sostanze stupefacenti

Determinazione simultanea di sostanze psicotrope
su XevoTQD tramite metodo rapido
dopo preparazione del campione con reattivo M3
LSP - marzo 2013
1
Attività di ricerca e dosaggio
SOSTANZE STUPEFACENTI e PSICOTROPE
INDICATORI BIOLOGICI DI ESPOSIZIONE PROFESSIONALE
ELEMENTI IN TRACCIA
FARMACI
LSP - marzo 2013
2
COMMITTENTI LSP-TN
•U.O. di MEDICINA LEGALE
•FORZE dell’ORDINE
•NUCLEO MEDICO COMPETENTE e MEDICI del LAVORO
•NUCLEO OPERATIVO ANTIDROGA
•U.O. OSPEDALIERE (PS, reparti, laboratorio, anatomia patologica,…)
•SerT
•CARCERI
•PRIVATI
LSP - marzo 2013
3
FINALITA’ DELLE INDAGINI TOSSICOLOGICHE
VERIFICA
FORENSE
MONITORAGGIO
MEDICO-LEGALE
CONTROLLO CLINICO
SOSTANZE STUPEFACENTI
ESPOSIZIONE PROFESSIONALE
ELEMENTI IN TRACCIA
FARMACI
SOSTANZE STUPEFACENTI
ELEMENTI IN TRACCIA
FARMACI
ALTRE SOSTANZE
LSP - marzo 2013
4
INDAGINI TOSSICOLOGICHE
per ricerca SOSTANZE STUPEFACENTI
VERIFICA - MONITORAGGIO – CONTROLLO CLINICO
•valutazione dell’uso di sostanze stupefacenti
•valutazione dello stato di dipendenza del soggetto, in termini di cessazione o riduzione di uso
di sostanze d’abuso
•monitoraggio nella sindrome da dipendenza
•verifica della storia d’uso e abuso di sostanze stupefacenti
•controllo della “compliance “ a trattamenti farmacologici
•follow up a lungo termine in pazienti dimessi da Servizi per le Tossicodipendenze
VALORE MEDICO-LEGALE o FORENSE
•accertamenti medico/legali
•accertamento di responsabilità in incidenti stradali
•valutazione di inidoneità alla guida
•valutazione di inidoneità lavorativa
•accertamenti in caso di intossicazione acuta
•accertamenti post mortem
•rilascio autorizzazione per il porto d’armi
•affidamento, custodia minori
•discriminazione tra utilizzo e cessione ad altri di droghe
LSP - marzo 2013
5
MATRICI OGGETTO DI INDAGINE
URINA
SOSTANZE STUPEFACENTI
ETANOLO – ETIL-GLUCURONIDE
METABOLITI DI FARMACI
MARCATORI di ESPOSIZIONE PROFESSIONALE
ELEMENTI in TRACCIA
SANGUE/SIERO
SOSTANZE STUPEFACENTI
ETANOLO
FARMACI
ELEMENTI in TRACCIA
FORMAZIONI
CHERATINICHE
SOSTANZE STUPEFACENTI
ETIL-GLUCURONIDE (METABOLITA dell’ Etanolo)
FLUIDO ORALE
SOSTANZE STUPEFACENTI
CONTENUTO GASTRICO
BILE
ALTRI FLUIDI BIOLOGICI
SOSTANZE STUPEFACENTI
ETANOLO
FARMACI
LSP
- marzo
2013
ALTRE
SOSTANZE
TOSSICHE (pesticidi,…)
6
TEMPO DI RILEVAMENTO DELLE DROGHE
NELLE VARIE MATRICI BIOLOGICHE
Dopo assunzione ed in funzione delle caratteristiche
farmacocinetiche una droga e i suoi metaboliti possono
essere rilevati:
Sangue
Saliva
Urina
Capelli
ore
ore
giorni
mesi
LSP - marzo 2013
7
SCELTA DEL CAMPIONE DA ANALIZZARE
IN FUNZIONE DELLA FINALITA’ DELL’ACCERTAMENTO
ATTUALITA’ D’USO
SANGUE
SALIVA
ASSUNZIONE ABITUALE
E/O CRONICA
URINA
CAPELLO
ABUSO PREGRESSO
CAPELLI
LSP - marzo 2013
8
CARATTERISTICHE
DELLE TRE MATRICI BIOLOGICHE IN ESAME
CARATTERISTICHE
URINA
SANGUE
CAPELLO
disagevole
invasivo
comodo/non invasivo
non sempre certa
certa
certa
adulterazione
possibile
impossibile
difficile
contaminazione passiva
difficile
impossibile
possibile
ripetibilità prelievo
impossibile
impossibile
possibile
conservazione
4°C/-20°C
4°C/-20°C
temp. ambiente
temp. controllata
temp. controllata
temp. ambiente
tecnica analitica *
immunoch./cromatogr.
immunoch./cromatogr.
immunoch./cromatogr.
tempo di risposta
+/+++
+/+++
+/+++
elevata
bassa
bassa
tipo di misura
incremento
incremento
cumulativo
finestra di rilevazione
2/3 giorni
ore
mesi/anni
prelievo
appartenenza
soggetto
al
trasporto
concentrazione
matrice
in
LSP - marzo 2013
9
CONCENTRAZIONI SOGLIA (CUT-OFF)
PER LA POSITIVITA’ - ANALISI DI CONFERMA
CLASSE di
SOSTANZA/SOSTANZa
URINA
ng/mL
SANGUE
ng/mL
CAPELLO
ng/mg
6-O-MAM
10
10
0.2
Morfina, Codeina
100
10
0.2
100
10
0.2 - 0.05
THC
2
0.05
11-OH-THC
2
OPPICEI
COCAINA
Cocaina, Benzoilecgonina
CANNABINOIDI
THC-COOH
15
0.001
AMFETAMINE e analoghi
Amfetamine, Metamf.
200
20
0.2
MDMA, MDA, MDEA
200
20
0.2
METADONE
100
10
0.2
5
5
0.01
BUPRENORFINA
LSP - marzo 2013
10
ATTUALE OFFERTA ANALITICA LSP-TN
SOSTANZA
ANALISI DI CONFERMA
URINA
CAPELLO
SANGUE INTERO
Morfina, 6-MAM, Codeina
X
X
X
Cocaina, Benzoilecgonina,
Cocaetilene
X
X
X
X
X
D9-THC
11-OH-THC
X
CBN, CBD
X
THC-COOH
X
X
Amfetamine, Metamf.,
X
X
X
MDMA, MDA, MDEA
X
X
X
Benzodiazepine
X
Metadone
X
X
X
EDDP
X
X
X
Buprenorfina
X
X
X
LSP - marzo 2013
11
URINE
Ev.le Idrolisi
SPE
CANNAB.
SANGUE
ALTRE
DROGHE
Iniezione
LC/MS
Evap.
a secchezza
EXT
Liq-Liq
SPE
DOTAZIONE STRUMENTALE
QUANTITATIVA
Evap.
a secch.
Evap.
a secch.
Derivatizz.Iniezione GC/MS
QUANTITATIVA
Derivatizz.- Iniezione
GC/MS
QUALI-QUANTITATIVA
Iniezione
LC/MS
Derivatizz.Iniezione GC/MS
QUANTITATI
VA
QUANTITATIVA
Alliance Micromass-ZQ Waters
GC/MS-MS 4000 Varian
LSP - marzo 2013
12
CAPELLI
DROGHE BASICHE
OPPIACEI
DROGHE ACIDE
ALTRE DROGHE
CANNAB.
Capello POLVERIZ.
Capello SMINUZ.
Capello SMINUZ.
EXT TAMP
1 notte a 50°C
EXT HCL
1 notte a 50°C
EXT KOH
30’ a 90°C
SPE
SPE
EXT Liq-Liq
Evap.a secch.
Evap.a secch.
Evap.a secch.
Iniezione LC/MS
Iniezione LC/MS
QUANTITATIVA
QUANTITATIVA
Derivatizzazione
Iniezione GC/MS
Derivatizzazione
Iniezione GC/MS
Derivatizzazione
Iniezione GC/MS
QUALI-QUANTITATIVA
QUALI-QUANTITATIVA
QUALI-QUANTITATIVA
LSP - marzo 2013
13
MANAGEMENT SANITARIO
obiettivi
realizzazione di
efficacia ed efficienza
servizi efficienti ed affidabili
gestione razionale di risorse
controllo dei processi produttivi
innovazione organizzativa e operativa
configurazione dell’offerta in relazione al bisogno
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14
AZIONI
PREPARAZIONE DEL CAMPIONE (M3)
Semplicità
Velocità
Simultaneità di estrazione
Solubilizzazione analiti
Stabilizzazione analiti
XEVO TQD
Metodi cromatografici più veloci
Valenza legale del risultato
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15
XEVO-TQD
Metodi base screening
“MIRATO”e “INCOGNITO”
Colonna cromatografica: UPLC HSS C18
Fase mobile:
Tampone Ammonio formiato – Acetonitrile
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16
Reattivo M3 COMEDICAL
•Estrazione simultanea di tutti gli analiti (compreso ETG)
•Estrazione veloce e semplice (1 ora a 100 °C) da capello sminuzzato
•Nessuna trasformazione degli analiti
•Solubilizzazione
•Stabilizzazione
•Compatibile con iniezioni dirette LC/MS/MS (solubile in acqua…..su
base acquosa)
•Velocizzazione nella preparazione
della matrice
•Migliore recupero
LSP - marzo 2013
17
CONFRONTO SOLUBILIZZAZIONE
Mix drugs in urina (dil in acqua) / Mix drugs in urina (dil in acqua + 5% M3)
LSP - marzo 2013
18
CONFRONTO SOLUBILIZZAZIONE THC-COOH
Mix drugs in urina (dil in acqua) / Mix drugs in urina (dil in acqua + 5% M3)
LSP - marzo 2013
19
NUOVO APPROCCIO OPERATIVO
CAPELLI M3 + XEVO TQD
TUTTE LE DROGHE VENGONO ESTRATTE
CONTEMPORANEAMENTE
Opia, Coca, Meth, Amf, Ecs, Ket, Cannabinoidi, Bupren, Benzod, ETG, ecc….
Capello SMINUZZATO
EXT Reattivo M3 1 ora 100°C
Diluizione con acqua
Iniezione LC/MS/MS
QUALI-QUANTITATIVA
LSP - marzo 2013
20
CONFRONTO RECUPERO 6-O-MAM nel capello
dopo estrazione con M3/Tampone pH5
6-o-MAM
4,00
Tamp pH5
camp PLV
0,08
0,08
0,23
0,22
1,52
1,48
0,35
0,38
0,61
0,40
0,38
0,41
3,52
3,63
0,83
0,73
0,33
0,26
1,12
1,30
0,09
0,08
0,37
0,30
3,80
2,90
4,00
3,05
3,50
3,00
2,50
ng/mg
REATTIVO
M3
2,00
REATTIVO M3
1,50
Tamp pH5 camp PLV
1,00
0,50
0,00
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
campioni
LSP - marzo 2013
21
BEG
HCL 0,1 M
0,04
0,03
0,09
0,10
0,14
0,15
0,43
0,35
0,12
0,13
0,24
0,25
0,38
0,32
0,80
0,69
0,10
0,11
3,21
2,62
0,05
0,04
0,15
0,12
0,08
0,07
0,17
0,15
0,03
0,03
0,12
0,11
0,29
0,21
0,10
0,18
1,15
1,40
0,09
0,09
0,03
0,04
0,06
0,06
1,18
1,11
0,09
0,10
0,40
0,42
0,19
0,18
1,28
1,40
CONFRONTO RECUPERO BEG nel capello
dopo estrazione con M3/HCl 0.1 M
3,50
3,00
2,50
2,00
REATTIVO M3
ng/mg
REATTIVO M3
HCL 0,1 M
1,50
1,00
0,50
0,00
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
campioni
LSP - marzo 2013
22
CONFRONTO RECUPERO THC nel capello
dopo estrazione con M3/KOH1 M
THC
KOH 1 M
0,12
0,08
0,55
0,47
0,60
0,56
1,70
1,20
0,23
0,22
0,80
0,61
0,54
0,57
0,04
0,05
0,44
0,49
0,09
0,10
0,10
0,14
2,08
1,38
0,64
0,53
0,25
0,20
0,66
0,38
0,58
0,66
0,38
0,42
2,50
2,00
1,50
ng/mg
REATTIVO
M3
REATTIVO M3
1,00
KOH 1 M
0,50
0,00
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
campioni
LSP - marzo 2013
23
CAPELLO in M3 + SCREENING MIRATO WATERS
NEGATIVO / POSITIVO
LSP - marzo 2013
24
KETAMINA in MATRICE CHERATINICA
calibrazione e quantificazione al cut-off
LSP - marzo 2013
25
THC in MATRICE CHERATINICA
calibrazione e quantificazione 2 cut-off
LSP - marzo 2013
26
THC-COOH in MATRICE CHERATINICA
sperimentale
LSP - marzo 2013
27
ESTENSIONE
DEL METODO
A NUOVE MOLECOLE
ETG in MATRICE CHERATINICA
calibrazione e quantificazione al cut-off
LSP - marzo 2013
29
CAPELLI
DROGHE BASICHE
CAPELLI
M3 +XEVO TQD
DROGHE ACIDE
TUTTE LE DROGHE
OPPIACEI
ALTRE DROGHE
CANNAB.
Capello POLVERIZ.
Capello SMINUZ.
EXT TAMP
1 notte a 50°C
EXT HCL
1 notte a 50°C
SPE
SPE
EXT Liq-Liq
Evap.a secch.
Evap.a secch.
Evap.a secch.
Iniezione LC/MS
Iniezione LC/MS
QUANTITATIVA
QUANTITATIVA
Capello SMINUZ.
EXT KOH
30’ a 90°C
Capello SMINUZ.
EXT Reattivo M3
1 ora 100°C
Diluizione con acqua
Derivatizzazione
Iniezione GC/MS
Derivatizzazione
Iniezione GC/MS
Derivatizzazione
Iniezione GC/MS
Iniezione LC/MS/MS
XEVO TQD
QUALI-QUANTITATIVA
QUALI-QUANTITATIVA
QUALI-QUANTITATIVA
QUALI-QUANTITATIVA
LSP - marzo 2013
30
SANGUE INTERO in M3 + SCREENING MIRATO WATERS
NEGATIVO / POSITIVO
LSP - marzo 2013
31
BENZOILECONINA NEL SANGUE INTERO
LSP - marzo 2013
32
6-O-MAM NEL SANGUE INTERO
LSP - marzo 2013
33
MDMA NEL SANGUE INTERO
LSP - marzo 2013
34
URINE
Ev.le Idrolisi
SPE
Iniezione
LC/MS
Evap.
a secchezza
QUANTITATIVA
URINE
Ev.le Idrolisi
CANNAB.
SANGUE
ALTRE
DROGHE
SANGUE
Iniezione
LC/MS
Diluizione con
acqua/M3.
EXT
Liq-Liq
SPE
QUANTITATIVA
Evap.
a secch.
Evap.
a secch.
Precipitazione +
(M3)
Derivatizz.- Iniezione
GC/MS
QUALI-QUANTITATIVA
Iniezione
LC/MS
QUANTITATIVA
Derivatizz.Iniezione GC/MS
QUANTITATIVA
Iniezione
LC/MS
QUANTITATIVA
LSP - marzo 2013
35
• Già eseguite VEQ con questi nuovi metodi con esito
favorevole
• Notevole riduzione della manualità e della
manipolazione della matrice con conseguente
diminuzione della possibilità di errore e
dell’incertezza di misura
• Estrema semplicità analitica con matrici complesse
• Aumento della produttività
LSP - marzo 2013
36
PROGRAMMAZIONE SEDUTA ANALITICA
LSP - marzo 2013
37
LSP - marzo 2013
38
NUOVA OFFERTA ANALITICA LSP-TN
SOSTANZA
ANALISI DI CONFERMA
URINA
CAPELLO
SANGUE INTERO
Morfina, 6-MAM, Codeina, Diidrocod.
X
X
X
Cocaina, Benzoilecgonina, Cocaetilene
X
X
X
X
X
D9-THC
11-OH-THC
X
CBN, CBD
X
THC-COOH
X
X
X
Amfetamina, Metamfetamina
X
X
X
MDMA, MDA, MDEA
X
X
X
Benzodiazepine
X
Metadone
X
X
X
EDDP
X
X
X
Buprenorfina
X
X
X
KETAMINA
X
X
X
ETILGLUCURONIDE
X
X
X
CATINONI
X
X
X
CANNABINOIDI SINTETICI
X
X
X
LSP - marzo 2013
39
PROGETTI FUTURI
•Scelta definitiva della colonna cromatografica ottimale
•Validazione dei metodi
•Sperimentare il pretrattamento del campione on-line
tramite cromatografia bidimensionale
•Inserimento delle molecole emergenti nel pannello degli analiti
(catinoni, cannabinoid sintetici,…)
•Adesione al progetto di “Allerta precoce”
LSP - marzo 2013
40
GRAZIE PER L’ATTENZIONE
LSP - marzo 2013
41