Document 3-Attività insetticida di Neem cake nei confronti di

DIPARTIMENTO DI AGRARIA
SEZIONE DI PATOLOGIA VEGETALE ED ENTOMOLOGIA
UNIVERSITA’ DEGLI STU DI SASSARI
Attività insetticida di Neem cake nei
confronti di Culicoides vettori di agenti
virali di specie animali da reddito
Cipriano Foxi & Gavino Delrio
NEEM: PIANTA MULTIUSO DEL XXI SECOLO
Roma, 21 giugno 2013
Attività insetticida di Neem Cake nei confronti di Culicoides vettori di agenti virali di specie animali da reddito
Culicoides
Famiglia: Ceratopogonidae
Lunghi meno di 2,5 mm
Apparato boccale pungente succhiante
Antenne multiarticolate
Ali con nervature ridotte
Presenza di maculature nelle ali
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Attività insetticida di Neem Cake nei confronti di Culicoides vettori di agenti virali di specie animali da reddito
Il genere Culicoides (Diptera, Ceratopogonidae)
Ceratopogonidae)
comprende alcune specie vettrici di virus.
In Italia sono stati segnalati come vettori del virus della lingua
blu degli ovini (Bluetongue) e del virus di Schmallenberg
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Attività insetticida di Neem Cake nei confronti di Culicoides vettori di agenti virali di specie animali da reddito
Bluetongue
Malattia infettiva non contagiosa che nelle pecore può causare
morbilità del 50
50--70
70%
% e mortalità del 2020-50
50%
%.
L’agente eziologico è un RNA
RNA--Virus appartenente alla famiglia
sierotipi.
Reoviridae
Reoviridae,, genere Orbivirus, del quale si conoscono 26 sierotipi.
Nel periodo 20002000-2002 in Sardegna ha causato la morte di 119
119..495
pecore e l’abbattimento di altre 373.
373.499.
499.
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Attività insetticida di Neem Cake nei confronti di Culicoides vettori di agenti virali di specie animali da reddito
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Ciclo
La femmina di Culicoides imicola depone
le uova in ambienti umidi in mucchietti di
60-70 elementi e schiudono in 2-3 giorni.
Le larve sono apode, vermiformi e nuotano
con caratteristici movimenti anguilliformi.
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Focolai larvali
Le larve di Culicoides si sviluppano
principalmente in ambienti umidi inquinati
da escrementi animali e probabilmente si
nutrono di microorganismi
microorganismi..
In Sardegna i focolai larvali sono molto
diffusi nel territorio;
territorio; nelle singole aziende
zootecniche sono però localizzati in punti
ben definiti
definiti..
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Attività insetticida di Neem Cake nei confronti di Culicoides vettori di agenti virali di specie animali da reddito
35
30
30
25
20
larve
pupe
profondità
20
15
10
10
5
0
0
80
60
40
20
0
50
Distanza dalla riva (cm)
100
150
Profondità dell'acqua (cm)
N° larve e pupe /100 ml di fango
Distribuzione di larve e pupe di Culicoides
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Mezzi di lotta
La lotta contro C. imicola non è risolutiva per
il controllo della Bluetongue ma può dare
un’importante
contributo
riducendo
le
popolazioni dell’insetto e quindi la probabilità
della trasmissione del virus.
La lotta deve basarsi
interventi integrati:
su
1. Manipolazione dell’habitat
2. Controllo chimico
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una
serie
di
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Manipolazione dell’habitat
I focolai larvali possono essere eliminati:
1- bonificando le perdite d’acqua vicino agli
abbeveratoi;
2- tracciando canali di scolo;
3-migliorando le condizioni igieniche degli
allevamenti.
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Controllo chimico
Adulti:
a)trattamenti insetticidi nelle stalle e negli
ambienti frequentati dagli animali
b)trattamenti con repellenti sugli animali a base
di Deltametrina, Cialotrina, Cipermetrina (metodo
Pour-on)
Larve:
trattamenti insetticidi nei siti di riproduzione
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Attività insetticida di Neem Cake nei confronti di Culicoides vettori di agenti virali di specie animali da reddito
Valutazione dell’efficaccia
dell’efficaccia di Neem Cake
su larve di Culicoides
Biosaggi in laboratorio
Prove in pieno campo
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Biosaggi in laboratorio
Tossicità in laboratorio su larve di Culicoides in
acqua di:
• GreeNeem Cake
• Oikos 25 Plus (azadirachtina A + B, 2,5%)
• Vectobac 12 AS (B. thuringiensis 1,2%)
Tossicità di estratti di Neem Cake
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Biosaggi in laboratorio
larve estratte da campioni di fango
10 larve
4 repliche
20 ml di soluzione insetticida
testimone (acqua)
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Biosaggi in laboratorio
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CL50 e intervalli di confidenza di alcuni insetticidi saggiati
su larve di Culicoides tenute per 7 giorni in una soluzione
con acqua
Insecticides
No.
concentrations
used
LC50 (ml/l or g/l)
(95% LC)
Slope ± S.E.
ҳ2
df (P)
Neem Cake
6
0.37 (0.25-0.48)
2.54 ± 0.43
35,32
1 (<0,0001)
Oikos 25 Plus
(azadirachtin A+B, 2.5%)
5
0.51 (0.31-0.69)
3.00 ± 0.51
34,72
1 (<0,0001)
Vectobac 12 AS
(B.t israeliensis , 1.2%)
4
1.06 (0.73-1.29)
4.22 ± 0.87
23,27
1 (<0,0001)
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Attività insetticida di Neem Cake nei confronti di Culicoides vettori di agenti virali di specie animali da reddito
Analisi del Neem cake
NEEM CAKE - sottoprodotto dell’estrazione a
freddo dell’olio dai semi di Neem (Azadirachta indica)
Contiene residui di
Azadirachtina A:
2750 ppm ± 100 ppm
Azadirachtina B:
1000 ppm ± 15 ppm
Salanina:
7980 ppm ± 50 ppm
Nimbina:
1850 ppm ± 100 ppm
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Attività insetticida di Neem Cake nei confronti di Culicoides vettori di agenti virali di specie animali da reddito
Efficacia di estratti di Neem su larve di Culicoides tenute
per 7 giorni in una soluzione con acqua (tutte le soluzioni sono
state saggiate alla concentrazione di 50 ppm)
N° larve morte dopo 7 giorni
(Media ± Dev. St.) (1)
% efficacia rispetto al
testimone dopo 7 giorni (2)
dopo 7 gg
dopo 7 gg
Control
0,25 ± 0,5 (a)
Hp (estratto in esano)
9,00 ± 0,0 (b)
95,90
Ep (frazione in acetato di etile)
9,75 ± 0,5 (b)
98,97
1 ± 1,41 (a)
7,69
0,25 ± 0,5 (a)
0
Wp (frazione acquosa)
Bp (frazione in butanolo)
(1) i dati sulla stessa colonna seguiti dalla stessa lettera non sono statisticamente significativi per p = 0,05
(analisi della varianza; test LSD)
(2) efficacia stimata con la formula di Abbott
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Attività insetticida di Neem Cake nei confronti di Culicoides vettori di agenti virali di specie animali da reddito
Effetto di diverse frazioni derivanti dal frazionamento su
acqua..
colonna cromatografica di Ep su larve di Culicoides in acqua
(tutte le soluzioni sono state saggiate alla concentrazione di 50 ppm)
Control
N° larve morte (Media
± Dev. St.) (1)
% efficacia rispetto al
testimone (2)
dopo 7 gg
dopo 7 gg
0,75 ± 0,95 a
Neem 1
10 ± 0 c
100,00
Neem 2
3,75 ± 0,96 b
32,43
Neem 3
1 ± 1,41 a
2,70
Neem 4
0,5 ± 0,58 a
0,00
Neem 5
1±2a
2,70
Neem 6
1 ± 1,15 a
2,70
Neem 7
0±0a
0,00
Neem 8
0,25 ± 0,5 a
0,00
(1) i dati sulla stessa colonna seguiti dalla stessa
lettera non sono statisticamente significativi per
p = 0,05 (analisi della varianza; test LSD)
(2) efficacia stimata con la formula di Abbott
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Attività insetticida di Neem Cake nei confronti di Culicoides vettori di agenti virali di specie animali da reddito
Effetto di diverse frazioni derivanti dal frazionamento su
colonna cromatografica di Neem 1 su larve di Culicoides in
acqua
acqua.. (tutte le soluzioni sono state saggiate alla concentrazione di 50 ppm)
Control
N° larve morte (Media
± Dev. St.) (1)
% efficacia rispetto al
testimone (2)
dopo 7 gg
dopo 7 gg
0±0a
Neem 1
4,75 ± 1,5 c
47,50
Neem 2
0,75 ± 0,96 ab
7,50
Neem 3
4,5 ± 1,29 c
45,00
Neem 4
10 ± 0 d
100,00
Neem 5
9 ± 1,15 d
90,00
Neem 6
1,75 ± 0,96 b
17,50
(1) i dati sulla stessa colonna seguiti dalla stessa
lettera non sono statisticamente significativi per
p = 0,05 (analisi della varianza; test LSD)
(2) efficacia stimata con la formula di Abbott
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Attività insetticida di Neem Cake nei confronti di Culicoides vettori di agenti virali di specie animali da reddito
Metaboliti noti presenti nelle 6 frazioni
(Neem deposito estratto totale 100 g)
Frazione
Peso
AZADIRACTINA
(mg)
NIMBINA
(mg)
SALANINA
(mg)
F1
0,73
1,24
3,21
0,00
F2
5,80
8,12
15,66
0,00
F3
2,10
1,34
0,00
0,00
F4
1,00
1,1
0,00
0,00
F5
0,76
0,00
0,00
0,00
F6
8,40
22,68
445,2
537,60
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Concentrazione dei metaboliti nelle
soluzioni 50 ppm utilizzate per le prove
AZADIRACTINA
(ppm)
NIMBINA
(ppm)
SALANINA
(ppm)
F1
0,085
0,22
0,00
F2
0,07
0,135
0,00
F3
0,032
0,00
0,00
F4
0,055
0,00
0,00
F5
0,00
0,00
0,00
F6
0,135
2,65
3,20
Frazione
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Attività insetticida di Neem Cake nei confronti di Culicoides vettori di agenti virali di specie animali da reddito
Conclusioni
Biosaggi in laboratorio
Neem Cake ha dimostrato un’ottima attività insetticida
nei confronti delle larve di Culicoides.
Sono state trovate diverse frazioni del Neem Cake con
una buona efficacia antilarvale contenenti bassissime
concentrazioni di azadiractina ma non i metaboliti salanina
e nimbina
nimbina..
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Attività insetticida di Neem Cake nei confronti di Culicoides vettori di agenti virali di specie animali da reddito
Prove di lotta in campo
Prove di lotta in campo in focolai larvali di Culicoides con:
• Neem Cake (100 g/m2)
• Oikos 25 Plus (0.3 ml/m2)
• Vectobac G (2 g/m2)
Dosi consigliate dalle ditte produttrici
Data of emerged were compared using a repeated measures analysis of variance
(ANOVA), performed with the Generalized Linear Mixed Model (GLMM) procedure
Dipartimento di Agraria, Sezione di Patologia vegetale ed Entomologia
Attività insetticida di Neem Cake nei confronti di Culicoides vettori di agenti virali di specie animali da reddito
Zone umide
permanenti in
un’azienda
zootecnica sita nel
comune di Sassari
Specie
LA laghetto
20 cm sopra LA laghetto
LA pozzanghera
1.82 ± 0.44 bB
3.57 ± 0.67 aAB
7.52 ± 1.53 aA
12.51 ± 2.76 aA
1.90 ± 0.57 abB
1.41 ± 0.42 bB
C. festivipennis
6.19 ± 1.40 aA
0.77 ± 0.33 bB
9.11 ± 2.58 aA
C. imicola
0.11 ± 0.05 cB
6.32 ± 2.42 aA
0.01 ± 0.01 cB
C. sahariensis
8.80 ± 2.04 aA
4.00 ± 0.95 aAB
1.29 ± 0.68 bcB
C. cataneii
C. circumscriptus
Le larve di C. imicola si trovano principalmente nel fango sino a 50
cm dalla linea d’acqua (LA) dei laghetti aziendali.
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Attività insetticida di Neem Cake nei confronti di Culicoides vettori di agenti virali di specie animali da reddito
Blocco randomizzato con parcelle di
1 m2 e 4 replicazioni.
200
cm
50
cm
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Efficacia valutata stimando il
numero di adulti di Culicoides
sfarfallati da un campione di
fango di 800 ml.
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Prove di lotta in campo
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Numero medio di adulti di Tipulidi, Psicodidi e Ceratopogonidi
sfarfallati in 28 giorni da un campione di fango
Treatment
Tipulidae *
Psychodidae *
107.21 (17.52) a
Ceratopogonidae *
Control
4.08 (0.94) a
129.04 (18.41) a
Vectobac G
3.42 (1.04) ab
47.29 (13.50) ab
101.00 (27.29) a
Oikos 25 Plus
2.50 (1.19) ab
58.63 (6.74) ab
88.75 (8.72) a
GreeNeem Cake
0.25 (0.25) b
44.21 (9.44) b
20.92 (5.82) b
P
0.0281
0.0270
0.0004
F (3, 12 df)
4.30
4.36
13.43
* = i dati sulla stessa colonna seguiti dalla stessa lettera non sono
statisticamente significativi per p = 0,05 (GLMM)
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Numero medio di adulti di Culicoides sfarfallati in 28 giorni da un
campione di fango (P = 0.0000; F3,12 = 25,33)
post-treatment
Treatment
pre-treatment
a
after 7 days b
after 14 days b
after 21 days b
after 28 days b
Control
27.25 ± 9.51 a
44.13 ± 5.81 a
30.58 ± 8.42 a
23.92 ± 4.20 a
22.42 ± 1.85 a
Vectobac G
28.25 ± 9.11 a
25.88 ± 3.99 a
18.50 ± 3.23 a
24.29 ± 5.10 a
26.58 ± 4.94 a
Oikos 25 Plus
25.71 ± 4.24 a
17.75 ± 1.80 a
25.00 ± 3.40 a
19.88 ± 0.34 a
20.63 ± 1.48 a
GreeNeem
Cake
17.63 ± 3.56 a
3.88 ± 1.69 b
4.00 ± 1.47 b
3.75 ± 1.16 b
9.25 ± 1.86 b
i dati sulla stessa colonna seguiti dalla stessa lettera non sono statisticamente
significativi per p = 0,05 (GLMM)
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Numero medio di adulti di Culicoides cataneii, C. circumscriptus e
C. imicola sfarfallati in 28 giorni da un campione di fango.
Treatment
C. cataneii *
C. circumscriptus *
C. imicola *
Control
52.71 ± 12.45 a
21.29 ± 3.01 a
12.29 ± 2.23 a
Vectobac G
47.88 ± 18.19 a
20.67 ± 11.16 a
8.42 ± 1.61 a
Oikos 25 Plus
43.75 ± 8.19 a
17.00 ± 2.30 a
7.00 ± 0.91 a
4.63 ± 1.55 b
4.08 ± 1.82 b
1.75 ± 0.66 b
GreeNeem Cake
P
0.0011
0.0133
0.0004
F (3, 12 df)
10.56
5.47
13.61
* = i dati sulla stessa colonna seguiti dalla stessa lettera non sono
statisticamente significativi per p = 0,05 (GLMM)
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Conclusioni
Prove di lotta in campo
Le prove in campo, effettuate nel sito di sviluppo larvale preferenziale di C.
imicola, hanno dimostrato la possibilità di controllare le popolazioni larvali di
questa specie.
specie.
Vectobac (B. thuringiensis) e Oikos 25 Plus (AZA A+B
A+B)) non sono risultati
efficaci nel ridurre le densità larvali di Culicoides.
Neem Cake alla dose di 100 g/m2 è risultato molto efficace nel ridurre gli
sfarfallamenti di adulti di Culicoides con un’azione che si è protratta per
almeno un mese
mese..
L’efficacia di Neem cake è probabilmente dovuta alla presenza di
metaboliti ancora da determinare e la lunga persistenza d’azione potrebbe
dipendere dal lento rilascio di queste sostanze attive nel fango
fango..
Dipartimento di Agraria, Sezione di Patologia vegetale ed Entomologia
“Un Culicoides rappresenta una curiosità entomologica,
mille Culicoides possono rappresentare l’inferno”
Kettle, 1962
Grazie per la vostra attenzione!