brilliant green bile broth (bgbb)

BRILLIANT GREEN BILE BROTH (B.G.B.B.)
INDICAZIONI
Terreno utilizzato per la ricerca e il conteggio dei coliformi, dei coliformi termo-tolleranti e di Escherichia coli (test di
Mackenzie) in latte, prodotti a base di latte e altri prodotti alimentari, acque potabili e acque di scarico.
STORIA
La ricerca e lo sviluppo di un terreno di coltura che fosse in grado di inibire microrganismi diversi dai batteri coliformi ha
lungamente interessato i microbiologi. Nel 1926, Dunham e Schoenlein cercarono di scoprire quali percentuali di bile e
verde brillante potessero fornire i migliori risultati. Jordan dimostrò che questo terreno era migliore del brodo lattosato
per la ricerca dei coliformi nelle acque.
MacCrady e Langevin utilizzarono soddisfacentemente il brodo alla bile e verde brillante per la ricerca dei batteri
coliformi nel processo di pastorizzazione del latte. Mackenzie notò che la concentrazione di verde brillante era in grado
di inibire con sufficiente efficacia la crescita di anaerobi che fermentano il lattosio, soprattutto Clostridium perfringens.
PRINCIPI
- La simultanea presenza di bile bovina e verde brillante inibisce quasi tutti i microrganismi Gram-positivi e i batteri
Gram-negativi diversi dai coliformi.
- La concentrazione di verde brillante è stata appositamente determinata per impedire la crescita di anaerobi che
fermentano il lattosio a 44°C, evitando così i falsi positivi.
- Lo sviluppo dei batteri coliformi è indicato dalla presenza di torbidità e dalla produzione di gas nelle campanule di
Durham, dovuto alla fermentazione del lattosio.
- E’ possibile aggiungere al terreno il supplemento M.U.G. (4-metilumbelliferil-ß-D-glucuronide) per isolare Escherichia
coli (consultare la scheda tecnica relativa al prodotto M.U.G. Supplement S024-70-K).
PREPARAZIONE
Terreno a singola concentrazione
- Sciogliere 40,0 g di terreno disidratato in 1 litro di acqua distillata o deionizzata.
- Agitare con cura fino a completa soluzione.
- Distribuire in provette da 16 x 160 mm contenenti una campanula di Durham.
- Sterilizzare in autoclave a 121°C per 15 minuti.
- Dopo il raffreddamento le campanule di Durham non dovrebbero contenere aria intrappolata.
Terreno a doppia concentrazione
- Sciogliere 80,0 g di terreno disidratato in 1 litro di acqua distillata o deionizzata.
- Agitare con cura fino a completa soluzione.
- Distribuire 10 mL in provette da 20 x 200 mm (senza campanula di Durham).
- Sterilizzare in autoclave a 121°C per 15 minuti.
ISTRUZIONI PER L’USO
Terreno a singola concentrazione
- Trasferire nelle provette 1 mL dell’inoculo e le sue diluizioni seriali.
Terreno a doppia concentrazione
- Trasferire nelle provette 10 mL dell’inoculo.
- Coprire con un tappo di agar sterile (Agar batteriologico di tipo E), mantenuto fuso a 47°C.
Incubazione
- Per i batteri coliformi, incubare per 24 e 48 ore a 30 o 37°C in base al protocollo analitico.
- Per i batteri coliformi termo-tolleranti, incubare per 24 e 48 ore a 44°C.
- Trasferire un’ansa della coltura a doppia concentrazione in una provetta contenente il brodo a singola concentrazione
e incubare per ulteriori 24-48 ore prima di eseguire la lettura.
RISULTATI
La fermentazione del lattosio, che induce la produzione di gas nelle campanule di Durham (volume almeno uguale a
1/10 del volume della provetta) in meno di 48 ore, indica la presenza di batteri coliformi.
I batteri possono essere identificati mediante sub-colture della provetta che produce gas su un idoneo terreno agarizzato:
- Bromcresol Purple Lactose Agar (M 023-17-K)
- E.M.B Agar (M056-17-K).
La presenza di Escherichia coli può essere confermata eseguendo il test di Mackenzie. A tale scopo:
- Inoculare un’ansa dalla provetta dove si è osservata produzione di gas in una provetta di B.G.B.B. contenente una
campanula di Durham e una ulteriore ansata in una provetta di Peptone Water (M084-17-K).
- Incubare a 44 ± 0,5°C in bagnomaria per 24 e 48 ore.
In queste condizioni, Escherichia coli evidenzia simultaneamente le seguenti caratteristiche:
- crescita su B.G.B.B.: positiva con produzione di gas.
- produzione di indolo (reagente di Ehrlich-Kovacs): positiva.
COMPOSIZIONE TIPICA (rettificabile per ottenere un rendimento ottimale)
Per 1 litro di terreno:
- Triptone ...................................................................................................... 10,0 g
- Bile bovina batteriologica................................................................................... 20,0 g
- Lattosio....................................................................................................... 10,0 g
- Verde brillante............................................................................................... 13,3 mg
pH del terreno pronto per l’uso a 25°C: 7,2 ± 0,2.
500 g di polvere consentono la preparazione di 12,5 litri di terreno.
CONTROLLO DI QUALITA’
- Terreno disidratato: polvere di colore verdastro, omogenea e priva di grumi.
- Terreno preparato: soluzione verde, limpida.
- Tipica risposta della coltura dopo 24-48 ore di incubazione a 30°C:
Microrganismi
ATCC ®
Escherichia coli
ATCC ®
Enterobacter cloacae
ATCC ®
Citrobacter freundii
Enterococcus faecalis
Staphylococcus aureus
ATCC ®
ATCC ®
Crescita
Produzione di gas
25922
buona-eccellente
positiva
13047
buona-eccellente
positiva
43864
buona-eccellente
positiva
29212
parzialmente inibita
negativa
25923
inibita
CONSERVAZIONE/STABILITA’
- Terreno disidratato:
2-30°C.
la data di scadenza è indicata sull’etichetta.
- Provette preparate (valore indicativo): 3 mesi a 2-8°C, al riparo dalla luce.
BIBLIOGRAFIA
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Dunham, and Schoenlein. 1926. Stain technology, 1: 129.
Jordan. 1927. J. American Water Works Association, 18: 337.
McCrady, and Langevin. 1932. J. Dairy Science, 15: 321.
Mackenzie, E.F.W., Taylor, W.E., and Gilbert, W.E. 1948. Recent experiments in the rapid identification of Bacterium coli type I. J. Gen. Microb., 2: 197-204.
Journal Officiel (French) du 21 Septembre 1968. Méthode de prélèvement et d’ analyse bactériologique des glaces et crèmes glacées (arrêté du 30 Août
1968).
NF V 45-110. June1981. Fish products. Enumeration of faecal coliforms in conchological waters and in living shell fishes.
Rodier, J. 1984. L’analyse de l’eau. Dénombrement des coliformes, coliformes fécaux, et Escherichia coli présumés. Dunod 7ème Ed: 793-798.
NF V 04-015: February 1984. Dried milk and sweetened condensed milk. Microbiology.
NF T 90-413. October 1985: Testing water. Detection and enumeration of coliforms and thermotolerant coliforms. General method by culture in liquid media
(MPN).
FIL-IDF 73 A: 1985. Milk and milk products. Enumeration of coliforms. Colony count technique and most probable number technique at 30° C.
NF ISO 4831. July 1991. Microbiology. General guidance for the enumeration of coliforms. Most probable number technique.
PRESENTAZIONE
BRILLIANT GREEN BILE BROTH (B.G.B.B.)
Confezione
Codice
500 g (12,5 litri di terreno finale)
M002-17-K
Le informazioni e le specifiche contenute in questa scheda tecnica, datate 29.09.1999, sono suscettibili di modifica in qualsiasi momento, senza preavviso. Le
informazioni trascritte sull'etichetta del prodotto sono prioritarie rispetto alle formulazioni o alle istruzioni descritte in questo documento.