dr. Ludovica Verdun di Cantogno

Trento 19 novembre 2010
CONTROLLO DI QUALITA’ IN FISH:
PROGETTO INTERREGIONALE
DELLA REGIONE PIEMONTE
Dott.ssa Ludovica Verdun di Cantogno,
Stefano Vigna, Prof.ssa Anna Sapino
Azienda Ospedaliero-Universitaria S. Giovani Battista di Torino
Dip. Di Scienze Biomediche ed Oncologia Umana, Università di Torino
Con il termine di CONTROLLO
DI QUALITA’
viene indicata tutta una serie di
accorgimenti messi in atto allo
scopo di rendere attendibili i
risultati ottenuti
Perché il CQ FISH?
• Esigenza tra gli operatori del settore di
uniformare la lettura ed interpretazione
dei preparati FISH HER2 sul carcinoma
della mammella
• Requisito per l’accreditamento
REQUISITI PROFESSIONALI
Arrivo del Campione
(blocchetto o vetrini già allestiti)
Accettazione
Esecuzione della Metodica FISH
Conservazione Dati ed Immagini
Dell’analisi Effettuata
Lettura ed Interpretazione FISH
Conservazione Blocchetti
Consegna Referto
Refertazione
Arrivo del Campione
(blocchetto o vetrini già allestiti)
Accettazione
Esecuzione della Metodica FISH
Conservazione Dati ed Immagini
Dell’analisi Effettuata
Lettura ed Interpretazione FISH
Conservazione Blocchetti
Consegna Referto
Refertazione
Aspetto Metodologico
Fissazzione
Taglio
Prettrattamento
Digestione enzimatica
Co-denaturazione DNA campione/DNA sonda
Ibridazione
Lavaggi di stringenza
Controcolarazione/montaggio
LETTURA
Scelta accurata delle aree da analizzare
identificate sulla sezione in EE
Non meno di 20
cellule/campo in almeno
2 campi diversi
Scegliere nuclei possibilmente integri e non sovrapposti
Conta dei segnali HER2 (rossi) e CEP17 (verdi)
Calcolo della media segnali HER2/nucleo e media CEP17/nucleo
RATIO: media HER2/media CEP 17
INTERPRETAZIONE
FISH POS se: RATIO>2,0
media HER2/nucleo>4
CONSENSUS CONFERENCE AIOM/SIAPEC CATANIA 2010
Consensus conference
AIOM/SIAPEC Catania 2010
• Mantiene i cut off ASCO 2007, inoltre:
Evidenzia l’eterogeneità della
popolazione neoplastica nei confronti
della amplificazione di HER2
Tiene conto del fatto che la polisomia vera del crom. 17
è in realtà un evento raro, correggendo
l’interpretazione dei casi con aumento dei segnali
CEP17 se stimato tramite Ratio HER2/CEP17.
Cariotipo femminile normale: 46,XX
Disomia cromosoma 17
Linea SKBR3: cariotipo (81 cromosomi)
C
B
A
A
SONDA EGFR (7p12)
Sono
evidenziati
i sei
cromosomi 7
presenti
CENTROMERO CROMOSOMA 7
Linea SKBR3
CENTROMERO CROMOSOMA 7
Sono evidenti
sei segnali verdi e sei
segnali rossi corrispondenti
ai cromosomi 7: i segnali
R/V mantegono la corretta
posizione reciprocasono lo
SONDA EGFR (7p12)
Polisomia vera
Linea SKBR3
CENTROMERO CROMOSOMA 17
SONDA HER-2 (17q11.2-q12)
C
B
A
A
Linea SKBR3
SONDE: CEP 17 HER-2 (17q11.2-q12)
La sonda HER-2 appare amplificata e distribuita
in piccoli “spot” diffusi nel nucleo. Sono presenti
più segnali CEP17
Linea SKBR3
CQ INTERREGIONALE
PER LA FISH HER2 SU TUMORE
DELLA MAMMELLA
DA MARZO 2008
COSTOLA DEL CQ REGIONALE PER I
FATTORI PROGNOSTICI PREDITTIVI DEI
TUMORI DELLA MAMMELLA FINANZIATO
DALLA RETE ONCOLOGICA 2006-2008
CENTRI ADERENTI 2008
Bologna - Bellaria
Candiolo - IRCC
Firenze
Genova - Galliera
Genova - IST
Milano
Parma
Torino Molinette
Treviso
Centri totali: 9
CENTRI ADERENTI 2010
Ancona
Belluno
Bergamo
Bologna - Bellaria
Candiolo - IRCC
Castellamare di Stabia (NA)
Firenze
Genova - Galliera
Genova - IST
Milano
Orbassano – S. Luigi
Parma
Piacenza
Reggio Emilia
Udine
Torino Molinette
Trento
Treviso
Centri totali:18
Ogni mese ogni centro invia:
+
EE
SEZIONI IN BIANCO PER FISH
Risultato FISH riportato nel sito web per IL CQ FISH
interregionale
Dati “grezzi” tabulati nel sito
Dati rielaborati inviati ai centri partecipanti:
- Riepilogo Mensile
- Riepilogo Semestrale
CASI CQ FISH
1 - 18 2008/2009
• 18 casi totali
•14 concordanti in tutti i centri partecipanti
•4 con 1/4 centri discordanti
CQFISH 9 – DICEMBRE 2008
CQ FISH 8 – Novembre 2008
GAIN DI CEP 17……
CQFISH 8 2008
CQ FISH 18 – Ottobre 2009
PERDITA DI CEP 17……
CQFISH 18 2008
CQFISH 18
CASI CQ FISH
19 - 26 2009/2010
• 8 casi totali
•3 concordanti in tutti i centri partecipanti
•2 di dubbia interpretazione
•3 con 1/2/4 centri discordanti
CQFISH 19 – NOVENBRE 2009
Caso tendenzialmente ipodisomico per CEP17 e con media
HER2/nucleo < 6. Nonostante la Ratio possa risultare > 2 il caso è da
considerarsi NON AMPLIFICATO
CQFISH 25 – MAGGIO 2010
Caso tendenzialmente “polisomico” per CEP17 e con media
HER2/nucleo > 6. Nonostante la Ratio possa risultare < 2 il caso è da
considerarsi AMPLIFICATO
CQFISH 21 – GENNAIO 2010
Caso con popolazione mista: HER2 AMPLIFICATO (HER2 >6) nel 35%
delle cellule neoplastiche invasive.
Almeno il 90% dei test deve risultare
corretto perché un centro possa
valutare soddisfacente
la sua performance
di Qualità
ASCO/CAP 2008
CQ FISH HER2 CONCLUSIONI
• Consente il confronto
del proprio operato
con quello di centri
esterni:
– Bontà della metodica
– Bontà della
interpretazione
• Richiede impiego
di risorse
• L’interazione tramite
sito web non è
sufficiente per i casi
di dubbia
interpretazione
• Necessario per la
Certificazione
Istituire un incontro a cadenza…
nel contesto del CQ FISH HER2
su mammella interregionale ?
CQ FISH TORINO MOLINETTE
• Prof.ssa Anna Sapino
•
•
•
•
Patrizia De Rosa (taglio blocchetti)
Dott.ssa Patrizia Gugliotta (esecuzione e lettura FISH)
Dott.ssa Cristina Botta (esecuzione FISH)
Stefano Vigna (messa a punto e gestione sito web)