SIMT-IO 003 Modalità CQ su emocomponenti

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SIMT-IO 003 Modalità Operativa CQ
S.I.M.T. Viterbo
Direttore Dr.ssa Tiziana Riscaldati
Prima Stesura
Redattori: Gasbarri, De Agelis, Rizzo
Data:
15-02/2013
SIMT-IO 003
MODALITA’ OPERATIVA DI CQ
Indice
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DESCRIZIONE ATTIVITÀ ............................................................................................ 2
RESPONSABILITA’ .................................................................................................... 10
BIBLIOGRAFIA ........................................................................................................... 10
INDICATORI ............................................................................................................... 10
Stato delle Modifiche
.
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SIMT-IO 003 Modalità Operativa CQ
S.I.M.T. Viterbo
Direttore Dr.ssa Tiziana Riscaldati
1 DESCRIZIONE ATTIVITÀ
A ) Unità di Eritrociti Concentrati Privi di Buffy-coat con aggiunta di
soluzione additiva ( SAG-M )
Parametro da
controllare
HCT
Emoglobina
Contenuto Leucociti
x Unità
Qualità richiesta
Da 0.50 a 0.70
Minimo 43 gr/unità
< 1,2 X 109
Frequenza dei
controlli
10 unità mese
10 unità mese
10 unità mese
• Il controllo di qualità viene eseguito da Tecnico di Laboratorio Biomedico
indicato dal Calendario mensile
• Il Controllo di qualità viene effettuato su campione ottenuto da tubicino
segmentato con recupero dell’unità testata per uso trasfusionale.
Preparazione dell’Emocomponente da sottoporre a Controllo di Qualità.
L’emocomponente viene centrifugato e separato da plasma e Buffy-coat tramite
processazione con apparecchio OPTIPRES.
Dopo aver aggiunto la soluzione additiva e accurata miscelazione, le emazie
concentrate ottenute, vengono pesate su bilancia di precisione e conservate a
temperatura controllata compresa tra + 2° e + 6°cen tigradi.
Metodologia per l’effettuazione dei controlli.
L’unità di Emazie Concentrate, da sottoporre a C.d.Q., viene riportata a
temperatura ambiente e lasciata riposare per 1 ora e successivamente posta in
agitazione per 10’
Mentre l’unità è mantenuta in agitazione si eseguono una serie ( almeno 10 ) di
strip con svuotamento e riempimento del tubicino lungo connesso alla stessa.
Al termine il tubicino, opportunamente riempito, viene saldato in modo da
ottenerne un segmento satellite contenente almeno 1000 l. di prodotto che verrà
trasferito in una provetta vuota.
A parte viene preparata una provetta con 1000 l. di isoton fisiologica ed
effettuata una diluizione ½ del prodotto precedentemente trasferito nella provetta
vuota.
Il campione ottenuto opportunamente agitato viene sottoposto ad esame e
lettura con conta globuli ADVIA eseguendo inoltre il calcolo secondo la formula di
seguito indicata.
Volume EC.=
Peso netto dell’unità ( al netto dei 30 grammi della sacca )
---------------------------------------------------------------------------1.06
Peso specifico E.C.
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Esempio :
• Peso netto unità in esame di E.C. = 298 gr. ( 328 gr. Peso unità – 30 gr. Peso
sacca)
• Valori risultanti dalla lettura al conta globuli :
Ht
29.5 % che corretto con il fattore di diluizione 2X sarà del 59%
Hb
9 gr/dl che corretto con il fattore di diluizione 2X sarà 18gr/dl
WBC 2.15 X 103 che corretto con il fattore di diluizione 2X sarà 4.3 X 103
298
• Volume E.C. = ------- = 279 ml.
1.06
Pertanto :
Leucociti residui : 4.3 X 106 X 279 = 1200 X 106 ovvero 1.2 X 109
Emoglobina : 18 X 2.79 dl. = 50.22 gr Hb.
B) Unità di piastrine random ( PLT )
Parametro da
controllare
Conta PLT
Cellule Residue
Qualità richiesta
> 60 X109
< 0.05 X 109
Frequenza dei
controlli
10 unità mese
10 unità mese
• Il controllo di qualità viene eseguito da Tecnico di Laboratorio Biomedico
indicato dal Calendario mensile
• Il Controllo di qualità viene effettuato su campione ottenuto da tubicino
segmentato con recupero dell’unità testata per uso trasfusionale.
Preparazione dell’Emocomponente da sottoporre a Controllo di Qualità.
Una unità di sangue intero, conservata a temperatura controllata compresa tra +20°
e + 24° centigradi, viene sottoposta a centrifugazi one in modo da consentire la
sedimentazione del Buffy-coat che conterrà sia le piastrine che i leucociti.
Il Buffy-coat così ottenuto, attraverso procedimento a circuito chiuso, viene trasferito
in una sacca satellite e successivamente processato attraverso una nuova
centrifugazione che separerà le piastrine dai leucociti ottenendo un concentrato
piastrinico che, sempre con procedimento a circuito chiuso, sarà trasferito in una
ulteriore sacca satellite.
Nell’effettuazione del procedimento porre particolare attenzione a lasciare il tubicino
di collegamento della sacca sufficientemente lungo per poter permettere il controllo di
qualità.
Il prodotto, così ottenuto, sarà pesato con bilancia di precisione e conservato in
agitazione ad una temperatura di circa 22° centigra di.
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Metodologia per l’effettuazione dei controlli.
Mentre l’unità è mantenuta in agitazione si eseguono una serie ( almeno 10 ) di
strip con svuotamento e riempimento del tubicino lungo connesso alla stessa.
Al termine il tubicino, opportunamente riempito, viene saldato in modo da
ottenerne un segmento satellite contenente almeno 1000 l. di prodotto che verrà
trasferito in una provetta vuota.
A parte viene preparata una provetta con 1000 l. di isoton fisiologica ed
effettuata una diluizione ½ del prodotto precedentemente trasferito nella provetta
vuota.
Il campione ottenuto opportunamente agitato viene sottoposto ad esame e lettura
con conta globuli ADVIA eseguendo inoltre il calcolo secondo la formula di seguito
indicata:
Volume PLT.=
Peso netto dell’unità ( al netto dei 30 grammi della sacca )
---------------------------------------------------------------------------1.03
Peso specifico PLT.
Esempio :
• Peso netto unità in esame di PLT. = 71 gr. ( 101 gr. Peso unità – 30 gr. Peso
sacca)
• Valori risultanti dalla lettura al conta globuli :
PLT. 522 che corretto con il fattore di diluizione 2X sarà del 1044 X 103 ml
WBC.1.25 X 103 che corretto con il fattore di diluizione 2X sarà 2.5 X 103 ml
71
• Volume PLT = ------- = 68.9 ml.
1.03
Pertanto :
Conta PLT : 1044 X 68.9 = 7191,6 ovvero 71.9 X 109 PLT
Leucociti residui : 2.5 X 68.9 = 172.25 ovvero 0.17 X 109 WBC
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C) Calcolo dell’Hb libera su Unità di Emazie Concentrate prive di Buffy-coat
prossime alla scadenza.
Parametro da
controllare
Hb libera
Qualità richiesta
< 0.8% della massa
eritrocitaria
Frequenza dei
controlli
5– 10 unità mese
• Il controllo di qualità viene eseguito da Tecnico di Laboratorio Biomedico
indicato dal Calendario mensile il giorno della scadenza dell’Unità
• Il Controllo di qualità viene effettuato su campione ottenuto da tubicino
segmentato con recupero dell’unità testata senza il recupero per uso
trasfusionale dell’Unità la quale sarà scaricata sul sistema gestionale come “
controllo di qualità “ il giorno antecedente alla scadenza.
Preparazione dell’Emocomponente da sottoporre a Controllo di Qualità.
L’emocomponente, prossimo alla scadenza di utilizzo, è una normale Unità di
E.C. priva di Buffy-coat a suo tempo preparata e conservata come da
“preparazione punto A “
Metodologia per l’effettuazione dei controlli.
L’unità di Emazie Concentrate da sottoporre a C.d.Q. viene riportata a
temperatura ambiente e lasciata riposare per 1 ora e successivamente posta in
agitazione per 10’.
Mentre l’unità è mantenuta in agitazione si eseguono una serie ( almeno 10 ) di
strip con svuotamento e riempimento del tubicino lungo connesso alla stessa.
Al termine il tubicino opportunamente riempito viene saldato in modo da
ottenerne un segmento satellite contenente almeno 2000 l. di prodotto che verrà
trasferito in una provetta vuota.
A parte viene preparata una provetta con 1000 l. di isoton fisiologica ed
effettuata una diluizione ½ del prodotto precedentemente trasferito nella provetta
vuota.
Il campione ottenuto opportunamente agitato viene sottoposto ad esame e
lettura con conta globuli ADVIA .
Il resto del campione rimasto viene centrifugato per 3 minuti a 3000 giri per
ottenere il sopranatante di plasma contenente l’Hb libera da misurare.
Per la determinazione dell’Hb libera viene utilizzato lo strumento Plasma/Low Hb
Fotometro della Ditta EMOCUE, utilizzando microcouvette specifiche per la
misurazione.
Il calcolo viene poi eseguito nel rispetto della formula di seguito indicata:
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% Emolisi.=
g/dl Hb X ( 1 – EVF )
-------------------------------- X 100
B Hb
Legenda :
g/dl.Hb. – Lettura dell’emoglobina al Fotometro
EVF
- Ematocrito dell’Unità di E.C./100 il cui valore viene ricavato
dall’emocromo e moltiplicato per il fattore di diluizione ( X 2 )
BHb
- Valore dell’emoglobina dell’Unità il cui valore viene ricavato
dall’emocromo e moltiplicato per il fattore di diluizione ( X 2 )
D) Valutazione del pH sulle Unità Piastriniche Random ( PLT da singolo
Buffy-coat )
Parametro da
controllare
pH. su singola
Unità
Qualità richiesta
Valore tra 6.4 e 7.4
Frequenza dei
controlli
5 – 10 unità mes
• Il Controllo di qualità viene eseguito da Tecnico di Laboratorio Biomedico
indicato dal Calendario mensile il giorno della scadenza dell’Unità
• Il Controllo di qualità viene effettuato direttamente sull’Unità e quindi senza il
recupero della stessa per uso trasfusionale scaricandola sul sistema gestionale
come “ controllo di qualità “ il giorno antecedente alla scadenza.
Preparazione dell’Emocomponente da sottoporre a Controllo di Qualità.
L’emocomponente di cui si deve valutare il Ph, prossimo alla scadenza di utilizzo,
è una normale Unità di Concentrato Piastrinico da singolo Buffy-coat. a suo tempo
preparata e conservata come da “preparazione punto “B “
Metodologia per l’effettuazione dei controlli.
Per la determinazione del pH. viene utilizzato apposito apparecchio RAPIDLAB –
1265 (EmogasAnalisi) presso U.O. di Rianimazione .
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E) Controlli di sterilità sugli Emocomponenti
La probabilità di contaminazione batterica è maggiore sulla preparazione di Unità
di PLT rispetto agli altri Emocomponenti a causa della loro più alta temperatura di
conservazione che favorisce la proliferazione batterica. Pertanto la scelta degli
Emocomponenti da testare per sterilità và individuata preferibilmente sulle Unità di
Concentrati Piastrinici.
Parametro da
controllare
Batteri aerobi
Batteri anaerobi
Miceti
Qualità richiesta
Sterilità
Sterilità
Sterilità
Frequenza dei
controlli
8-10 unità
mese
8-10 unità mese
8-10 unità mese
Metodologia per l’effettuazione dei controlli.
Le Unità di PLT, confezionate in apposito contenitore ed accompagnate dalla
richiesta firmata dal Dirigente Biologo in servizio, vengono inviate presso il
Laboratorio Analisi di Microbiologia dopo averle scaricate dal sistema gestionale
alla voce “ Prove di Sterilità “.
F) Unità di eritrociti privi di Buffy-Coat in SAG-M di gruppo O Neg. destinate
alla procedura di congelamento.
Parametro da
controllare
Volume
Emoglobina
Sterilità
Gruppo
Sanguigno
•
•
•
Qualità Richiesta
> di 185 ml.
> di 36 g./Unità
Sterile
0 Neg. Kell Neg.
Frequenza dei
controlli
Tutte le unità
Tutte le unità
A Campione
Tutte le unità
Il controllo viene eseguito dal Tecnico di Laboratorio Biomedico che si occupa
della procedura di congelamento delle sacche di Emazie.
Il CQ per Hb viene effettuato su campione ottenuto da tubicino segmentato
utilizzando la stessa procedura (menzionata al paragrafo A) per le unità di E.C.
prive di Buffy-Coat. Tale procedura viene eseguita dopo aver centrifugato la sacca
di sangue e aver allontanato il SAGM.
Il controllo del gruppo, fenotipo e Kell, va eseguito con metodica su colonna,
utilizzando il segmento della sacca da congelare.
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G) Unità di eritrociti concentrati di gruppo 0 Neg. congelate con glicerolo
sottoposte a scongelamento.
Parametro da
controllare
Hb libera
Qualità Richiesta o
Tipo
<
0,2
gr/unità
scongelata
Frequenza
dei
controlli
Tutte le Unità
Il controllo dell’Hb libera viene eseguito sulla sacca scongelata e deglicerizzata
utilizzando un segmento della stessa.
Il contenuto (circa 1 ml.) va centrifugato in provetta e dal surnatante va misurata
l’Hb libera tramite emoglobinometro dedicato.
Per la metodologia di effettuazione del CdQ si rimanda al punto C deve è
espresso il calcolo dell’Hb. Libera su unità di E.C. prive di buffy-Coat prossime alla
scadenza.
H) PLASMA FRESCO CONGELATO: Determinazione Fattore VIIIc
Parametro da
controllare
Fattore VIIIc
RBC
WBC
PLT
Qualità Richiesta
≥ 70%
<6x109L
<0,1x109L
<50x109L
Frequenza dei
controlli
10 unità al mese
4 al mese
4 al mese
4 al mese
La determinazione del fattore VIIIc, eseguita su sacche di plasma prima del
congelamento e dopo 3 mesi dal congelamento, viene eseguita presso il Laboratorio
Analisi dell’Ospedale Belcolle.
I campioni di plasma da inviare al laboratorio vengono così preparati:
• Centrifugazione sacca SI
• Spremitura con li separatore e ottenimento della sacca di plasma
• Trasferimento di una quantità di plasma (circa 5cc) nella sacca satellite
destinata alle piastrine (durante la spremitura).
• Riempimento con la sacca satellite delle 2 relative provette etichettate in
precedenza presso la sala prelievi con il barcode della donazione.
• Le provette utilizzate sono quelle degli esami della coagulazione (Tappo
Verde), a cui viene preventivamente tolto il sodio citrato.
• Invio in laboratorio della provetta per la determinazione del fattore VIIIc pre
congelamento utilizzando il modulo SIMT-MOD 003.
• Congelamento della seconda provetta seguendo la stessa procedura della
ralativa sacca di plasma.
• Trascrizione dei risultati precongelamento sul modulo SIMT-MOD 014.
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I) Unità di PLT da Aferesi
Parametro da
controllare
PLT
WBC
STERILITA’
Qualità Richiesta
>200x109
<1x106
STERILE 24h
Frequenza dei
controlli
TUTTE
TUTTE
A CAMPIONE
Tutte le unità di PLT da Aferesi vanno sottoposte ai CQ sopra richiesti, con le stesse
modalità operative già illustrate nel punto B relativo alle unità di PLT random. Al momento
dell’esecuzione dei calcoli del Volume, va utilizzato il peso della sacca da aferesi che
corrisponde a 50 grammi e il peso specifico che è di 1,058.
Per il controllo della sterilità a 24h (vedi SIMT-POS 012) viene utilizzata la piccola sacca
satellite che viene inviata al Laboratorio di Microbiologia, utilizzando il modulo di richiesta
SIMT-MOD 003.
L) POOL di PLT da BC
Per le modalità di campionamento necessarie all’esecuzione dei CQ fare riferimento alla
SIMT-IO 002.
• Al primo campione ottenuto dopo l’assemblaggio va determinata la conta di PLT
tramite emocromo (Dil. 1:2 ADVIA 2120), tale valore è utile per confronare la
differenza di concentrazione di PLT rispetto alla resa finale.
• Al secondo campione prelevato dal POOL definitivo va determinata la conta di PLT
tramite emocromo ( Dil 1:2 ADVIA 2120).
• Viene determinato il peso lordo della sacca (tara 54gr.)
• Con i dati ottenuti dal secondo campione viene determinata la resa finale tramite il
seguente calcolo:
Peso sacca – Tara (54gr.)
Volume= _______________________
Peso specifico (1.058)
Conta PLT= PLT x Fatt. Dil. (2) x Volume x1011
I valori ottenuti del Volume e della Resa finale di PLT vengono inseriti su Emonet (SIMTIO 002).
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2 RESPONSABILITA’
Responsabilità: le responsabilità per le attività e gli operatori previsti nella presenta
procedura sono indicate dalla seguente tabella secondo la priorità:
C = Collabora, R = Responsabile
Attività
Scelta emocomponente da
sottoporre a CQ
Preparazione
emocomponente da
sottoporre a CQ
Esecuzione test CQ
Valutazione risultati CQ
Inserimento risultati su
sistema informatico
[TLSB]
[BIOLOGO]
C
R
R
-
R
-
R
R
R
3 BIBLIOGRAFIA
UNI EN ISO 9001: 2008 - § 8.3 “ Tenuta sotto controllo dei prodotti non conformi “
UNI EN ISO 9001: 2008 - § 8.4 “ Azioni correttive e preventive “
DECRETI APPLICATIVI L 219/ 2005
DDM 3 MARZO 2005
LEGGE 261/2007
D Lgs 207/208 del 2007
R 95(15) 17° edizione
Standard SIMTI ed 2010
4 INDICATORI
Vedi Tabelle Cap. DESCRIZIONE ATTIVITA’
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