Espressione dei risultati per analisi Microbiologiche

Espressione dei risultati per
analisi Microbiologiche
Denis Polato
Distribuzione dei batteri
Denis Polato
Distribuzione dei batteri
Denis Polato
Incertezza di misura
Per comprendere al meglio la teoria e la pratica di una
misurazione, da cui ci aspettiamo risultati oggettivi e
rigorosi, bisogna conoscere li concetto fondamentale
di INCERTEZZA.
Il valore di una caratteristica numerica è
sempre incerto
La conoscenza dell’ampiezza di tale incertezza è
indispensabile per utilizzare al meglio i risultati delle
misure.
Denis Polato
Denis Polato
UNI CEN ISO/IEC 17025
Denis Polato
ISO 17025
Denis Polato
UNI ENV ISO 13843
Denis Polato
UNI ENV ISO 13843
Denis Polato
UNI ENV ISO 13843
Denis Polato
Poisson
P= probabilità
X= numero atteso
λ= numero medio di individui contati
Denis Polato
Esempi Poisson
Distribuzione di Poisson
20
18
16
14
%
12
10
5
8
6
4
2
0
1
3
5
7
9
11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 55 57 59 61
N° batteri
Distribuzione di Poisson
20
18
16
14
%
12
10
10
8
6
4
2
0
1
3
5
7
9
11
13
15
17
19
21
23
25
27
29
31
33
35
37
39
41
N° batteri
Distribuzione di Poisson
20
18
16
14
%
12
10
35
8
6
4
2
0
1
3
5
7
9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 55 57 59 61
N° batteri
Denis Polato
UNI EN ISO 8199
Denis Polato
UNI EN ISO 8199
Conteggio di colonie ≥20
Nel caso di numero di colonie ≥20, il risultato finale con l’intervallo di
fiducia al 95% di probabilità sarà dato da:
 Z
2 Z
Cs ± 95% IF = 
±
 × Vs
Vtot Vtot 
Cs= risultato
Z= n. TOT di colonie contate
Vtot= volume tot filtrato
Vs= volume refertato
Dove il numero 2 è l’approssimazione del fattore di copertura (1,96), per il livello
di probabilità del 95%.
Distribuzione di Poisson
20
18
16
95%
14
%
12
10
35
8
6
4
2
0
1
3
5
7
9
11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 55 57 59 61
N° batteri
Denis Polato
UNI EN ISO 8199
Conteggio di colonie < 20
Nel caso di Z compreso tra 10 e 19 si aggiungono alla formula delle
correzioni utili a compensare l’asimmetria della distribuzione di Poisson:
Z + 2 ± 2 Z +1
IF 95% = 
 × Vs
Vtot


Distribuzione di Poisson
20
18
16
14
%
12
10
10
8
6
4
2
0
1
3
5
7
9
11
13
15
17
19
21
23
25
27
29
31
33
35
37
39
41
N° batteri
Denis Polato
UNI EN ISO 8199
Conte > 20
Conte tra 10 e 20
 Z
2 Z
Cs ± 95% IF = 
±
 × Vs
Vtot
Vtot


 Z + 2 ± 2 Z +1 
IF 95% = 
 × Vs
Vtot


Denis Polato
UNI EN ISO 8199
•Nel caso di numero di colonie tra 4 e 9, la precisione
diminuisce quindi il risultato calcolato con la formula, viene
espresso come “UFC stimate/volume di campione” senza
associare il valore dell’incertezza di misura.
Denis Polato
UNI EN ISO 8199
• Nel caso di numero di colonie da 1 a 3, la precisione è
così bassa che il risultato dovrebbe essere riportato senza un
dato numerico, ma con l’espressione: “microrganismi
presenti nel volume analizzato”; in base ad accordi con il
cliente, anche in questo caso si può esprimere il dato
numerico come“UFC stimate/volume di campione”, senza
associare il valore dell’incertezza di misura.
Denis Polato
Caso che può trarre in inganno!!!!!!
Batteri coliformi a 37°C:
Numero stimato 5 UFC/100nl
Conta di colonie a 22°C:
5 UFC/ml
incert. 3 ÷ 9
Spiegazione:
La conta a 22°C è un metodo che viene eseguito in doppio (lettura su 2 piastre)
Es.
Piastra 1: leggo 5 colonie
Piastra 2: leggo 5 colonie
Somma = 10 UFC
La ISO 8199 dice che se ho letto 10 colonie posso esprimere un’incertezza
 Z + 2 ± 2 Z +1
IF 95% = 
 × Vs
Vtot


Denis Polato
Caso che può trarre in inganno!!!!!!
Il risultato è la media: 10/2= 5 UFC/ml
 Z + 2 ± 2 Z +1 
Incertezza: IF 95% = 
 × Vs
Vtot


9,3
10 + 2 ± 2 10 + 1 
IF 95% = 
 ×1
2


12 ± 6,6 
IF 95% = 
×1

 2 
2,7
Quindi:
Conta di colonie a 22°C
5 UFC/ml inc. 3 ÷ 9
Denis Polato
Tutti questi aspetti sono indicati nel
documento U.RP.K022
Protocollo validazione metodi di prova
Denis Polato
Es di esiti di campioni e frasi sul R. di P.
1) Tutti i parametri con valori 0 oppure <1 UFC/x ml
Denis Polato
2) Uno o più parametri con valori da 1 ÷ 9 UFC/x ml
Denis Polato
2) Uno o più parametri con valori da 1 ÷ 9 UFC/x ml
Verrà inserita la seguente nota tecnica quando avremo:
“numero stimato”
“La stima si basa su quanto riportato nel documento Arpa "Protocollo validazione
metodi di prova U.RP.K022" e nelle Norme UNI EN ISO 8199: 2008 e UNI ENV
ISO 13843:2003”
Denis Polato
3) Uno o più parametri con valori da 19 ÷ 10 UFC/x ml
Denis Polato
4) Uno o più parametri con valori > di 20 UFC/x ml
Denis Polato
Es di altre note tecniche presenti sui R. di P.
NOTE TECNICHE
Si segnala la presenza di particellato amorfo sulla membrana di filtrazione.
Si segnala sul terreno Agar Lattosato + TTC (utilizzato per la determinazione del
parametro Escherichia coli) la presenza di un significativo quantitativo di colonie (….
UFC/100 ml) con caratteristiche non corrispondenti al parametro ricercato.
All’atto della consegna del campione in questione è stata riscontrata l’assenza del
campione testimone, non è stato quindi possibile effettuare il controllo della
temperatura in ingresso; per tale motivazione si omette dichiarazione di
conformità/non conformità.
Si evidenzia che non è indicata la temperatura dell’acqua al momento del
campionamento. Si segnala che all’atto della consegna del campione in questione, è
stata rilevata una temperatura del boccetto testimone di ……°C. Per tanto si omette
emissione di dichiarazione di conformità/non conformità.
Denis Polato
Grazie per l’attenzione
Denis Polato