ethyl violet azide broth

ETHYL VIOLET AZIDE BROTH
INDICAZIONI
Terreno utilizzato per l’esecuzione dei test di conferma nella ricerca e nel conteggio degli streptococchi fecali nelle
acque potabile e di scarico, alimenti congelati e altri prodotti alimentari mediante il metodo MPN. L’intero procedimento
prevede due fasi:
- test presuntivo in Azide Dextrose Broth,
- test di conferma in Ethyl Violet Azide Broth.
STORIA
Questo terreno è stato formulato secondo le raccomandazioni di Litsky, Malmann e Fifield, che analizzarono l’attività di
diversi coloranti e sostanze selettive per formulare un terreno di conferma per gli streptococchi. Gli autori modificarono
successivamente la formula originale riducendo le concentrazioni di glucosio e aumentando quella del violetto di etile.
I risultati indicarono che il terreno ottenuto era sufficientemente specifico per gli enterococchi e che il violetto di etile
inibiva i pochi ceppi di bacilli sporulanti e cocchi Gram-positivi diversi dagli streptococchi fecali che generavano falsi
positivi in Azide Dextrose Broth.
PRINCIPI
- La selettività del terreno nei confronti degli enterococchi è dovuta alla presenza di violetto di etile e sodio azide, che
inibiscono la crescita dei bacilli Gram-negativi e delle specie Gram-positive sporulanti.
- Il polipeptone e il glucosio apportano gli elementi nutritivi necessari per lo sviluppo degli enterococchi.
- I fosfati tamponano il terreno e mantengono costante il pH.
- Il cloruro di sodio preserva l’equilibrio osmotico del terreno.
PREPARAZIONE
-
Dissolvere 35,7 g di terreno disidratato in 1 litro di acqua distillata o deionizzata.
Agitare lentamente fino a completa soluzione.
Distribuire in provette aliquote di 10 mL.
Sterilizzare in autoclave a 121°C per 15 minuti.
ISTRUZIONI PER L’USO
- Trasferire un’ansata di una brodocoltura positiva in Azide Dextrose Broth in una provetta di Ethyl Violet Azide Broth.
- Incubare a 37°C per 24 e 48 ore.
RISULTATI
La presenza degli streptococchi fecali è indicata dalla comparsa di una leggera torbidità e/o dalla formazione di un
deposito violetto sul fondo della provetta. Quando il pellet violetto si deposita, la torbidità del terreno può risultare
appena accennata.
Effettuare il conteggio utilizzando il metodo del numero più probabile (MPN).
COMPOSIZIONE TIPICA (rettificabile per ottenere un rendimento ottimale)
Per 1 litro di terreno:
- Polipeptone ............................................................................................. 20,0 g
- Glucosio ................................................................................................... 5,0 g
- Sodio cloruro.............................................................................................. 5,0 g
- Fosfato di potassio ....................................................................................... 2,7 g
- Fosfato di dipotassio ..................................................................................... 2,7 g
- Sodio azide................................................................................................ 0,3 g
- Violetto di etile.......................................................................................... 0,5 mg
pH del terreno pronto per l’uso a 25°C: 6,8 ± 0,2.
500 g di polvere consentono la preparazione di 14,0 litri di terreno.
CONTROLLO DI QUALITA’
- Terreno disidratato: polvere beige, omogenea e priva di grumi.
- Terreno pronto: soluzione di colore ambra, limpida.
- Tipica risposta della coltura dopo 24-48 ore di incubazione a 37°C:
Microrganismi
Enterococcus faecalis
Enterococcus faecalis
Streptococcus pyogenes
Staphylococcus aureus
Bacillus subtilis
ATCC ®
ATCC ®
ATCC ®
ATCC ®
ATCC ®
33186
Crescita
Buona-eccellente
29212
19615
Buona-eccellente
Inibita
25923
Inibita
6633
Inibita
CONSERVAZIONE/STABILITA'
- Terreno disidratato:
2-30°C.
La data di scadenza è indicata sull’etichetta.
- Terreno pronto (valore indicativo): 6 mesi a 2-8°C.
BIBLIOGRAFIA
- Litsky, W., Mallmann, W.L., and Fifield, C.W. 1953. A new medium for the detection of enterococci in water. Am. J. Public Health, 43 (7): 873.
- Litsky, W., Mallmann, W.L., and Fifield, C.W. 1955. Comparison of the most probable numbers of Escherichia coli and enterococci in river waters. Am. Jour.
Public Health, 45 (2): 1049.
- Larkin, E.P., Litsky, W., and Fuller, J.E. 1955. Fecal streptococci in frozen foods. I. A bacteriological survey of some commercial frozen foods. App. Microbiol.,
3: 98.
- Rodier, J. 1984. L’analyse de l’eau. Dénombrement des streptocoques fécaux présumés (Mét hode par ensemencement en milieux liquides). Dunod 7ème Ed.,
825-828.
- NF T 90-411: October 1989. Testing water. Detection and enumeration of group D streptococci. General method by culture in liquid media (MPN).
PRESENTAZIONE
ETHYL VIOLET AZIDE BROTH
Confezione
Codice
500 g (14,0 litri di terreno finale)
M061-17-K
Le informazioni e le specifiche contenute in questa scheda tecnica, datate 30.09.1999, sono suscettibili di modifica in qualsiasi momento, senza preavviso. Le
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