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La diagnostica Liquorale in urgenza: punto di vista del Laboratorio

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La diagnostica Liquorale in urgenza: punto di vista del Laboratorio
Dipartimento
di Medicina Laboratorio
Cattedra di Biochimica
Clinica e Biologia Molecolare
Clinica
La diagnostica
liquorale in
urgenza
Prof. Sergio Bernardini
Volume = 90 -150 mL
Produzione/die = 500 ml
Equilibrio sangue-CSF
Gradiente rostro-caudale
Prelievo spinale
Aspetto e colore
Valutazione visiva
prima e dopo centrifugazione
(10 minuti a 1500-3000 rpm)
colore : limpido, sublimpido, torbido
aspetto: incolore, xantocromico,
eritrocromico
Limpido ed incolore …
… come acqua di rocca.
xantocromico
CTRL
O
< 2h
Emorragia subaracnoidea
Ittero (bil > 10 mg/dl)
Proteine > 150 mg/dl
Contaminazione da sangue
6h
36h
PL traumatica:
-xantocromia scompare dopo centrifugazione
-xantocromia scompare nelle provette successive alla prima
-rapporto RBC:WBC = 500:1
ossiemoglobina
bilirubina
Valutazione spettrofotometrica
L’analisi spettrofotometrica deve essere
effettuata dopo centrifugazione del CSF
Emoglobina e prodotti di degradazione
415, 540 e 580 nm
4-8 giorni
Bilirubina
460 nm
15-20 giorni
purulento
Conta dei Globuli bianchi
• Il CSF contiene solo poche cellule, quasi
esclusivamente leucociti mononucleati;
• nell’adulto la conta cellulare normale è di
0-5 cellule/uL;
• nei bambini i valori sono maggiori, con
conte fino a 30 cellule/uL nei neonati.
La lettura delle cellule liquorali va effettuata entro
due ore dalla puntura lombare
(almeno 100 l CSF in Bürker o Nageotte )
40% WBC lisati a RT
15% WBC lisati a 4°C
Contaminazione da prelievo traumatico
RBC:WBC= 500:1
1 mg/dl proteine ogni 1200 RBC/ l
Neutrofili
• Meningite batterica
•
•
•
•
•
Fase precoce meningite virale
Fase precoce meningite micotica o tubercolare
Convulsioni febbrili prima infanzia
Emorragie SNC
Mezzo di contrasto
Meningite virale
Spettro di linfociti di varie dimensioni
Meningite batterica
Leucocitosi neutrofila CSF con degenerazione PMNs
Il glucosio
Il glucosio deve essere determinato in campioni
appaiati di plasma e liquor, esprimendone il rapporto
percentuale:
glucosio liquor / glucosio plasma x 100 > 45
(range 50-60%)
iperglicemia
ipoglicemia,
meningite batterica, micotica, tubercolare
55% pneumococco
53% H. influenzae
45% meningococco
Proteine
• Nel liquor di un adulto le proteine totali hanno
una concentrazione tra 15 e 45 mg/dL;
• Valori più elevati si trovano nei neonati e negli
immaturi per l’incompletezza della membrana
ematoencefalica e negli anziani;
• Riguardo alla provenienza, circa l’80% proviene
dal siero, il 19% dall’epitelio del plesso e l’1%
dal tessuto celebrale.
Elevata concentrazione proteica
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Meningite batteriche (>150 mg/dl)
Meningite criptococcica (30-300 mg/dl)
Meningite virale (300-400 mg/dl)
Meningite da micobatteri (20-1500 mg/dl)
Emorragia aracnoidea
Ascesso
Encefalite
Neoplasie
Etanolo
Farmaci (fenitoina)
Sindromi demielinizzanti
PL traumatica
Indice di barriera
• La determinazione dell’albumina nel siero
e nel liquor è l’indice più accurato del
grado di permeabilità della barriera ematoliquorale:
• Albliquor/Albsiero x 1000 (v.r. < 6.5)
Lattato
• Il dosaggio dell’acido lattico liquorale fornisce maggiori
informazioni della glicorrachia per differenziare le meningiti
batteriche da quelle virali (v.r. 9-25 mg/dl);
• La sua concentrazione è indipendente da quella sierica
perché a pH fisiologico, essendo la molecola ionizzata,
difficilmente attraversa la barriera;
• Rimane elevato dopo l’inizio della terapia per cui non è un
buon marker di risposta alla terapia ma documenta la
setticità anche nei pazienti sottoposti a trattamento
antibiotico.
Ipossia tessutale:
Emorragia SNC
Ascesso
Trauma, convulsioni
Arterioscleosi C.
Ipotensione
Esame microbiologico
Esame microbiologico
Colorazione di Gram
centrifugazione (citocentrifuga)10 minuti a 1500 rpm.
Cristal violetto
Soluzione iodata
Alcool (Gram +)
Safranina (Gram-)
Sensibilità 60-90%
Specificità ~ 100%
N. meningitidis
diplococchi
Gram-
Pneumococco
diplococchi
Gram+
Esame microbiologico
test al lattice
(1 ml Liquor riscaldato 3’ a 100 °C, 5’ centrifugazione 3000
rpm, 1 goccia per ogni antisiero)
Antigeni solubili polisaccaridici di
N. meningitidis A, N. meningitidis B
E. coli K1
S. pneumoniae
H. influenzae B
Streptococco gr.B
Esame microbiologico
Esami colturali:
Residuo del sedimento viene inoculato in:
Agar-cioccolato
Agar-sangue (Gram +)
MacConkey (Gram -)
Sabouraud (miceti)
Incubazione in ambiente termostatato 35 °C arricchito di
CO2 10% fino a 5 giorni.
Costi e tempi delle analisi liquorali
Test
Tempo
Costo (euro)
Glucosio
<1h
4
Proteine
<1h
2
WBC+diff.
<1h
27
Gram
2h
8
Coltura
5d
20
Test lattice
<1h
130
Pazienti in terapia antibiotica già prima della PL
Pazienti sintomatici con
colorazione
di Gram
che risulta negativa
University
of Maryland
laboratory
Pazienti immunocompromessi con assenza di WBC nel CSF
Transferrina
Immunofissazione transferrina
Perdita CSF nell’otorrea e/o rinorrea post-trauma cranico
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