Comunicazione tra neuroni. pptx

In generale ogni organismo pluricellulare dotato di una certa complessità per poter
funzionare deve riuscire a coordinare ogni suo singolo componente, dagli organi più
grandi alla più piccola cellula.
Fra cellule lontane o appartenenti a organi differenti la coordinazione prevede
meccanismi di
comunicazione attraverso molecole, chiamate mediatori o
trasmettitori, capaci di diffondere dal sito di produzione e di legare in modo specifico
strutture proteiche presenti nella cellula ricevente, chiamate recettori.
Il recettore è in grado, non solo di riconoscere e legare il messaggero ma anche,
attraverso una modifica della sua struttura, di generare una risposta cellulare
(trasduzione del segnale)
P. Ehrlich e di J.N. Langley (inizio 1900): cellule possiedono siti specifici di
riconoscimento per molecole di comunicazioni, e sono in grado di mediarne l’effetto.
Tali siti si sono evoluti geneticamente per riconoscere e mediare l’effetto di sostanze
o ligandi endogeni ( molti di questi sono i bersagli di farmaci)
TIPI di RECETTORE
Metodi di studio per il riconoscimento del recettore o” studi di binding” (legame). Il
preparato contenente il recettore o organi che lo esprimono o l'animale intero viene trattato
con un ligando specifico -isotopicamente marcato- per detto recettore. E’ così possibile
isolare, sequenziare e clonare il recettore, studiare i parametri dell'interazione ligandorecettore e i siti di legame. Vedi scoperta del recettore dell’insulina o degli oppiodi
A seconda della loro localizzazione cellulare si dividono in:
Recettori di Membrana: in genere attivati da ligandi idrofilici che non attraversano
bene le membrane cellulari. ( neurotrasmettitori classici e peptidici, da ormoni di natura
peptidica, fattori di crescita, citochine ... e farmaci di tipo prevalentemente idrofilico)
Recettori Intracellulari: attivati da ligandi più lipofilici (ormoni steroidei e tiroidei,
acido retinoico, Vit D ... e farmaci prevalentemente lipofil)i. La stimolazione di questi
recettori normalmente regola l'espressione genica.
I recettori di membrana sono una classe di recettori che possiede domini
extracellulari, transmembrana ed intracellulari
Vengono divisi in 6 superfamiglie:
Recettori Canale, la loro attivazione produce risposte rapide e brevi.
Recettori accoppiati a proteina G: la loro attivazione produce risposte lente
e durature.
Recettori dotati di attività tirosin chinasica, mediano l’azione di diverse
neurotrofine
Recettori dotati di attività guanilato ciclasica,
Recettori per l’adesione cellulare
Recettori per le citochine
Recettori canale
Sono complessi multiproteici transmembranari costituiti da 4 o 5 subunità (tetramerici o
pentamerici ), costitute da proteine lineari dotate di un elevato grado di omologia, che si
organizzano a formare un canale che a riposo è chiuso
Ciascuna subunità proteica attraversa quattro volte il doppio strato fosfolipidico della
membrana; le estremità N-terminale e C-teminale sono extracellulari.
Le regioni tramsmembranarie, M1, M2, M3, M4, contengono aminoacidi più apolari (LEU,
ILE, VAL) che presentano pertanto maggior affinità per le catene lipidiche della membrana.
La regione M2 di ciascuna subunità delimita il canale. La presenza simmetrica nelle
regioni M2 adiacenti di residui di aminoacidi con carica negativa in catena laterale (ASP,
GLU) crea zone anulari con carica negativa rendendo il canale permeabile a cationi ;
viceversa, la presenza di residui con carica positiva (LYS-ARG) è tipico dei canali permeabile
agli anioni.
L’interazione con il ligando naturale o con opportune sostanze (agoniste) sulla porzione
extracellulare del recettore determina l'apertura del canale, in seguito alla quale si ha un rapido
e consistente passaggio di ioni.
La direzione, influsso (extra → intra-cellulare) o efflusso (intra → extra-cellulare), il tipo di
ione prevalentemente scambiato (Na, K, Ca, Cl) e l'entità della risposta sono influenzati dal
gradiente di concentrazione e di potenziale elettrico, dalla forma del canale e dalla natura e
disposizione degli aminoacidi che si affacciano sul canale.
Recettore nicotinico: esempio di recettore canale
Ach
Miorilassanti (curaro)
Na+
Canali
ionici
I canali ionici sono macromolecole glicoproteiche struttura simile ai recettori canali –subunità
omomeriche (K+ voltaggio dipendenti), subunità eteromeriche (Ca+ alfa forma il poro, altre
subunità extr o intracellulari, funzioni modulatorie) - circoscrive un poro idofilo che consente il
passaggio di ioni, nella direzione determinata dal loro gradiente elettrochimico
In genere, gli ioni tendono a spostarsi da una regione a maggiore concentrazione verso una a
concentrazione minore, ma in presenza di un gradiente elettrico è possibile che non vi sia flusso
transmembranario di ioni, anche in presenza di un gradiente di concentrazione.
In
soluzione acquosa tutti gli ioni sono circondati da un alone di molecole d’acqua
Raggio anidro e idrato e spessore dell’alone idrico di solvatazione
Selettività del canale del K+ per il K+ e non per il Na+
Gli ioni K+, idrati in soluzione,
perdono le molecole di H2O
quando passano attraverso il
filtro di selettività e formano dei
legami di coordinazione con
quattro O di gruppi carbonilici.
K+ nel poro
Na+ nel poro
Gli ioni Na+, essendo più piccoli,
non possono coordinarsi
perfettamente con questi O e
quindi attraversano il canale
solo raramente.
Dimensioni del Poro
canale del
potassio
canale del
sodio
canale-recettore
per l’Ach
canale del
potassio
canale del
sodio
Passaggio ioni K+ in fila indiana
Conduttanza di singolo
canale (pS)
Flussi sono saturanti
Concentr. di Na+
o K+ (mM)
Canali Ionici: classificazione in base alle
modalità di apertura
extracell.
intracell.
Sempre
aperti
Voltaggio-dipendenti:
rispondono a
variazioni di Vm
Chemio-dipendenti:
rispondono a un
messaggero
extracellulare
neurotrasmettitore
Chemio-dipendenti:
rispondono a un
secondo messaggero
(intracellulare)
cAMP, cGMP, Ca2+,
IP3, proteine G
Il canale ionico può essere aperto o chiuso modificando la differenza di
voltaggio ai due lati della membrana (canali a controllo di potenziale)
I canali per il sodio sono normalmente chiusi (1) e
si aprono sempre per un breve tempo, meno di 1
msec (attivo) (2).
Se la depolarizzazione persite, una porzione della
globulare proteina-canale si orienta verso l'alto e
chiude il poro, (inattivato) (3). Quando la
membrana si ripolarizza, il poro si chiude e la
porzione globulare si sposta, tornando alla porzione
iniziale.
Il canale, chiuso, può di nuovo essere attivo (4).
Struttura di base di un canale voltaggio-dipendente
Lato extracellulare
Lato citoplasmatico
Sensore del
voltaggio
Filtro di
selettività
porta
Recettori accoppiati a proteine G
(GPCR) rappresentano una famiglia di > 1000 membri strutturalmente correlati
Mediano i loro effetti attraverso l’attivazione di una proteina G, quindi attraverso una
cascata di eventi biochimici che portano alla formazione dei secondi messaggeri
all’interno della cellula.
Rispetto ai recettori-canale la tramissione è meno rapida.
Struttura: unica catena polipeptidica formata da 7 alfa-eliche che attraversa 7 volte la
membrana plasmatica. Inoltre sono presenti 6 anse idrofiliche (3 extracellulari e 3
citoplasmatiche) di collegamento fra le alfa-eliche Sono inoltre ancorate ai lipidi che ne
stabilizzano la conformazione
L’estremità NH2 è extracellulare, quella COOH è intracellulare.
La 3° ansa intracitoplasmatica - che collega la 5a e la 6a elica transmembarana- insieme ad
un dominio della regione C-terminale, forma il sito di legame per le proteine G.
La 3° ansa intracitoplasmatica e la coda C-terminale, inoltre, hanno degli aminoacidi di
serina e treonina che vengono fosforilati da chinasi che vengono attivate la modulazione
e la desensitizzazione di questi recettori.
Possiedono siti di glicosilazione extracellulare che permettono l’interazione con molecole
extracellulari e altre cellule.
Questi recettori si aggregano a formare particelle globulari nella membrana e in
seguito al legame con il ligando (neurotrasmettitore o agonista in genere) dimerizzano.
I siti di riconoscimento per i ligandi (neurotrasmettitori, ormoni peptidici e farmaci
agonisti ed antagonisti) si trovano o sulla estremità NH2 o in tasche formate dal
raggruppamento delle porzioni transmembrana.
La Rodopsina è stato il primo membro della famiglia dei recettori a 7 DT ad avere la sua struttura determinata
mediante cristallografia ai raggi-x
Rodopsina
PDB 1F88
Le proteine G
Legano guanosin-trifosfato (GTP) o il guanosin-difosfato (GDP) e sono dotate di attività GTPasica,
importante per idrolizzare il GTP.
Esistono due tipi di proteine G:
1) Proteine G trimeriche, costituite dalle subunità polipeptidiche ,  e  (esistono (20 tipi di , 5 tipi  e 10
). Tutte e tre le subunità sono associate alla superficie interna della membrana plasmatica, come proteine
periferiche.
2) Piccole proteine G monomeriche (Ras, Rho; Rab, Arf).
A riposo (recettore accoppiato alla proteina G senza ligando) una proteina G si trova in forma di trimero ,
,  e porta legato il GDP sulla subunità ;
Quando il recettore è attivato dall’interazione con un ligando (che rappresenta il primo messaggero),
cambia conformazione nella parte intracellulare e acquistan alta affinità per il GTP.
Il legame col GTP determina il distacco della subunità  dal restante dimero / e quest’ultimo dalla
superficie interna del recettore.
Questi due complessi formatisi (-GTP e /) possono agire su effettori diversi; ne consegue che uno
stesso recettore può controllare più funzioni attraverso la subunità -GTP che agisce su determinati
effettori e dimero / che agisce su altri effettori.
Gli effettori, a loro volta, determinano la produzione di un secondo messaggero (adenilato-ciclasi,
guanilato-ciclasi, fosfolipasi C) che sono i responsabili dell’effetto finale secondo vie caratteristiche di
ogni effettore. Gli effettori, inoltre, possono agire anche su canali ionici.
Il segnale viene interrotto dall'attività GTPasica della subunita a-GTP che idrolizzando il GTP forma il
GDP; ciò causa un aumento dell’affinità per il dimero b/g che si lega nuovamente all’a-GDP facendo
tornare il recettore allo stato di riposo.
Classificazione delle proteine G
Proteine Gs: caratterizzate dalla presenza di alfas con attività stimolante l'effettore adenilato ciclasi
determinando così un aumento del secondo messaggero AMP-ciclico (cAMP) (recettori catecolamine,
ACTH, glucagone,, LH, FSH, TSH, istamina)
L’effetto finale dipende dall’aumento del calcio intracellulare
Proteine Gi: caratterizzate dalla presenza di alfai con attività inibente l'adenilato ciclasi determinando
così una riduzione del cAMP tramite attivazione delle fosfodiesterasi (PDE) e apertura di canali ionici.
(noradrenalina, prostaglandine, oppiacei, angiotensina). Ci sono 3 tipi di alfa i:
Il tipo 1 inibisce l’adenilato ciclasi con conseguente riduzione del cAMP;
Il tipo 2 attiva l’effettore fosfolipasi C (PLC) con conseguente produzione dei secondi messaggeri IP3 e
DAG che fanno aumentare il calcio intracellulare;
Il tipo 3 attiva l’effettore fosfolipasi A2 (PLA2) che produce acido arachidonico da cui originano leucotrieni
(LT, dalla via della lipossigenasi), trombossano (TXA2) e prostaglandine (PG) che sono mediatori
dell’infiammazione. (TXA2 e PG dalla via della ciclossigenasi.
Proteine Gq: caratterizzate dalla presenza di alfaq che attiva l’effettore fosfolipasi C con conseguente
produzione dei secondi messaggeri IP3 e DAG; quest’ultimo determina aumento del Ca++ intracellulare.
Queste proteine sono attivate dall’acetilcolina (ACh) e dalla noradrenalina.
Proteine Go: caratterizzate dalla presenza di alfao (o sta per oppioidi) che provoca l’apertura dei canali
del potassio (che esce dalla cellula) provocando la chiusura dei canali del calcio con conseguente
riduzione del Ca++ intracellulare
Proteine GT1 e proteine GT2 (T sta per trasducina): attivate da fotoni, attivano a loro volta le
fosfodiesterasi (PDE) che scindono il cGMP in 5’guanosin -monofosfato (5’-GMP).
Proteine G12/13: caratterizzate dalla presenza di alfa12 o alfa13, attivano la proteina G monomerica Rho
Le subunità alfa delle proteine G rappresentano il bersaglio della
tossina colerica e la tossina della pertosse.
La tossina colerica ribosila la subunità alfas; ciò impedisce l'attività
GTPasica mantenendo la proteina G nello stato attivo. Questo
determina aumento del cAMP con conseguente rilascio di Na+ e acqua
nell’intestino, quindi diarrea e squilibrio elettrolitico.
La tossina della pertosse ha ribosila le subunità alfai e alfao delle
proteine G che hanno come effettore la guanilato-ciclasi e glicosila
anche la regione dell'ansa che permette l'interazione recettore-proteina
G, inibendo il legame.
Le subunità beta/gamma hanno anch’esse diversi effettori: possono attivare:
a) alcune isoforme dell'adenilato-ciclasi,
b) fosfolipasi C
c) chinasi in grado di fosforilare il IP in posizione 3
d) i canali al potassio inducendo un’iperpolarizzazione
d) possono inibire i canali al calcio.
Via dell’adenilato ciclasi
L'adenilato-ciclasi (AC) è un enzima di membrana formato da due domini M
(M1 ed M2 ciascuno dei quali formato da 6 eliche transmembrana) e due
sequenze intracellulari C1 e C2 che rappresentano due siti di legame per le
subunità as-GTP e ai-GTP. Il sito attivo dell’enzima è rivolto verso il
citoplasma
Qunado AC è attivato da una subunità αs, produce come secondo
messaggero l’AMP-ciclico (a partire dall’ATP), una molecola piccola,
solubile in acqua, che può diffondere rapidamente attraverso il citoplasma.
Gli effetti del cAMP sono mediati :
a) attraverso l'attivazione della protein-kinasi A (PKA);
b) il cAMP, inoltre, media anche effetti su recettori-canale che riconoscono
ed agganciano tale molecola regolando così il flusso ionico.
Le PKA sono costituite da 2 siti regolatori e da 2 siti catalitici. Due molecole
di cAMP si legano ai siti regolatori e tale legame libera le subunità catalitiche
che possono agire sui vari substrati citoplasmatici o traslocano nel nucleo
dove controllano la trascrizione genica mediante l’attivazione di fattori di
trascrizione quali CREB. Quando le PKA sono inattive, sono legate alle
proteine di ancoraggio (AKAP = A kinase anchoring protein).
Il cAMP è responsabile di numerosi effetti:
Attivazione della glicogenolisi e della lipolisi.
Attivazione dei canali cationici del calcio.
Regolazione della trasduzione di geni specifici legandosi a sequenze specifiche del
promotore.
Rilasciamento delle cellule muscolari lisce(il cAMP attraverso l'attivazione delle
protein-chinasi, causa fosforilazione della chinasi della catena leggera della miosina
che così si trova nello stato inattivo e quindi, a sua volta, non può più fosforilare la
catena leggera della miosina che sarà perciò impossibilitata ad unirsi all'actina).
Esocitosi.
Interruzione del segnale:
a) degradazione per mezzo fosfodiesterasi dei nucleotidi ciclici che forma il 5'adenosin-monofosfato (5'AMP) (bersaglio di farmaci, caffeina, teoffillina)
b) attivazione della serina/tirosina protein-fosfatasi che staccano specificamente i
gruppi fosforici trasferiti sulle proteine dalle protein-chinasi;
c) l’endocitosi dei recettori e delle loro molecole-segnale.
Dopo l’endocitosi il recettore può essere degradato dai lisosomi o può essere rimosso
dai suoi segnali extracellulari e riciclato sulla superficie cellulare.
Via della fosfolipasi C
La fosfolipasi C (PLC) che è una fosfodiesterasi che media l’attivazione di recettori
accoppiati a proteine Gi e Gq,
Diverse isoforme di PLC:
1) beta, citoplasmatica, attivata da Gq (Ach e NA) e dal dimero /
2) gamma, citoplasmatica, attivata dai recettori per i fattori di crescita e dell’insulina.
Agisce sul fosfatidil-inositolo 4,5-difosfato (un fosfolipide generando i due secondi
messaggeri IP3 e diacilglicerolo (DAG)
L’inositolo-trifosfato (IP3) è una molecola relativamente piccola e solubile in acqua
che consiste in una unità di inositolo con tre gruppi fosforici.
Agisce su recettori posti sulla membrana del reticolo endoplasmatico, in cui è
immagazzinato il calcio,
e ne
determina la fuoriuscita
(aumento della
concentrazione intracellulare di calcio)
L’IP3 puo divenire IP4 e come tale attiva canali al calcio della membrana cellulare e
favorire l’ingresso di calcio dall'esterno all'interno della cellula, contribuendo
ulteriormente all'aumento della concentrazione citoplasmatica di calcio.
Il calcio (secondo messaggero supplementare):
a) azione diretta
b) azione indiretta attraverso la calmodulina la quale, interagendo con lo ione, passa
dalla forma inattiva a quella attiva.
Nella forma attiva, il complesso Ca++/calmodulina attiva un gruppo di proteinchinasi le cui proteine bersaglio svolgono un ruolo nel metabolismo cellulare, nella
sintesi proteica e nella secrezione. Anche la contrazione della muscolatura striata e
l’assemblaggio dei microtubuli sono processi regolati da questo complesso.
Spegnimento del segnale
Terminata la sua funzione, l’IP3 viene rapidamente defosforilato a inositolo e reinserito in
membrana.
Il calcio, invece, viene velocemente eliminato da pompe Ca++-ATPasi che si trovano nella
membrana plasmatica e nel reticolo endoplasmatico
Il diacilglicerolo (DAG) è un secondo messaggero liposolubile costituito da una
molecole di glicerolo con due residui di acido grasso.
Resta ancorato alla membrana, attiva la protein-chinasi C (PKC) che, a sua volta,
catalizza la fosforilazione di varie proteine intracellulari.
Ciò determina un aumento di calcio nella cellula che è responsabile di vari
effetti: contrazione della muscolatura liscia, secrezione ghiandolare, ecc.
La PKC è costituita da una subunità catalitica ed una subunità regolatrice, che è
una calmodulina, cioè una proteina regolata dagli ioni Ca++; quindi sia gli ioni
calcio che il DAG contribuiscono all’attivazione della PKC (C = attivata dal
Ca++).
Le PKC fosforilano residui di serina e di treonina sulle proteine bersaglio
(proteine cromosomiche, proteine di trasporto della membrana plasmatica,
proteine contrattili e del citoscheletro, proteine che regolano la secrezione e
l’endocitosi ed una serie di enzimi che catalizza reazioni ossidative e di altro
tipo.
Spegnimento del segnale:
DAG degradato dalle lipasi in glicerolo e acidi grassi oppure riciclato per la sintesi
di lipidi di membrana.
Attivizione serina/treonia protein-fosfatasi che staccano specificamente i gruppi
fosforici trasferiti sulle proteine dalle protein-chinasi
Diverse proteine interagiscono con i recettori accoppiati a proteine G
modularne l’attività:
(alterata affinità per il ligando, dimerizzazione del recettore che può aumentarne o
alterarne l’attività; alterata localizzazione del recettore, ecc.
1) Dopo un certo tempo che si è stabilito il legame dell’agonista al recettore, una chinasi (GRK) fosforila alcuni
residui aminoacidici intracellulari del recettore;
2) La fosforilazione provoca il disaccoppiamento del recettore dalla G proteina (desensitizzazione) e al
reclutamento della b-arrestina;
3) La -arrestina a sua volta recluta molecole di clatrina;
4) Le molecole di clatrina favoriscono la formazione di una cavità da cui originerà la vescicola di endocitosi che
provocherà l’internalizzazione del recettore.
In base alle modalità di
internalizzazione si riconoscono due
classi di recettori accoppiati a proteine
G.
1) classe A (b2-Adre), l’interazione barrestina–recettore è transitoria, e la barrestina non si localizza con i recettori
negli endosomi.
2) classe B (Vaso2), l’interazione barrestina–recettore è più stabile, e
recettore e b–arrestina co-localizzano
negli endosomi.
Recettore di
classe A
Recettore di
classe B
Recettori dotati di attività tirosin-chinasica intrinseca
Comprendono i recettori di membrana per i fattori di crescita che controllano
la proliferazione, il differenziamento, il trofismo e la sopravvivenza dei
neuroni. I ligandi agiscono a basse concentrazioni e la cellula che riceve il
segnale va incontro a modificazioni dell’espressione genica e
dell’organizzazione e funzionamento del citoscheletro
Dominio N-terminale di interazione
con il ligando
Un unica alfa-elica transmembrana
Un dominio intracitoplasmico con
attività TIROSIN-CHINASICA
Guida assone, sviluppo,
migrazione, angiogenesi,
stem cells
Recettori accoppiati a tirosin chinasi
Non hanno attività cinasica intrinseca, bensì l’acquisiscono. Esempio: il
recettore per l’interferone α e β che chiama a sé le Janus Kinase, che a loro
volta fosforilavano (su tirosina) le STAT
CLASSIFICAZIONE DEI RECETTORI DI MEMBRANA DELLE CITOCHINE
Recettori di fattori di crescita ematopoietici. Appartengono alla famiglia di recettori a, b
e g. Sono state riconosciute in questo gruppo le seguenti citochine: IL 2, IL 3, IL 4, IL 5, IL
6, IL7, IL 9, IL 13, IL 15, GM-CSF (Fattore stimolatore di colonie: Granulocito Macrofago) e
G-CSF (Fattore stimolatore di colonie di granulociti).
Recettori di Interferone. Hanno recettori a e b. Appartengono a questa famiglia: IFNa,
IFNb, IFNg.
Recettori di fattori della crescita trasformante (TGF). Appartengono a questa famiglia:
TGFa e TGFb
Recettori del fattore di Necrosi tumorale (TNF). Appartengono: (TNFa) e (TNFb).
Recettori della superfamiglia delle immunoglobuline. Appartengono a questa famiglia:
IL 1a, IL 1b, IL 16.
Recettori di chemiochine (recettori con sette tratti intramembrana): IL 8, Fattore
attivante delle piastrine (PAF).
Le citochine sono messaggeri chimici od ormoni estremamente potenti, nonostante agiscano a concentrazioni molto
basse. Sono molto specifiche ed agiscono sulla cellula bersaglio, grazie alla loro affinità ai recettori di membrana. I
rettori sono glicoproteine di membrana formati da diverse subunità
L'azione delle citochine è simile a quella degli ormoni, di fatto le citochine si
conoscono anche come ormoni del sistema immunitario.
La principale differenza tra le citochine e gli ormoni è: le prime agiscono su
diverse popolazioni cellulari e tessuti, mentre gli ormoni agiscono di solito su un
solo organo.
Inoltre, una sola cellula può produrre diverse citochine, fattore che non si verifica
nella produzione di ormoni.
Sono tirosina chinasi non recettoriali,
JAK1, JAK2, JAK3 E TYK2 (“just another kinase”)
JAK3 >> livello emopoietico.
A) Attivazione canonica: dopo dimerizzazione indotta dal legame della
citochina col suo recettore e la conseguente trans-fosforilazione delle
subunità Tyr 1007 e 1008) aumenta l'affinità dei suoi substrati di almeno 45-volte.
B) Attivazione "non-canonica", che è regolata da stimoli diversi da quelli
citochinici, come:
1) dai recettori di membrana con domini a 7 eliche (7TM);
2) attraverso delle tirosina chinasi non recettoriali indotte dallo stress ossidativo,
3) dall'ipertonicità cellulare.
STAT protein (Signal Transducer and Activator of Transcription, or Signal
Transduction And transcription STAT1, STAT2, STAT3, STAT4, STAT5 (STAT5A
and STAT5B), and STAT6.