologiche Sezione di farmacologia TRATTAMENTO FARMACOLOGICO CON RESVERTAROLO mdx wt mdx Mdx+ Resveratrolo Effetto del trattamento con Resveratrolo sui livelli di anione superossido a livello muscolare e sui livelli di Creatina Chinasi plasmatica Sezione di Farmacologia Dipartimento Farmaco-Biologico Facoltà di Farmacia PARTECIPAZIONE A SEMINARI E CONGRESSI … societa' italiana di farmacologia Seminario nazionale dottorandi XV TELETHON CONVENTION Palazzo dei Congressi – Riva del Garda March 9-11, 2009 CLUB "PONTIGNANE e PONTIGNANI"