PREPARAZIONE DI TAMPONI E DILUIZIONI

PREPARAZIONE DI TAMPONI E DILUIZIONI •  Mole (mol): 1 mol H2O = 6,023 * 10 23 molecole H2O •  Peso molecolare (g/mol): peso di una mole Es: Tris 121 g/mol •  Molarità: Moli di sostanza /litro di soluzione Es: Soluzione 1M di Tris 121g di Tris in acqua fino ad un volume finale di un litro. • 
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1 grammo (g) = 1000 milligrammi (mg) 1 milligrammo (mg) = 1000 microgrammi (ug) 1 microgrammo (ug) = 1000 nanogrammi (ng) 1 nanogrammo (ng) = 1000 picogrammi (pg) 1 grammo = 1012 picogrammi • 
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1 mole = 1000 millimoli (mmole) 1 millimole (mmol ) = 1000 micromoli (µmol) 1 micromole (µmol ) = 1000 nanomoli (nmol) 1 nanomole (nmol ) = 1000 picomoli (pmol) 1 mole = 1012 picomoli 1 soluzione millimolare (1 mM) = 1 micromole per millilitro (1 µmol /ml) 1 soluzione micromolare (1µM) = 1 nanomole per millilitro (1 nmol /ml) 1 soluzione micromolare (1µM) = 1 picomole per microlitro (1pmol/µl): • 
1µM = 10‐6 moli/litro x 10‐6 litri/µl = 10‐12 moli/µl = 1 pmol/µl •  QuanU grammi di NaOH devono essere pesaU per oVenere 100 ml di una soluzione 5 M di NaOH? a) 
b) 
c) 
d) 
e) 
5 M 5 mol/l Peso molecolare dell’NaOH = 40 g/mol Volume finale = 100 ml = 0,1 l N° moli/litro = 5 ? g C (Molarità) V(litri)
Moli/litro C ∙ V 5 M 0,1 l 5 (mol/l )· 40 (g/mol)· 0,1 l  20 g
Preparazione di un tampone •  Purezza dei reagenU •  ddH2O Preparazione dei Tamponi: a)  Precauzioni (GuanU, Cappa, Mascherine) b)  Considerare l’H2O cristallizzata quando deve essere calcolata la quanUtà di reagente necessaria per preparare una soluzione: MgSO4 – 7 H2O = 120,37 g (peso molecolare dell’MgSO4 ) + 126,11 g (peso molecolare di 7 molecole di H2O) = 246,48 g Preparazione di un tampone Sterilizzazione: –  Autoclave –  Filtrazione Misurazione del pH: a) posizione verUcale dell’eleVrodo b) agitazione della soluzione durante l’aggiustamento del pH c) calibrazione periodica dell’eleVrodo d) Pulizia dell’eleVrodo con ddH2O ATTENZIONE: il pH di molte soluzioni è temperatura‐ dipendente Sicurezza Soluzione madre: soluzione concentrata uUlizzata per preparare soluzioni di lavoro (più diluite); a)  tempo; b)  reagenU; c)  spazi; d)  accuratezza. Preparazione di una soluzione madre (stock solu)on) di TAE (Tris Acetato)50X (1 litro). Soluzione madre 50X Soluzione di lavoro 1X Preparazione soluzioni w/v (weight in volume) •  Soluzione all’1%: definita come 1 grammo per 100 ml di volume Es: preparazione di un gel d’agarosio al 2% in TAE: 2 grammi di agarosio in 100 ml di TAE a) 200 ml di gel d’agarosio al 2% b)250 ml di gel d’agarosio allo 0,8% Preparazione soluzioni v/v (volume in volume) •  Percentuale di soluto (liquido) in solvente Es: preparazione di etanolo al 95% 95 ml di Etanolo assoluto + 5 ml di ddH2O (fino al volume finale di 100 ml) a) Preparazione di etanolo al 70% b) Preparazione di etanolo al 70% partendo da etanolo al 95% C ∙ V Soluzione di saccarosio •  Conoscendo il volume e la concentrazione si può risalire alla quanUtà di saccarosio presente in soluzione Volume= 0,2 litri
Concentrazione= 50 g/l
Quanto saccarosio è presente in soluzione? V · C = 0,2 l · 50 g/l = 10 g
Ci ∙ Vi = Cf ∙ Vf Diluire un volume conosciuto (Vi) di una soluzione a concentrazione nota (Ci) ad una nuova concentrazione stabilita (Cf) Es: Diluire una soluzione di NaCl 5M (0,1 l) fino ad o8enere una soluzione 1M. b) Ci = 5M Vi = 0,1l Vf = (Ci ∙ Vi)/ Cf Cf = 1M Ci = 5M Cf = 1M Vi = (Cf ∙ Vf)/ Ci Vf = 100 ml a) 
Diluire una soluzione a concentrazione nota (Ci) in una soluzione a volume (Vf) e concentrazione (Cf) da noi stabilita Es: Diluire una soluzione di NaCl 5M per o8enere 100 ml di una soluzione 1M. Preparazione dei primers a parUre dal prodoVo liofilizzato (L15996) QuanUtà: 574 µg  574 ∙ 10‐6 g Peso molecolare: 9354 g/mol Cf: 100 µM  100 ∙ 10‐6 M  100 ∙ 10‐6 (mol/l) peso(g)
_________________________________________ peso molecolare (g/mol) ∙ concentrazione finale = (574 ∙ 10‐6 (g))/ (9354 (g/mol) ∙100 ∙ 10‐6 (mol/l)). 6,136 ∙ 10‐4 l  613,6 µl