Test ossido/fermentazione

Test ossido/fermentazione
Valutazione del metabolismo batterico
Test per la valutazione del metabolismo microbico
• Il test O/F è utilizzato per valutare il tipo di metabolismo batterico: ossidativo o fermentativo
• Si utilizza il terreno HUGH LEIFSON BASE
Terreno Hugh Leifson Base FORMULA TIPICA (g/l)
• Triptone 2.00
• Sodio cloruro 5.00
• Potassio fosfato bibasico 0.30
• Blu di bromotimolo 0.03
• Agar 2.50
Il terreno è usato per la determinazione del
modello metabolico con cui vengono degradati gli zuccheri dai microrganismi.
Utilizzo dei carboidrati
L’utilizzo dei carboidrati, come fonte energetica, da parte dei batteri può avvenire secondo due processi: fermentativo o
ossidativo.
Alcuni microrganismi sono capaci di utilizzare i carboidrati con produzione di acido solamente in
condizioni aerobiche, altri in condizioni sia aerobiche che anaerobiche (anaerobi facoltativi).
O/F
L’O/F è un terreno Base, cioè deve essere addizionato il carboidrato adatto. Ciò permette di distinguere il tipo di metabolismo utilizzato dai microrganismi in esame.
E’ un terreno semisolido
Indicatore di pH
Il terreno contiene il blu di bromotimolo come indicatore di pH; una variazione del pH del mezzo verso l’acidità, indotta dalla degradazione del carboidrato aggiunto, fa virare l’indicatore da verde a giallo.
Il terreno ha un basso contenuto di peptoni per evitare una loro degradazione da parte dei microrganismi con metabolismo ossidativo che porterebbe alla formazione di prodotti finali di natura alcalina che potrebbero mascherare l’acidità del mezzo.
Semina e incubazione
Inoculare due provette, contenenti il carboidrato alla concentrazione dell’1% per infissione con un ago con cui è stata prelevata una sospensione batterica.
Ricoprire una delle provette con olio di vaselina per creare un ambiente anaerobio.
Incubare per 48 ore o più a 37°C
Lettura
I microrganismi con metabolismo ossidativo produrranno un’acidificazione del mezzo, con viraggio dell’indicatore da verde a giallo, nella provetta aperta; i batteri con metabolismo fermentativo produrranno un’acidificazione del terreno in entrambe le provette.
Lettura
• Provate ad interpretare i seguenti risultati