bilirubina diretta - InterMedical, prodotti diagnostici

BILIRUBINA D.
BILIRUBINA DIRETTA
DMSO.Colorimetrico
Determinazione quantitativa della bilirubina
Conservare a 2-8°C
IVD
PROCEDIMENTO
1.Condizioni operative:
Lunghezza d’onda:
555 (530-580) nm
Cuvette :
cammino ottico 1 cm
T. costante:
15-25°C
2. Azzerare lo strumento contro acqua distillata.
3. Pipettare in cuvetta:
PRINCIPIO DEL METODO
La bilirubina viene trasformata per mezzo dell’acido sulfanilico
diazotato in azobilirubina colorata e quindi misurata
fotometricamente.Delle due frazioni presenti nel siero,la
bilirubina-glucuronide
e
la
bilirubina
libera
legata
all’albumina,solo la prima reagisce direttamente in soluzione
acquosa (bilirubina diretta),mentre la bilirubina libera richiede la
solubilizzazione con dimetilsulfosside (DMSO) per reagire
(bilirubina indiretta). Nella determinazione della bilirubina
indiretta,viene determinata anche la bilirubina diretta,e il risultato
corrisponde alla bilirubina totale.
R 1 (mL )
R 2 (µL)
Calibratore (µL)
Campioni (µL )
L’intensità del colore formatosi è proporzionale alla conc. della
bilirubina presente nel campione.
CALCOLI
-Con calibratore:
(A) camp.- (A) bianco camp. x conc. cal. = mg/dL bilirubina
(A) cal. - (A) bianco cal.
-Con fattore:
(A) camp. - (A) bianco camp. x Fattore* = mg/dL bilirubina
*Fattore :
R2
Sodio nitrito
Ac. Cloridrico (HCl)
Cal.
Bilirubina(optional)
Conc. calibratore
;
(A) cal. - (A) bianco cal.
Fattore teorico = 14
CONTROLLO QUALITA’
Si consiglia di utilizzare dei sieri di controllo per monitorare le
performance del procedimento.
Se i valori dei controlli sono al di fuori del range definito,controllare
lo strumento,i reagenti e la tecnica per determinare i problemi.
Ciascun laboratorio dovrebbe stabilire un proprio schema di
Controllo di Qualità e le azioni correttive se i controlli non rientrano
nei limiti di tollerabilità.
REAGENTI
Acido sulfanilico
Bil. diretta
1.5
50
100
100
4. Mescolare e incubare per 5 minuti a T.A.
5. Leggere l’Assorbanza (A) dei campioni e dello standard,contro il
bianco.
SIGNIFICATO CLINICO
La
bilirubina
viene
prodotta
dalla
degradazione
dell’emoglobina,insolubile in acqua. Essa viene trasportata dalla
milza al fegato ed escreta nella bile.
L’iperbilirubinemia deriva dall’aumento della concentrazione della
bilirubina nel plasma.
Cause di iperbilirubinemia:
Bilirubina
totale:aumento
dell’emolisi,errori
genetici,anemia
neonatale alterazioni eritropoietiche e farmaci.
Bilirubina
diretta:
colestasi
epatica,errori
genetici,danno
epatocellulare.
La diagnosi clinica non dovrebbe essere fatta sul risultato di un
singolo test;essa dovrebbe integrare i dati clinici e gli altri dati di
laboratorio.
R1
Bianco
1.5
---100
100
30 mmol/L
150 mmol/L
29 mmol/L
VALORI DI RIFERIMENTO
Bilirubina diretta
fino a 0.25 mg/dL = 4.27 µmol/L
Questi valori sono orientativi;ciascun laboratorio dovrebbe stabilire
un proprio intervallo di riferimento.
20 mg/dL
PRECAUZIONI
Ac. cloridrico (HCl):Causa ustioni. In caso di contatto con gli
occhi,sciacquare immediatamente con abbondante acqua e
consultare un medico.
CARATTERISTICHE DEL METODO
1. Range di misura: dal limite di detenzione di 0.04 mg/dL al
limite di linearità di 25 mg/dL. Se i valori ottenuti sono
superiori al limite di linearità,diluire il campione 1/2 con NaCl 9
g/L e moltiplicare il risultato per 2.
PREPARAZIONE:tutti i reagenti sono pronti all’uso.
CONSERVAZIONE E STABILITA’
Tutti i componenti del kit sono stabili fino alla data di scadenza
indicata sull’etichetta se conservati ben chiusi a 2-8°C,protetti dalla
luce e se si evitano contaminazioni durante l’uso.
Non utilizzare i reagenti oltre la data di scadenza.
Segnali di deterioramento dei reagenti:
-presenza di particelle e torbidità;
-sviluppo di colore nel Reagente R 2.
2.
Precisione:
Media(mg/dL)
SD
CV (%)
Intra-assay (n=20)
0.64
2.28
0.01
0.02
1.91
1.10
Inter-assay (n=20)
0.68
2.53
0.02
0.05
2.51
1.95
2.
3.
Sensibilità : 1 mg/dL= 0.073 A.
Accuratezza: i risultati ottenuti con i reagenti di questo kit non
mostrano differenze sistematiche se comparati con altri
reagenti in commercio .
I risultati delle caratteristiche dipendono dall’analizzatore utilizzato.
MATERIALE ADDIZIONALE
-Spettrofotometro o colorimetro che misuri a 555 nm (530-580).
-Cuvette con cammino ottico di 1 cm.
-Attrezzatura generale di laboratorio.
CAMPIONI
Siero o plasma,liberi da emolisi. Proteggere dalla luce diretta.
Stabilità: la bilirubina è stabile per 4 gg. a 2-8°C o 2 mesi a –20°C.
INTERFERENZE
L’emolisi causa una diminuzione dei valori nella bilirubina.
Un elenco di farmaci ed altre sostanze che interferiscono con la
determinazione della bilirubina è stato riportato in letteratura da
Young e al.
NOTE
1.Per la determinazione della bilirubina nei neonati,pipettare 50 µL
di campione. Moltiplicare i risultati x 2.
1
Rev. 0 Ed. 2007
Intermedical srl. Via A:Genovesi,13– 80010 Villaricca (NA)
Tel. +39 081 3302705 Fax +39 081 3301453
E-Mail: [email protected] Sito: www.intermedical-italy.it
2. Sono disponibili su richiesta le metodiche applicative per i più
diffusi analizzatori automatici.
BIBLIOGRAFIA
1.Kaplan A et al. Bilirubin Clin.Chem. The C.V. Mosby Co.
St.Louis.Toronto.Princeton 1984; 1238-1241, 436 and 650.
2.Malloy H.T. et al. The determination of bilirubin with the photoelectric
colorimeter J. Biol. Chem. 1937; 112,2; 481-491.
3.Martinek R. Improved micro-method for determination of serum bilirubin
Clin.Chem. 1966;Acta 13: 61-170.
4.Young DS. Effects of drugs on clin. Lab. test, 4th ed. AACC Press, 1995
5.Young DS. Effects of disease on clin. Lab. test, 4th ed. AACC Press, 2001.
6.Burtis A. et al. Tietz Textbook of Clin. Chem.,3rd ed. AACC 1999.
7.Tietz N.W. et al. Clin. Guide to Lab.Tests,3rd ed. AACC 1995.
CONFEZIONE BILIRUBINA DIRETTA
Ref.:
CH-08
Cont
: 2 x 125 mL
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Dispositivo medico-diagnostico in vitro
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2
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